基于GS/βAR/cAMP/PKA信号通路探讨蜂胶总黄酮对心肌肥厚大鼠的保护作用及分子机制

目的:基于GS/βAR/cAMP/PKA信号通路探讨蜂胶总黄酮(TFP)对异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌肥厚大鼠保护作用及分子机制。方法:将50只SD大鼠随机分为空白组(Control)组、模型组(ISO组)、阳性组(Positive组)及蜂胶总黄酮低、高剂量组(TFPL组、TFPH组)。TFPL组、TFPH组大鼠分别灌胃TFP 25、100mg/kg,灌胃14d;Positive组灌胃复方丹参片290mg/kg,灌胃14d;其余组灌胃相同剂量的0.9%氯化钠溶液。第8天除Control组外,其余组均皮下注射ISO 7d建立心肌肥厚模型。观察记录大鼠状态并绘制生长曲线;流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况;HE、Masson染色观察心脏病理情况;检测血清中TG、T-CHO、LDL-C、HDL-C以及ATP含量;Western blot法检测GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达情况。结果:TFPH组可显著降低心肌细胞总凋亡率(P<0.01),缓解心肌肥厚大鼠心肌损伤,改善心肌结构,抑制胶原纤维化;降低心肌肥厚大鼠血清中TG、T-CHO、LDL-C含量,升高HDL-C、ATP含量(P<0.05);心肌组织中GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达水平显著上升(P<0.01,P<0.05)。结论:TFP对ISO诱导心肌肥厚大鼠具有一定的保护作用,抑制心肌纤维化,降低心肌细胞凋亡,其作用机制与激活GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达有关。

优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

柴胡皂苷A调节cAMP/PKA/CREB信号通路对失眠大鼠的改善作用及机制研究

目的基于cAMP/PKA/CREB通路探讨柴胡皂苷A对失眠大鼠的改善作用及机制。方法将75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、柴胡皂苷A低剂量组(0.625 mg·kg^(-1))、柴胡皂苷A高剂量组(2.500 mg·kg^(-1))、艾司唑仑组(0.1 mg·kg^(-1)),每组15只。采用腹腔注射苯丙氨酸(PCPA,0.1 mg·kg^(-1))复制失眠大鼠模型。观察大鼠一般情况及昼夜节律;采用戊巴比妥钠翻正实验测定大鼠睡眠潜伏期及睡眠持续时间;观测大鼠睡眠时相,记录慢波睡眠第1期(SWS1)、慢波睡眠第2期(SWS2)、快速眼球运动睡眠期(REMS)时长以及总睡眠时长(TST);qRT-PCR法测定下丘脑节律基因Clock、Bmal1 mRNA及钟控基因Rev-erbα、RorαmRNA的表达水平;免疫荧光法测定海马组织NeuN表达水平;ELISA法测定脑组织中的cAMP水平;Western Blot法测定脑组织中Clock、Bmal1、Rev-erbα、Rorα及cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠昼伏夜出的节律紊乱,极度兴奋,易激惹,睡眠减少;睡眠潜伏期明显延长(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显缩短(P<0.05);神经元排列紊乱,NeuN阳性神经元IOD值明显降低(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,给药组大鼠的攻击性明显减弱,昼伏夜出有节律性,活动减少,睡眠增多;睡眠潜伏期明显缩短(P<0.05),睡眠持续时间及SWS1、SWS2、REMS、TST均明显延长(P<0.05);神经元排列紊乱情况有所恢复,NeuN阳性神经元IOD值明显升高(P<0.05);脑组织Clock、Bmal1、Rev-erbα、RorαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);脑组织cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论柴胡皂苷A可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路改善失眠大鼠的昼夜节律。

麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠炎性损伤的影响

目的:探究麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病(IBD)大鼠炎性损伤的影响。方法:将大鼠分为对照组、模型组、麦冬皂苷D低剂量组、麦冬皂苷D高剂量组和麦冬皂苷D高剂量+H-89(cAMP抑制剂)组。检测大鼠质量和大鼠结肠长度;酶联免疫吸附法检测血清IL-17、IL-6、IL-10、TNF-α、cAMP水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Th17、Treg细胞比例;HE染色检测结肠组织病理损伤;Western blot检测大鼠结肠组织中Bax、Bcl-2以及cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果:治疗结束后,与对照组相比,模型组大鼠结肠组织显著损伤,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著降低,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,麦冬皂苷D低、高剂量组大鼠结肠组织显著减轻,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著升高,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);H-89可部分逆转麦冬皂苷D对炎症性肠病大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论:麦冬皂苷D可降低IBD大鼠炎症反应和结肠组织损伤,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路实现的。

中医药从“阴阳失调”理论调控cAMP/PKA信号通路治疗注意缺陷多动障碍的研究进展

注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)难控制、易反复,严重损害儿童运动、情绪及学习生活。ADHD发病机制不明,涉及神经递质传递、神经炎症及氧化应激等,病机本质责之于“阴阳失调”。环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路的激活可诱导一系列蛋白底物磷酸化而参与运动及学习记忆的形成,并能促进神经递质合成,抑制促炎因子和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的释放而改善ADHD的核心症状,且该通路失调所导致的能量代谢障碍、神经冲动传递异常与中医“阴阳失调”理论不谋而合。中医药通过干预cAMP/PKA信号通路恢复阴阳平衡对儿童ADHD的防治发挥了重要作用,并有效解决了精神类药品在儿童中使用受限的问题。基于ADHD中医药研究的日益增多,本文阐述了cAMP/PKA信号通路的结构、传导及其与ADHD机制、中医病机及辨证分型的关系,归纳了中药复方、单体及单味中药干预cAMP/PKA信号通路治疗ADHD的研究现状,旨在为ADHD的中药药理学研究提供依据,丰富ADHD“阴阳失调”的中医理论内涵,为ADHD的防治提供新见解、新方向。

补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探究补阳还五汤通过cAMP/PKA/PPARγ通路调控脂质代谢抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机理。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、丁苯酞组及补阳还五汤低、中、高剂量组。采用短暂性大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型,补阳还五汤低、中、高剂量组予不同剂量补阳还五汤灌胃(6.413、12.825、25.65 g·kg^(-1)),丁苯酞(NBP)组予丁苯酞灌胃(54 mg·kg^(-1)),假手术组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续14 d。对大鼠进行神经行为学评分,HE染色观察大脑病理变化,试剂盒检测缺血侧磷酸胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、甘油二酯(DAG)、游离脂肪酸(FFA)含量,RT-qPCR和WesternBlot法检测环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)中mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分明显升高(P<0.01);缺血侧皮质出现病理形态损伤;PC、PE含量降低,DAG、FFA含量升高(P<0.01);cAMP的mRNA升高(P<0.05)。与模型组比较,补阳还五汤低剂量组神经功能缺损评分降低(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组神经功能缺损评分明显降低(P<0.01);各给药组细胞排列相对规整,细胞间隙减小,正常细胞增多;补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组PC、PE明显升高,DAG、FFA明显降低(P<0.01);补阳还五汤低剂量组PC升高,FFA、DAG明显降低(P<0.05,P<0.01);补阳还五汤低剂量组PPARγ的mRNA表达升高(P<0.05),补阳还五汤中、高剂量组和丁苯酞组cAMP、PKA、PPARγ的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与调控cAMP/PKA/PPARγ信号通路关键因子的表达,调节脂质代谢有关。

参榆洗液改善痔术后大鼠痛觉敏化及对cAMP/PKA信号通路的影响

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A(c AMP/PKA)信号通路探究参榆洗液对痔术后大鼠疼痛的影响。方法:构建痔术后大鼠模型,将造模成功的56只SD大鼠随机分为模型组、溶剂模型组、参榆洗液组、参榆洗液+Forskolin(c AMP/PKA信号通路激动剂)组、Forskolin组、H-89(c AMP/PKA信号通路抑制剂)组、NS-398(PGE_(2)抑制剂)组,每组8只;另取8只大鼠为空白组。各组大鼠给予对应药物干预,连续7 d。给药结束后1 d,观察大鼠一般状态及疼痛相关动物学行为,观察创面变化并计算创面愈合率,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠创面组织病理学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组大鼠背根神经节TRPV1、p-PKA蛋白表达及创面组织中c AMP、PKA蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠创面组织中c AMP m RNA、PKA m RNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测创面组织中PGE_(2)、IL-6、IL-1β含量。结果:模型组大鼠背根神经节组织中p-PKA、TRPV1及创面周围组织c AMP、PKA、PGE_(2)、c AMP m RNA、PKA m RNA、IL-6、IL-1β表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,H-89组、NS-398组、参榆洗液+Forskolin组、参榆洗液组创面组织病变程度减轻,创面愈合率依次上升,背根神经节组织中p-PKA、TRPV1及创面组织c AMP、PKA、c AMP m RNA、PKA m RNA、IL-6、PGE_(2)、IL-1β表达水平依次降低(P<0.05);Forskolin干预能显著提高痔术后大鼠模型c AMP、PKA、TRPV1、p-PKA、PGE_(2)、IL-6、IL-1β表达水平(P<0.05),与参榆洗液联合干预后,上述蛋白及炎症因子表达水平显著下降(P<0.05)。结论:参榆洗液对痔术后大鼠cAMP/PKA信号通路有抑制作用,抑制c AMP/PKA信号通路可改善痔术后痛觉敏化,其机制可能与抑制PGE_(2)表达、减少炎症因子释放、抑制TRPV1活化有关。

莫诺苷调节cAMP/PKA信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响

目的探讨莫诺苷调节环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响。方法将30只大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组和莫诺苷组,每组各10只。大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮构建帕金森病大鼠模型。莫诺苷组灌胃莫诺苷180 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组灌胃等剂量0.9%氯化钠溶液,各组均每日1次,连续灌胃14 d。采用苏木精-伊红染色观察海马神经元组织学变化;各组大鼠腹腔注射0.5 mg/kg盐酸去水吗啡,诱发大鼠向左侧选择,记录大鼠旋转持续时间和旋转频率;以酶联免疫吸附试验测定脑组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、cAMP和PKA水平;采用实时荧光定量PCR法测定cAMP/PKA mRNA表达;采用蛋白质印迹法测定cAMP/PKA蛋白表达。结果模型组和莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均高(长)于正常组,莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均低(短)于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均高于正常组,莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA水平均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA水平均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论莫诺苷可减轻帕金森病大鼠神经炎症,其机制可能与激活cAMP/PKA信号通路有关。

杞菊地黄丸联合抗VEGF通过调控cAMP/PKA信号通路治疗增殖性糖尿病视网膜病变的作用机制

目的研究旨在探讨杞菊地黄丸联合抗VEGF通过调控cAMP/PKA信号通路治疗增殖性糖尿病视网膜病变患者的作用机制。方法将2022年1月—2024年3月宁德师范学院附属宁德市医院眼科收治的204例增殖性糖尿病视网膜病变患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为对照组(给予抗VEGF治疗)和试验组(给予杞菊地黄丸联合抗VEGF治疗)各102例,对比两组疗效,观察治疗前、治疗后视力相关指标、VEGF、Ang-1水平及cAMP/PKA信号通路。结果试验组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后两组眼部相关指标(视力、眼压、视野灰度值、黄斑中心凹厚度)水平均优于治疗前(P<0.05);试验组眼部相关指标(视力、眼压、视野灰度值、黄斑中心凹厚度)水平优于对照组(P<0.05)。治疗后两组VEGF、Ang-1水平低于治疗前(P<0.05);试验组VEGF、Ang-1水平低于对照组(P<0.05)。治疗后两组cAMP水平高于治疗前,PKA水平低于治疗前(P<0.05);试验组cAMP水平高于治疗前,PKA水平低于对照组(P<0.05)。结论杞菊地黄丸联合抗VEGF能够通过调控cAMP/PKA信号通路,发挥治疗增殖性糖尿病视网膜病变患者的作用。

脾虚痰浊证大鼠主动脉cAMP/PKA信号通路变化的实验研究

目的:观察脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路变化,探讨其信号通路变化与脾虚痰浊证的关系。方法:16只SD大鼠,每组8只,随机分为空白对照组、脾虚痰浊组。全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDLC水平,ELISA法检测血浆中c AMP浓度,RT-PCR和Western blot检测肝脏GP、CREB、PKA和PHK蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,TG含量显著增高,主动脉c AMP活性显著降低,GP、CREB、PKA、PHK mRNA含量显著下降,GP、CREB、PKA、PHK蛋白表达显著下降。结论:脾虚痰浊证大鼠主动脉c AMP/PKA信号通路的改变可能与调控血脂代谢相关基因GP、CREB、PKA、PHK的表达有关。

补骨脂甲素介导cAMP/PKA/CREB信号通路调控促进骨髓MSC成骨分化作用研究

目的:观察补骨脂甲素不同剂量单体对大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达的影响,探讨补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:以成骨转化诱导液组作为阳性对照组,小牛血清组为空白对照组,用高、中、低3种剂量补骨脂甲素对大鼠骨髓间充质干细胞分别干预6、9、12 d。ELISA法检测第6、9、12天,大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白含量;ELISA法及qRT-PCR法检测第9天大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达。结果:各用药组均能提高大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白表达,第9天达到峰值。补骨脂甲素能够上调PKA、CREB mRNA及蛋白表达,补骨脂甲素高剂量组效果最显著。结论:补骨脂甲素能够促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其作用机制可能与cAMP/PKA/CREB信号通路的活化有关。

基于胃肠组织cAMP/PKA信号转导通路变化研究大鼠脾气虚证模型与线粒体损伤模型的相关性

【目的】基于胃肠组织cAMP/PKA信号转导通路的变化研究大鼠脾气虚证模型与线粒体损伤模型的相关性,探讨脾气虚证的生物学机制。【方法】采用饮食不节加力竭游泳法复制脾气虚证大鼠模型,采用腹腔注射鱼藤酮法复制线粒体损伤大鼠模型。采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测大鼠胃肠组织环磷酸腺苷(cAMP)含量,分别采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测大鼠胃肠组织蛋白激酶A(PKA)、糖原磷酸化酶(Gp)、磷酸化酶激酶(PHK)的mRNA和蛋白的表达情况。【结果】脾气虚证模型大鼠胃肠组织cAMP含量及PKA、Gp、PHK mRNA和蛋白的表达水平与线粒体损伤模型大鼠无显著性差异。【结论】脾气虚证的现代生物学机制可能与机体线粒体损伤时cAMP/PKA信号转导通路的变化有关。

基于cAMP/PKA信号通路探讨通脉养心丸对缓慢性心律失常大鼠心率的影响

目的基于cAMP/PKA信号通路探讨通脉养心丸对缓慢性心律失常的干预作用及机制。方法将40只健康雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、通脉养心低剂量组、通脉养心高剂量组,每组10只。空白组大鼠实验全程灌胃生理盐水;模型组大鼠上午灌胃盐酸普萘洛尔诱发缓慢性心律失常,下午灌胃生理盐水;通脉养心低、高剂量组上午灌胃盐酸普萘洛尔诱发缓慢性心律失常,下午分别灌胃通脉养心丸2 g/kg和4 g/kg。各组均连续灌胃4周。测定各组大鼠干预前及干预2周、干预4周后心率;处死各组大鼠,ELISA法测定心肌组织中cAMP、PKA含量,PCR法和Western blot法分别检测心肌组织中cAMP、PKA、L型钙通道α1C亚基(CACNA1C)mRNA及蛋白表达情况。结果干预2周和4周后模型组大鼠心率均明显慢于同期空白组(P均<0.05),通脉养心低、高剂量组均明显快于同期模型组(P均<0.05),且干预4周后通脉养心高剂量组大鼠心率明显快于通脉养心低剂量组(P<0.05)。模型组大鼠心肌组织中cAMP、PKA含量均明显低于空白组(P均<0.05);通脉养心低、高剂量组大鼠心肌组织中cAMP含量及通脉养心高剂量组大鼠心肌组织PKA含量均明显高于模型组(P均<0.05),通脉养心低、高剂量组大鼠心肌组织中cAMP、PKA含量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组大鼠心肌组织中cAMP、PKA、CACNA1C mRNA及蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均<0.05);通脉养心高剂量组大鼠心肌组织中cAMP、PKA、CACNA1C mRNA及蛋白相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),通脉养心低剂量组仅cAMP蛋白相对表达量明显高于模型组(P<0.05);通脉养心高剂量组大鼠心肌组织中cAMP、PKA、CACNA1C mRNA及蛋白相对表达量与通脉养心低剂量组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论通脉养心丸能够提升缓慢性心律失常大鼠心率,其作用机制可能与激活cAMP/PKA信号通路进而磷酸化L型钙通道有关。

转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系

目的探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系。方法抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组(231组)和转染LKB1基因的MDA-MB-231(LKB1组)两组,每组分别采用0、5×10-6、1×10-5、2×10-5 mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明(cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT-PCR法和Western blot法检测SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平。结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10×10-6 mol/L时最明显,继续增加环靶明浓度到20×10-6 mol/L,抑制效果保持不变。231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6 mol/L时达到最高,继续增加环靶明浓度到20×10-6 mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变。在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值。结论抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10×10-6 mol/L时效果最明显;推测存在LKB1-SHH-cAMP/PKA通路。

cAMP-PKA信号转导通路在调节胎盘滋养细胞分化中的作用

人类胚胎的着床、胚胎和胎盘的发育与胎盘滋养细胞的生物学紧密相关。绒毛外和绒毛中的滋养细胞是胎盘解剖学界面的胚胎／胎儿组织，在所有胎盘成分中，滋养细胞在结构、功能和进展上最具多变性。正常妊娠时滋养细胞分化等生物学行为受到严格调控；当遗传或外界因素致调控因素或机制失衡，导致滋养细胞分化异常，可能参与病理妊娠如流产、子痫前期、妊娠期高血压疾病等的发病。

低频脉冲电磁场通过cAMP/PKA信号通路促进成骨细胞分化的研究

目的研究50 Hz 0.6 m T低频脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)是否通过cAMP/PKA信号通路促进成骨细胞分化。方法体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs),传代融合后采用50 Hz 0.6 m T低频脉冲电磁场处理不同时间后检测细胞内cAMP浓度及PKA磷酸化水平的变化。使用2',3'-双脱氧腺苷(DDA)抑制细胞内腺苷酸环化酶(AC)活性,检测经低频脉冲电磁场刺激后细胞碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨性基因转录的变化;使用KT5720抑制PKA的磷酸化,检测经低频脉冲电磁场刺激后细胞成骨性基因转录及蛋白表达的变化。结果采用50 Hz 0.6 m T低频脉冲电磁场处理20 min后,ROBs内cAMP浓度显著升高,持续至40 min后迅速下降,至2 h时再次升高,p-PKA亦表现出同样的变化趋势,说明低频脉冲电磁场激活了cAMP/PKA信号通路;使用DDA抑制腺苷酸环化酶活性后,由低频脉冲电磁场引起的ALP活性及成骨性基因转录升高显著下降,同样使用KT5720抑制PKA磷酸化后,由低频脉冲电磁场引起的成骨性基因转录及蛋白表达亦下降,说明cAMP/PKA信号通路参与低频脉冲电磁场促进ROBs分化的过程。结论 50 Hz 0.6 m T低频脉冲电磁场通过cAMP/PKA信号通路促进ROBs分化。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨麻黄生物碱组分对过敏性哮喘大鼠的抗炎机制

目的 探究麻黄生物碱组分对过敏性哮喘大鼠肺部炎症的作用及机制。方法 将32只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、麻黄生物碱组(37.79 mg·kg^(-1))、地塞米松组(0.075 mg·kg^(-1))。采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝凝胶佐剂致敏结合OVA雾化激发的方法建立过敏性哮喘大鼠模型。第1天和第8天,大鼠腹腔注射致敏液(Ⅴ级OVA 10 mg+氢氧化铝10 mg)致敏;第15天至第21天灌胃给药30 min后,用2%Ⅱ级OVA雾化激发40 min。检测大鼠喘息次数和喘息潜伏时间;采用HE染色法观察大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中的白细胞介素4(IL-4)、免疫球蛋白E(IgE)、干扰素γ(IFN-γ)水平,以及肺组织匀浆和血清中的环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot法检测肺组织中蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、IL-6、磷酸化信号传导子及转录激活子3(p-STAT3)蛋白表达水平;RT-qPCR法检测肺组织中IL-6、STAT3、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠的喘息潜伏时间显著缩短(P<0.01),喘息次数、炎症评分显著升高(P<0.01);肺泡灌洗液中的IL-4、IgE水平显著升高(P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);肺组织匀浆及血清中的cAMP含量明显降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中PKA、CREB蛋白表达明显下调(P<0.05),IL-6、p-STAT3蛋白表达显著上调(P<0.01);肺组织中IL-6、STAT3、IL-1β、TNF-α mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠的喘息潜伏时间明显延长(P<0.05,P<0.01),喘息次数、炎症评分显著降低(P<0.01);肺泡灌洗液中的IL-4、IgE水平显著降低(P<0.01),IFN-γ水平显著升高(P<0.01);肺组织匀浆及血清中的cAMP含量明显升高(P<0.05,P<0.01);肺组织中PKA、CREB蛋白表达显著上调(P<0.01),IL-6、p-STAT3蛋白表达显著下调(P<0.01);肺组织中IL-6、STAT3、IL-1β、TNF-α mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论 麻黄生物碱组分可能通过cAMP/PKA/CREB信号通路改善过敏性哮喘大鼠的肺部炎症。

低氧预适应下BDNF/TrkB和cAMP/PKA信号通路调控电压依赖性钙离子通道的研究进展

本文探析了低氧预适应对神经系统的保护作用尤其是改善学习记忆能力的相关机制,回顾了电压依赖性钙离子通道在神经系统中的作用以及与学习记忆之间的关系。重点总结了低氧预适应诱导下电压依赖性钙离子通道特性的变化情况,并深入归纳了BDNF/TrkB和cAMP/PKA信号通路对电压依赖性钙离子通道的调节机制以及低氧预适应与这些信号通路之间的关系。通过总结低氧预适应调控BDNF/TrkB和cAMP/PKA信号通路影响电压依赖性钙离子通道相关的最新研究进展,为将来阐明低氧预适应提升认知能力的可能机制奠定理论基础。

清解止抽口服液对抽动障碍大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响

目的:探讨清解止抽口服液对抽动障碍(TD)大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响。方法:40只SD大鼠随机抽取30只腹腔注射亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile,IDPN)7 d造模成TD大鼠,将30只TD大鼠随机分为B、C、D组,未造模处理的SD大鼠为A组。随后进行药物治疗,其中A组和B组灌胃灭菌蒸馏水,C组灌胃氟哌啶(haloperidol),D组灌胃清解止抽口服液,持续14 d。记录大鼠造模7 d和灌胃7、14 d的体质量、刻板行为评分、运动行为评分。治疗14 d后取大鼠纹状体检测DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量。结果:灌胃14 d,C、D组运动行为、刻板行为评分均低于B组(P<0.05)。B、C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均低于A组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均高于B组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:清解止抽口服液能够明显改善TD模型大鼠的运动行为和刻板行为,调节AC/cAMP/PKA信号通路代谢。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元的影响

目的探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为假手术组,取50只SD大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、多奈哌齐组及醒脑益髓汤低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,多奈哌齐组给予0.45 mg/mL的多奈哌齐溶液灌胃,醒脑益髓汤低、中、高剂量组分别给予0.98 g/mL、1.96 g/mL、3.92 g/mL的醒脑益髓汤灌胃,均1次/d,连续30 d。定位航行实验和空间探索实验观察大鼠行为学改变,TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中cAMP及脑源性神经营养因子(BDNF)含量,Western blot法检测海马组织中PKA和CREB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显减少(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显延长(P<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显缩短(P<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显增加,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,多奈哌齐组及醒脑益髓汤各组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显增加(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显缩短(P均<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显延长(P均<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显减少,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);醒脑益髓汤中剂量组各指标改善更明显,与醒脑益髓汤高、低剂量组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论醒脑益髓汤可以改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控cAMP/PKA/CREB信号通路关键因子的表达,减少神经元凋亡有关。