酵母硒对肉鸡血清中GSH-Px、GSTs活性的影响

试验研究了不同硒源、不同硒剂量饲喂肉鸡后,血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及谷胱甘肽硫-转移酶(GSTs)活性的变化。将白羽雏鸡200只随机分成5组,基础日粮饲喂的为对照1组(处理Ⅰ),空白酵母饲喂的为对照2组(处理Ⅱ),加硒处理为亚硒酸钠组(处理Ⅲ)、酵母硒低剂量组(处理Ⅳ)、酵母硒高剂量组(处理Ⅴ),每组40只,试验期50d。用比色法测定血清中GSH-Px及GSTs活性。结果显示,处理Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ对GSH-Px的活性影响极显著地高于处理Ⅰ、Ⅱ(P<0.01),但处理Ⅰ与处理Ⅱ间差异不显著(P>0.05),且处理Ⅳ明显高于处理Ⅲ。鸡血清中GSTs的活性在处理Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ间差异均不显著,且与处理Ⅰ、Ⅱ间差异不显著(P>0.05)。试验证实,酵母硒能显著增高血清中GSH-Px的活性,增强机体的抗氧化能力,对GSTs活性的动态平衡具有一定的调节作用。

参芪地黄汤通过GPX4信号通路调控糖尿病肾病小鼠铁死亡的机制研究

[目的]研究参芪地黄汤对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)模型小鼠的治疗效果及调控谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对铁死亡的影响。[方法]通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)联合高脂饮食诱导建立DN小鼠模型,并灌胃不同剂量的参芪地黄汤。通过检测各组小鼠体质量、血糖、肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿蛋白,肾石蜡切片苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及过碘酸-雪夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色评估参芪地黄汤对DN模型小鼠的治疗作用;通过检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)水平,评估参芪地黄汤对DN模型小鼠脂质过氧化水平的影响;通过检测总Fe水平以及转铁蛋白(transferin)、前列腺6跨膜上皮抗原3(six-transmembrane epithelial antigen of prostate 3,Steap3)蛋白水平评估参芪地黄汤对DN模型小鼠铁死亡的影响;通过检测还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(glutathione/oxidized glutathione,GSH/GSSG)水平以及溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、溶质载体家族3成员2(solute carrier family 3 member 2,SLC3A2)、GPX4、谷氨酸-半胱氨酸连接酶(glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)、谷胱甘肽合成酶(glutathione synthetase,GSS)蛋白水平来评估参芪地黄汤对DN模型小鼠GPX4信号通路的影响。[结果]与模型组比较,参芪地黄汤干预可明显提升DN模型小鼠体质量(P<0.01);降低DN小鼠血糖、Cr、BUN及24 h尿蛋白水平(P<0.05,P<0.01);同时改善DN模型小鼠肾组织病理学变化;降低MDA、ROS、4-HNE水平(P<0.01);降低总Fe水平(P<0.05,P<0.01)以及transferin、Steap3蛋白水平(P<0.05);升高GSH/GSSG比例(P<0.01)以及SLC7A11(P<0.05)、SLC3A2、GPX4、GCLC、GSS蛋白水平(P<0.05,P<0.01)。[结论]参芪地黄汤对DN模型小鼠具有治疗作用,并且可以减轻脂质过氧化水平,其作用机制可能与通过调控GPX4信号通路抑制铁死亡有关。

镉胁迫下两种水稻GSH和GST应答差异的研究

还原型谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽转硫酶(GST)是水稻解毒系统中的重要组成部分。采用水培法研究了耐性不同的两种水稻(特优559和K优818)在不同程度镉(Cd)胁迫下GSH和GST的变化情况。结果表明,Cd处理导致两种水稻生物量减少、Cd吸收积累增加,水稻根部Cd含量和积累量均高于地上部,但Cd从水稻根部向地上部的转运存在明显的种间差异,耐性较弱的特优559的Cd转移率(S/R)随处理Cd浓度提高而上升,而耐性较强的K优818则恰好相反,将Cd更多地钝化在根部。两种水稻GSH和GST的变化趋势也有所不同,Cd胁迫使特优559的GSH含量和GST活性显著增加,而K优818的GSH在低浓度Cd处理时出现了小幅下降,但其GST活性变化与特优559相似,根部增幅更为显著。以上结果说明,水稻GSH和GST在Cd解毒和钝化过程中发挥了重要的作用,而且其应答机制存在着一定的基因型差异,这可能与两品种GST同功酶的组成、表达和功能不同有关。

恩诺沙星对2种鲟GST和GSH酶系活性影响的比较

将恩诺沙星(enrofloxacin)按照0、20、40、60、80、100 mg/kg的浓度,对小体鲟及史氏鲟口服给药5 d,停药2 d后对其血浆及肝脏组织中GST活性及GSH含量进行测定。结果表明:2种鲟血浆和肝脏组织中GST活性和GSH含量均随着给药浓度升高呈现先升高再降低的规律性变化,并在40 mg/kg给药浓度时达到最大值,小体鲟血浆及肝脏中GST活性分别为23.235、68.670 U/mgpro,GSH含量分别为27.616、39.317 mg/g pro;史氏鲟分别为42.835、101.835 U/mg pro,27.852、51.192 mg/g pro。2种鲟肝脏组织中GST和GSH酶系的变化幅度明显大于血浆中,且史氏鲟血浆和肝脏组织在各给药浓度下GST活性和GSH含量均高于小体鲟。

过表达SHC3激活AKT/Nrf2/GSH通路保护帕金森病氧化应激损伤

目的 研究过表达含有Src同源结构域2的衔接蛋白(SHC)3对帕金森病(PD)氧化应激损伤的影响及其机制。方法 运用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理PC12细胞构建PD模型,将PC12细胞分为正常组、模型组、模型+NC组、模型+SHC3组;用qRT-PCR法检测各组细胞中SHC3mRNA表达;Western印迹检测各组细胞中SHC3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)/Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、核因子NF-E2相关因子(Nrf)2的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 与正常组相比,成功构建PC12细胞损伤模型,且MPP+损伤的PC12细胞可显著下调SHC3表达,上调ROS、MDA、LDH含量,下调GSH含量,显著降低细胞活性,促进细胞凋亡,显著下调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,上调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。与模型+NC组相比,成功构建过表达SHC3的PC12细胞损伤模型,且过表达SHC3可降低ROS、MDA、LDH含量,升高GSH含量,显著升高细胞活性,显著抑制细胞凋亡,显著上调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,下调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。结论 过表达SHC3可保护PD的氧化应激损伤,其机制可能与激活AKT/Nrf2/GSH通路有关。

大鼠MCAO模型中GST、GSH以及超微结构的改变

目的自由基造成的氧化损伤是卒中后脑损伤的重要原因之一。谷胱甘肽（Glutathione,GSH）,是细胞抵抗氧化应激损伤的重要分子。谷胱甘肽S-转移酶（Glutathione Stransferase,GST）是一组与GSH相关的Ⅱ相酶,与GSH的应用密切相关,而线粒体是细胞内氧化还原反应的重要场所,揭示脑缺血早期不同时间点GST、GSH以及脑细胞内超微结构尤其是线粒体的变化,对阐明脑缺血中自由基造成的氧化损伤机制具有重要的意义。方法本研究在制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型的基础上,对不同时间点GST蛋白表达、GSH水平以及脑细胞内超微结构的变化进行了观测。结果 MCAO6h后GSH水平出现下降趋势,24~48h后GSH水平明显低于假手术组,GST蛋白表达也明显下降,线粒体出现肿胀、嵴断裂,神经纤维髓鞘结构紊乱,甚至发现部分神经元高尔基体、内质网结构破坏,细胞坏死、液化现象。结论 MCAO早期就已经出现抗氧化能力的下降,表现为线粒体破坏,GSH下降,GST蛋白表达降低。所以缺血性卒中早期提高机体的抗氧化能力以对抗氧化应激会发挥保护神经元、减少脑损伤的作用。

温下方含药血清对肺腺癌耐药细胞内GSH、GST-π的影响

目的:研究温下方含药血清对肺癌耐药细胞内谷胱苷肽(GSH)、谷胱苷肽转移酶-π(GST-π)及顺铂(DDP)含量的影响。方法:实验动物分为3组,灌服给药,制备温下方大剂量含药血清,温下方小剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为4组,DDP干预组,大剂量含药血清+DDP干预组,小剂量含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组,分别孵育人肺腺癌耐药细胞株(A549/DDP)24h后,检测细胞内GSH含量及GST-π的表达,细胞内顺铂浓度。结果:A549/DDP细胞经温下方大、小剂量含药血清作用后,与对照组比较,细胞内GSH含量降低至3.55±0.65,3.54±0.74nmol/106(P<0.01);GST-π表达分别降低至1.64±0.08,1.63±0.09(P<0.05);细胞内铂含量分别增高至89.34±11.65,78.78±10.19(P<0.05)。结论:温下方含药血清能降低肺腺癌耐药细胞内GSH含量及GST-π的表达,提高耐药细胞内铂含量,从而增强耐药细胞对DDP的敏感性而逆转耐药。

家蚕氟中毒血淋巴中GST和GSH合成酶系活性变化

谷胱甘肽硫-转移酶(glutathione S-transferases,GST)是一组具有多种生理功能的蛋白质,主要存在于细胞质中.在哺乳类动物各组织中均含有不同种类的GST,其含量和活性亦各不相同,其中以肝脏中含量最高.GST能催化还原型谷胱甘肽上的巯基(-SH)结合到疏水化合物上,使疏水性的化合物变成亲水性的物质,从而使之容易从胆汁或尿液中排泄,通过这种方式将体内各种有潜在毒性的亲脂性化合物排出体外,因此GST是一种重要的解毒酶.由于结合解毒是动物体内主要的解毒方式,所以当组织内GST活性受到抑制时,将导致机体解毒作用的减弱.

乙醇慢性摄入染毒对大鼠肝脏ADH和GST活性、GSH含量的影响

给实验动物慢性摄入乙醇平均每只每天量为８．０ｇ／ｋｇ体重，历时９０天。结果显示：（１）大鼠肝细胞浆中醇脱氢酶（ＡＤＨ）和谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）活性，染毒组较对照组均明显减低（Ｐ＜０．０１）；（２）大鼠肝细胞浆内谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量染毒组较对照组也明显减低（Ｐ＜０．０１）。提示ＡＤＨ和ＧＳＴ活性及ＧＳＨ含量在酒精性肝病发病中起着重要作用。

不同价态无机砷对罗非鱼肝脏砷积累及GSH/GST解毒代谢的影响

低剂量中长期暴露下的氧化胁迫是砷对水生生物致毒的重要机制之一。本文通过对罗非鱼进行32 d的食物相砷暴露,测定不同时间点罗非鱼肝脏中谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量和谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性,揭示不同价态无机砷对罗非鱼肝脏中GSH/GST的影响机制。经三价砷(As(III))暴露后,砷含量在2 d内显著增加而在随后的30 d内无显著性差异; 0～2 d内GSH含量显著增加,后降低,13 d后GSH含量均低于空白组; 0～6 d GST活性均大于空白组,6～8 d GST活性降低,8 d后活性高于空白组,且32 d达到最大值。经五价砷(As(V))暴露后,罗非鱼肝脏中砷含量逐渐增加,在20 d时达到最大值而后无显著性差异; 0～2 d时GSH含量降低,随后逐渐增加,在16 d达到最大值,16 d后GSH含量均低于空白组; 0～8 d时GST被大量诱导合成,8～20 d时GST合成被抑制,20 d后活性增加,在32 d达到最大值。As(III)和As(V)对罗非鱼GSH/GST的不同影响与其在罗非鱼体内的积累量有关。As(III)暴露后各时间点罗非鱼肝脏中的砷含量与GSH含量呈统计学正相关,而As(V)暴露无明显相关性。这是因为As(V)进入罗非鱼肝脏后会还原为As(III),进而GSH作为可提供巯基的还原剂而被大量消耗。另外,As(III)暴露后各时间点罗非鱼肝脏中的砷含量与GST活性呈显著负相关,而As(V)暴露却呈现出很强的滞后性,这是由于进入生物体内的As(V)需转化为As(III)后,才可直接作用于酶系统。可见,不同形态砷对水生生物的致毒机制需进一步深入研究。

维生素A和3-甲基胆蒽体外致畸作用及其与GSH-GST变化的关系

用妊娠第14天大鼠胚胎中脑神经细胞作微团培养,培养物接触维生素A(VitA)和3-甲基胆蒽(3-MCA)后,微团中的集落形成率明显降低,半数分化抑制浓度分别为10ng/ml和1.0ng/ml,有明显的致畸性。在培养12小时内,还原型谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽S-转移酶(GST)水平明显降低,24小时后逐步快复正常,而GST活性继续升高,于48小时达最大值。这两种化学物的体外致畸作用可能与GSH耗竭有一定关系。

发酵乳中SOD、CAT、GSH-Px、GST活性的变化

10份鲜牛乳98℃煮沸5min后,用乳酸菌发酵制作酸乳。测定了发酵前后乳中SOD、CAT、GSH-Px、GST的变化。发酵前4种酶的活性分别为:45.68±7.81、1.46±1.78、156.67±37.51(GSH-PX活力单位),65.81±25.47;发酵后各酶的活性分别为73.47±5.27、0.44±0.50、0、5.42±3.25。发酵乳SOD活性升高60%多,CAT降低近73%,GST降低近92%,GSH-Px活性全部丧失(P<0.01)。

牛乳中GSH-Px、GST及其热稳定性研究

用去蛋白和不去蛋白两种处理方法对8头成年黑白花乳牛的乳中GSH-Px和GST的活性进行了测定;并研究了这两种酶的热稳定性。结果表明:新鲜乳和75℃消毒15s、98℃煮沸1min后的乳中GSH-Px的活性分别为118.56±97.08、25.67±23.19,0(GSH-Px活力单位);GST的活性分别为52.71±20.46、25.85±18.59,15.76±6.58(U/mL)。GST有更高的耐热性;去蛋白和不去蛋白两种处理方法对两种酶活性无显著影响(P>0.05)。

芦荟苷通过调控AMPK/NRF-2/GSH通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚

目的探讨芦荟苷(ALO)对小鼠心肌肥厚的保护作用及其分子机制。方法将30只C57小鼠随机分为5组:对照组、异丙肾上腺素(ISO)组、ALO干预组(低剂量组(ISO+low-dose ALO,I+L-A)、中剂量组(ISO+middle-dose ALO,I+M-A)、高剂量组(ISO+high-dose ALO,I+H-A)。ISO组:每日腹腔注射ISO;ALO干预组:在ALO灌胃的同时腹腔注射ISO;对照组:每日予以等量生理盐水腹腔注射及灌胃。以上各组每天处理1次,连续15 d后处死小鼠、称重,计算小鼠心脏体质量比(HW/BW);hematoxylin-eosin染色(HE)及Masson染色观察心脏形态和纤维化程度;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定心肌细胞肥大相关基因心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的mRNA表达;为检测组织中氧化还原情况,分光光度法测定抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)及硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化指标-丙二醛(MDA);Western Blot法测定心肌组织肥大标志物BNP、心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CKMB)、抗氧化通路AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/磷酸化AMPK(p-AMPK)及转录因子E2相关因子2(NRF-2)的蛋白表达。结果与对照组比,ISO组HW/BW升高(P<0.05),HE及masson染色提示心肌细胞排列紊乱、细胞形状改变、纤维化增多,ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平上调,MDA含量增加和GSH减少,p-AMPK/AMPK比值、CKMB、NRF-2蛋白表达减少;ALO干预后,小鼠HW/BW下降,心肌细胞变形及纤维化程度明显改善,肥厚相关基因表达明显减少,抗氧化通路AMPK/NRF-2/GSH的表达增加。结论ALO能抑制心肌肥厚的发生发展,其机制可能与增强AMPK/NRF-2/GSH通路的激活有关。

丙二醛引起草鱼肠道、肝胰脏谷胱甘肽/谷胱甘肽转移酶通路抗氧化应激

为了研究丙二醛(MDA)对草鱼肠道、肝胰脏抗氧化防御能力的影响,以谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽转移酶(GSTs)通路为研究对象,选择初始体重(74.8±1.0)g的草鱼(Ctenopharyngodon idelluspond),随机分为4组,每组设3个重复,每个重复20尾。4组草鱼分别投喂基础饲料(对照组)以及在基础饲料中添加61(B1组)、124(B2组)、185 mg/kg(B3组)MDA的试验饲料,在池塘网箱养殖72 d后,测定肠道、肝胰脏和血清中MDA和GSH含量,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法测定草鱼肠道、肝胰脏GSH/GSTs通路中谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、谷胱甘肽还原酶(GSR)、pi-谷胱甘肽硫转移酶(GSTpi)、微粒体谷胱甘肽硫转移酶1(MGSt1)基因表达量。结果显示:1)与对照组相比,除B3组肝胰脏MDA含量显著升高(P<0.05)外,其余试验组肠道、肝胰脏MDA含量均无显著变化(P>0.05);各试验组血清MDA含量均显著升高(P<0.05)。2)与对照组相比,除B1、B3组肠道GSH含量显著升高(P<0.05)外,其余试验组肠道、肝胰脏GSH含量均无显著变化(P>0.05);B1、B2组血清GSH含量显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,B2、B3组肠道及B1组肝胰脏GCLC表达量显著上调(P<0.05);除B2组肠道G SR表达量显著上调(P<0.05)外,其余试验组肠道和肝胰脏G SR表达量均无显著变化(P>0.05);B2、B3组肠道及B3组肝胰脏GSTpi表达量显著上调(P<0.05);B3组肠道MGST1表达量显著上调(P<0.05);各试验组肝胰脏MGST1表达量均显著下调(P<0.05)。结果表明,MDA引起草鱼肠道、肝胰脏GSH/GSTs通路抗氧化应激反应,且肠道和肝胰脏受M DA的影响程度有一定的差异。

AgNO_3和低温处理对小麦细胞GST及GR酶活性的影响

研究了AgNO3 和低温处理对小麦悬浮细胞谷胱甘肽转移酶 (GST)及谷胱甘肽还原酶 (GR)酶活性的影响 .结果表明 ,AgNO3 和低温处理对小麦细胞再生的影响因处理时间的不同而有差异 ,在处理的4d内低温处理使再生率明显增加 ,AgNO3 处理 2d使细胞再生率显著增高 ,但处理 4d则对细胞再生无明显影响 .低温处理使细胞蛋白质含量明显升高 ,AgNO3 处理对小麦细胞蛋白质含量无明显影响 .小麦细胞GST活性随处理时间的延长而迅速降低 ,AgNO3 处理对GST活性无明显影响 ,但低温处理明显延缓GST活性降低 .AgNO3 和低温处理都使小麦细胞GR酶活性明显降低 .AgNO3 处理 2d和低温处理对细胞谷胱甘肽 (GSH )含量无明显影响 ,但在处理的第 4dAgNO3 使细胞GSH含量明显降低 .

氧化鱼油对草鱼肠道黏膜抗氧化应激通路基因表达水平的影响

为了探讨氧化鱼油对草鱼肠道黏膜损伤后,参与抗氧化应激的基因通路及其通路基因表达活性的变化,以草鱼为试验对象,灌喂氧化鱼油7d后,采集肠道黏膜组织并提取总RNA,采用RNA-seq方法,进行了氧化鱼油组和正常鱼油组草鱼肠道黏膜基因注释、IPA基因通路分析和基因表达活性差异分析。结果显示,组织切片观察发现氧化鱼油导致草鱼肠道黏膜出现严重的损伤;肠道黏膜中具有较为完整的"Keap1-Nrf2-ARE"基因调控通路。肠道黏膜在受到氧化鱼油的氧化损伤作用后,激活了细胞的抗氧化损伤保护机制,使NRF2介导的氧化应激反应通路基因差异表达显著性地上调,并导致了下游的GSH/GSTs通路基因差异表达显著性上调,促进了GSH的生物合成和GSTs的抗氧化作用;导致"Keap1-Nrf2-ARE"信号通路下游的热休克蛋白和泛素-蛋白酶体通路基因差异表达显著性上调,清除受损伤蛋白质,保护细胞结构完整性。研究表明,上述三类抗氧化应激通路构成了对肠道黏膜损伤细胞、损伤蛋白质的降解系统和清除系统,显示其对肠道黏膜组织和黏膜细胞的保护、修复发挥了重要的作用。

单环刺螠对六价铬暴露响应的转录组学分析

六价铬[hexavalent chromium,Cr(VI)]是海洋中常见的重金属污染元素之一。为探究Cr(VI)对海洋底栖动物的毒性作用,采用高通量测序技术(RNA-seq)对Cr(VI)暴露前后单环刺螠(Urechis unicinctus)体腔细胞进行转录组测序和比较分析。结果表明:Cr(VI)暴露后,筛选到1 352个差异表达基因(DEGs),其中有729个基因表达上调,623个基因表达下调。GO功能注释显示,DEGs主要富集于催化活性、结合、转运体活性、信号转导和抗氧化活性等功能。451个DEGs被注释到172个KEGG信号通路中,主要富集于真核生物核糖体生物合成、醚脂代谢、高级糖基化终末产物-受体信号通路和谷胱甘肽代谢等通路。q PCR结果显示荧光定量结果与转录组测序结果一致,证实了转录组测序结果的可靠性。本研究推测Cr(VI)暴露可激活单环刺螠GSH代谢通路,与通路相关的GSH、GST、PRDX6、RRM1、γ-GT等基因在抵御Cr(VI)暴露过程中发挥重要作用,研究结果可为重金属对海洋底栖动物的毒性机制和水环境监测研究提供参考。

海藻糖氧钒对小鼠胃肠道的氧化损伤以及Vc和GSH的抗氧化保护作用

目的探讨海藻糖氧钒(VT)对小鼠胃肠道的氧化应激损伤、GSH/GSTs通路基因表达的影响以及维生素C(Vc)和还原型谷胱甘肽(GSH)的保护作用。方法 30只雄性昆明小鼠随机分组:VT组(B组)、Vc+VT组(C组)、GSH+VT组(D组)、Vc+GSH+VT组(E组),每天灌服VT(125mg/kg),而正常对照组(A组)灌服等量生理盐水,Vc和GSH在VT给药前1h灌服,连续15d。取各组小鼠胃和十二指肠,DTNB法测定GSH含量,谷胱甘肽氧化法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,实时荧光定量PCR法检测GSH/GSTs通路相关基因GCLC、GSS、GSR和GSTpi的表达。结果 VT组胃、十二指肠的GSH含量、GSH-Px活性及GCLC、GSS、GSR和GSTpi的表达均低于A组(P<0.05)。C、D、E组各指标显著提高,但仅E组小鼠胃组织的指标恢复到正常对照组水平。C组和D组除十二指肠中GSR表达显著差异外,其余指标差异均无统计学意义。结论灌服VT对小鼠胃肠道产生一定的氧化应激损伤,并可影响GSH含量和GSH-Px活性以及GSH/GSTs通路相关基因的正常表达。外源补充Vc、GSH及两者联用有一定的抗氧化保护作用,降低了VT的毒性,且两者联用的效果更优,使胃中的相关指标达到正常水平。

GST-hDSL重组蛋白的原核表达纯化及对人造血祖细胞的扩增作用

目的:原核表达DSL与谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白并研究观察GST-hDSL对人脐带血CD34^+造血祖细胞的体外扩增作用。方法:将人DSL cDNA的蛋白编码序列克隆入原核表达载体pGEX-2T中,在大肠杆茵DH5α中诱导表达融合蛋白,用DEAE阴离子交换柱纯化目的蛋白。然后分离、纯化脐带血CD34^+造血祖细胞,不加细胞因子或加入SCF(干细胞生长因子,stem cell factor)和GM-CSF(粒-巨噬细胞集落刺激因子,granulocyte-macrophage colony-stimulating factor),经过14天的培养,检测GST-hDSL对细胞总数、CD^(34+)细胞百分率、以及集落形成的影响。结果:当SCF和GM-CSF存在时,GST-hDSL组的CD34^+细胞百分率,集落(colony forming cells,CFC)数以及高增值潜能集落(high proliferative potential colonyformning cells,HPP-CFC)数分别是对照组的1.9、1.2、5.3倍。结论:当与SCF和GM-CSF联合作用时,重组GST-hDSL蛋白对造血祖细胞具有扩增作用。