Anti-hEGFR轻、重链共表达及高表达细胞株快速筛选

为实现h EGFR全长抗体(anti-h EGFR)轻、重链共表达以及建立快速、高效筛选方法并获得共表达细胞株。采用分子克隆技术获得重链和轻链基因,将之连入peedual真核表达载体;经GS-Neo加压及流式细胞术筛选获得稳定表达细胞株;通过protein A亲和层析技术纯化出目标抗体;应用cck-8法、Annexin V/PI法以及q PCR技术检测anti-h EGFR对A431细胞增殖、凋亡影响。SDS-PAGE分析结果显示,纯化后抗体纯度为95.0%、分子质量约为150 ku。cck-8试验中不同浓度anti-h EGFR对A431细胞增殖均有极显著抑制作用,且与商品化Cetuximab效果相近;anti-h EGFR与Cetuximab均可诱导A431细胞产生凋亡,作用效果相近,均达极显著。全长抗体轻、重链的共表达,省去分别表达的重组过程,保证抗体天然结构;GS-Neo双加压结合流式筛选,实现阳性细胞株快速、高效分离;建立省时、高效抗体共表达平台,为抗体类药物真核构建及筛选提供新思路。