一种适用于产朊假丝酵母的基因敲除系统及其在gsh1基因敲除中的应用

报道一种适用于产朊假丝酵母Candida utilis的基因敲除系统,利用该敲除系统获得gsh1基因敲除杂合突变株。根据不同种属酵母菌γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白质的保守序列,克隆C.utilis SZU 07-01的gsh1基因;以商品化质粒pPICZalpha A为基础,构建gsh1基因的敲除载体pPICZalpha A-kan 3,其中,kan基因的启动子TEF被替换为来自于C.utilis SZU 07-01的GAP启动子(pGAP:kan)。质粒电转化C.utilis,获得gsh1基因敲除杂合突变株C.utilis GSH-6。结合发酵培养得到的数据进行分析,突变株的γ-GCS酶活比出发菌株降低17.5%,GSH合成量降低61%,细胞干重降低18.5%。所构建敲除组件pGAP:kan的成功应用为从分子水平研究C.utilis中谷胱甘肽(GSH)的生理功能提供了一种新借鉴。

原生质体诱变选育高产谷胱甘肽菌株及基因表达分析

以Saccharomyces cerevisiaeY518为出发菌株,通过原生质体诱变提高产谷胱甘肽的能力。结果表明:用0.03mol/L HNO2处理原生质体3min,致死率为85.96%,突变率为6.85%;经过4轮连续的HNO2诱变,筛选得到一株胞内谷胱甘肽产量(14.85mg/g干质量)约比出发菌株高24%的突变株。进一步研究谷胱甘肽合成相关的基因表达量,发现其合成途径编码限速酶的基因GSH1的表达量上调了2.26倍。因此,突变株胞内谷胱甘肽水平的提高可能是由上调的GSH1的表达量导致的。

谷胱甘肽生产菌重组巴斯德毕赤氏酵母的构建

目的:构建一株新型的产谷胱甘肽的重组巴斯德毕赤氏酵母,并研究该重组菌合成谷胱甘肽的能力;方法:利用PCR技术克隆来源于酿酒酵母的γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶编码基因GSH1和谷胱甘肽合成酶的基因GSH2,串联插入表达载体pGAPZA,转化Pichia pastoris GS115,在Zeo-cin平板上挑选阳性转化子,并对阳性转化重组菌进行摇瓶培养筛选。结果:得到一株GSH的产量高达162.2mg/L重组菌,说明串联表达酿酒酵母GSH1和GSH2基因,重组甲醇酵母生产谷胱甘肽可以达到较高的水平。

产品信息

XMAF5000系列带伺服放大器的专家自整定 PID 调节器本系列产品将 PID 调节器和伺服放大器一体化,不仅可按过程测量值与给定值的差值进行PID 控制,具有常规 PID 仪表的全部功能,而且可以根据实际阀位反馈信号和 PID 运算输出的差值直接输出正转或反转驱动信号驱动阀门开度的增大与关小。