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烟草NtGSH2基因的克隆及表达特性分析 被引量:6
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作者 吴婵娟 刘继恺 +2 位作者 冉巧 黄才芝 唐运来 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期2023-2031,共9页
谷胱甘肽(glutathione,GSH)是生物体内的非蛋白巯基类化合物,具有抗氧化、抗衰老和重金属解毒等重要的生理功能。本研究从烟草(Nicotiana tabacum L.)中克隆到谷胱甘肽合成酶基因NtGSH2,该基因编码555个氨基酸残基的蛋白质。氨基酸序列... 谷胱甘肽(glutathione,GSH)是生物体内的非蛋白巯基类化合物,具有抗氧化、抗衰老和重金属解毒等重要的生理功能。本研究从烟草(Nicotiana tabacum L.)中克隆到谷胱甘肽合成酶基因NtGSH2,该基因编码555个氨基酸残基的蛋白质。氨基酸序列比对和进化树分析发现,NtGSH2与其他植物同源蛋白具有较高的一致性,且与枸杞(Lycium chinense)LcGSHS/LcGS和番茄(Solanum lycopersicum)SlGSH2归为一类,亲缘关系最近。组织表达模式分析表明,NtGSH2基因在烟草的根、茎、叶、花和种子中均表达,其中在花中的表达量最高,在种子中的表达量最低。实时荧光定量PCR检测表明,NtGSH2受CdCl_2和ZnCl_2诱导表达。将NtGSH2连接到原核表达载体pET32a上,转化获得含有NtGSH2基因的大肠杆菌BL21(DE3)工程菌并成功表达目的蛋白。该研究结果为进一步分析NtGSH2基因功能及谷胱甘肽的生物合成提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 基因表达 谷胱甘肽 烟草 NT gsh2
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Gsh2基因沉默对胰腺癌SW1990细胞Hedge—hog通路成员表达的影响
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作者 林堃 王玉琼 +7 位作者 庄璐 姚瑶 金晶 吴红玉 满晓华 张阳 黄浩杰 李兆申 《中华胰腺病杂志》 CAS 2016年第1期6-9,共4页
目的探讨Gsh2基因沉默对胰腺癌SW1990细胞Hedgehog(Hh)通路关键成员Shh、Glil基因表达的影响。方法构建3个靶向Gsh2的shRNA(Gsh2-shRNA),应用双酶切法插入质粒pLKO.1puro,以未插入shRNA的空载质粒作为阴性对照。重组质粒经扩增... 目的探讨Gsh2基因沉默对胰腺癌SW1990细胞Hedgehog(Hh)通路关键成员Shh、Glil基因表达的影响。方法构建3个靶向Gsh2的shRNA(Gsh2-shRNA),应用双酶切法插入质粒pLKO.1puro,以未插入shRNA的空载质粒作为阴性对照。重组质粒经扩增后,抽提质粒DNA,通过双酶切后电泳分离和测序鉴定。然后转染胰腺癌SW1990细胞,应用实时RT—PCR法检测转染细胞Gsh2mRNA表达,筛选沉默效果最佳的插入Gsh2-shRNA重组质粒。选择最佳重组质粒转染胰腺癌SW1990细胞,采用实时RT—PCR法和蛋白质印迹法检测转染细胞的Gsh2、Shh、GlilmRNA和蛋白表达量。结果3个重组质粒经双酶切电泳及测序鉴定后证实插入的Gsh2-shRNA片段正确,符合预期。以转染空载质粒细胞的mRNA表达量为1,重组质粒Gsh2-shRNA-1、Gsh2-shRNA-2、Gsh2-shRNA-3转染细胞后Gsh2mRNA表达量分别为0.41±0.02、0.22±0.043、0.53±0.03,以Gsh2-shRNA-2的沉默效应最佳。以转染空载质粒细胞的mRNA或蛋白表达量为1,转染Gsh2-shRNA-2细胞的Gsh2、Shh、GlilmRNA相对表达量分别为0.12±0.02、0.97±0.13、0.19±0.03;蛋白表达量为0.55±0.12、0.74±0.06、0.53±0.09。转染Gsh2.shRNA-2细胞的Gsh2、GlilmRNA及蛋白表达量较转染空载质粒细胞显著下调,差异均有统计学意义(P值均〈0.01),而ShhmRNA及蛋白表达量的差异无统计学意义。结论Gsh2基因沉默可抑制胰腺癌SW1990细胞Hh通路成员Glil的表达,而不影响Shh基因的表达。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 基因 同源盒 基因沉默 HEDGEHOG通路 gsh2
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谷胱甘肽生产菌重组巴斯德毕赤氏酵母的构建 被引量:3
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作者 王盛 金大勇 蔡宇杰 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2007年第6期17-19,共3页
目的:构建一株新型的产谷胱甘肽的重组巴斯德毕赤氏酵母,并研究该重组菌合成谷胱甘肽的能力;方法:利用PCR技术克隆来源于酿酒酵母的γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶编码基因GSH1和谷胱甘肽合成酶的基因GSH2,串联插入表达载体pGAPZA,转化Pi... 目的:构建一株新型的产谷胱甘肽的重组巴斯德毕赤氏酵母,并研究该重组菌合成谷胱甘肽的能力;方法:利用PCR技术克隆来源于酿酒酵母的γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸合成酶编码基因GSH1和谷胱甘肽合成酶的基因GSH2,串联插入表达载体pGAPZA,转化Pichia pastoris GS115,在Zeo-cin平板上挑选阳性转化子,并对阳性转化重组菌进行摇瓶培养筛选。结果:得到一株GSH的产量高达162.2mg/L重组菌,说明串联表达酿酒酵母GSH1和GSH2基因,重组甲醇酵母生产谷胱甘肽可以达到较高的水平。 展开更多
关键词 谷胱甘肽 GSH1 gsh2串联表达 巴斯德毕赤氏酵母
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过表达SHC3激活AKT/Nrf2/GSH通路保护帕金森病氧化应激损伤 被引量:13
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作者 齐献忠 邢英瀛 秦慧兵 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第17期4333-4337,共5页
目的 研究过表达含有Src同源结构域2的衔接蛋白(SHC)3对帕金森病(PD)氧化应激损伤的影响及其机制。方法 运用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理PC12细胞构建PD模型,将PC12细胞分为正常组、模型组、模型+NC组、模型+SHC3组;用qRT-PCR法检... 目的 研究过表达含有Src同源结构域2的衔接蛋白(SHC)3对帕金森病(PD)氧化应激损伤的影响及其机制。方法 运用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理PC12细胞构建PD模型,将PC12细胞分为正常组、模型组、模型+NC组、模型+SHC3组;用qRT-PCR法检测各组细胞中SHC3mRNA表达;Western印迹检测各组细胞中SHC3、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)/Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、核因子NF-E2相关因子(Nrf)2的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 与正常组相比,成功构建PC12细胞损伤模型,且MPP+损伤的PC12细胞可显著下调SHC3表达,上调ROS、MDA、LDH含量,下调GSH含量,显著降低细胞活性,促进细胞凋亡,显著下调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,上调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。与模型+NC组相比,成功构建过表达SHC3的PC12细胞损伤模型,且过表达SHC3可降低ROS、MDA、LDH含量,升高GSH含量,显著升高细胞活性,显著抑制细胞凋亡,显著上调p-AKT、Nrf2的蛋白表达,下调Bcl-2/Bax、caspase-3的蛋白表达。结论 过表达SHC3可保护PD的氧化应激损伤,其机制可能与激活AKT/Nrf2/GSH通路有关。 展开更多
关键词 SHC3 AKT/Nrf2/GSH通路 帕金森病 氧化应激
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Glutathione Production by <i>Yarrowia lipolytica</i>Showing Both Methyglyoxal Resistance and a High Activity of Glutathione Synthetase
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作者 Naofumi Shiomi Emi Harada Risako Nabeshima 《Advances in Microbiology》 2012年第2期171-180,共10页
Although Yarrowia lipolytica is an important host strain, there have so far been few studies on the production of glutathione by the strain. We therefore performed a study to obtain an improved strain of Y. lipolytica... Although Yarrowia lipolytica is an important host strain, there have so far been few studies on the production of glutathione by the strain. We therefore performed a study to obtain an improved strain of Y. lipolytica ATCC20688, which could produce a high yield of glutathione. First, the capability of glutathione production in the ATCC20688 strain was estimated. In comparison with other yeasts, the yield of this strain was higher than those in Pichia strains. Furthermore, this strain could produce glutathione by assimilating sodium oleate. We next performed mutation and gene cloning to improve the yield. After the yield of glutathione was improved in the isolated methylglyoxal-resistant mutant (MGR3), the glutathione synthetase gene was cloned into the MGR3 strain. By using this recombinant strain, we could reach the maximum yield and intracellular content of glutathione of 54 mg/L-medium and 30 mg/g-dry cell weight, respectively. 展开更多
关键词 GLUTATHIONE YARROWIA lipolytica GLUTATHIONE SYNTHETASE gsh2 METHYLGLYOXAL
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芦荟苷通过调控AMPK/NRF-2/GSH通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚
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作者 李亚菲 赵慧敏 +8 位作者 任恒节 高顺 陈恋菊 雷禹 李燕 游丽萍 叶强 郑文武 姚磊 《四川医学》 CAS 2022年第8期745-750,共6页
目的探讨芦荟苷(ALO)对小鼠心肌肥厚的保护作用及其分子机制。方法将30只C57小鼠随机分为5组:对照组、异丙肾上腺素(ISO)组、ALO干预组(低剂量组(ISO+low-dose ALO,I+L-A)、中剂量组(ISO+middle-dose ALO,I+M-A)、高剂量组(ISO+high-dos... 目的探讨芦荟苷(ALO)对小鼠心肌肥厚的保护作用及其分子机制。方法将30只C57小鼠随机分为5组:对照组、异丙肾上腺素(ISO)组、ALO干预组(低剂量组(ISO+low-dose ALO,I+L-A)、中剂量组(ISO+middle-dose ALO,I+M-A)、高剂量组(ISO+high-dose ALO,I+H-A)。ISO组:每日腹腔注射ISO;ALO干预组:在ALO灌胃的同时腹腔注射ISO;对照组:每日予以等量生理盐水腹腔注射及灌胃。以上各组每天处理1次,连续15 d后处死小鼠、称重,计算小鼠心脏体质量比(HW/BW);hematoxylin-eosin染色(HE)及Masson染色观察心脏形态和纤维化程度;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定心肌细胞肥大相关基因心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的mRNA表达;为检测组织中氧化还原情况,分光光度法测定抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)及硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化指标-丙二醛(MDA);Western Blot法测定心肌组织肥大标志物BNP、心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CKMB)、抗氧化通路AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/磷酸化AMPK(p-AMPK)及转录因子E2相关因子2(NRF-2)的蛋白表达。结果与对照组比,ISO组HW/BW升高(P<0.05),HE及masson染色提示心肌细胞排列紊乱、细胞形状改变、纤维化增多,ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平上调,MDA含量增加和GSH减少,p-AMPK/AMPK比值、CKMB、NRF-2蛋白表达减少;ALO干预后,小鼠HW/BW下降,心肌细胞变形及纤维化程度明显改善,肥厚相关基因表达明显减少,抗氧化通路AMPK/NRF-2/GSH的表达增加。结论ALO能抑制心肌肥厚的发生发展,其机制可能与增强AMPK/NRF-2/GSH通路的激活有关。 展开更多
关键词 芦荟苷 心肌肥厚 氧化应激 AMPK/NRF-2/GSH通路
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T-2毒素对低硒大鼠脑组织脂质过氧化的影响 被引量:3
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作者 张瑞娟 徐丹丹 +5 位作者 王治伦 刘大晶 胡森科 于燕 张田香 王学良 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期6-10,共5页
目的探讨T-2毒素对大鼠脑组织脂质过氧化作用及其与低硒因素的协同作用。方法选用新生断乳SD大鼠,随机分为基础组和低硒组。低硒动物模型建立成功后,将基础组随机分为基础组、低T-2组、高T-2组,低硒模型组随机分为低硒组、低硒+低T-2组... 目的探讨T-2毒素对大鼠脑组织脂质过氧化作用及其与低硒因素的协同作用。方法选用新生断乳SD大鼠,随机分为基础组和低硒组。低硒动物模型建立成功后,将基础组随机分为基础组、低T-2组、高T-2组,低硒模型组随机分为低硒组、低硒+低T-2组、低硒+高T-2组,每天以0.1 mg/kg BW为低T-2剂量和0.2 mg/kg BW为高T-2剂量灌胃染毒1个月。染毒月末将大鼠断头处死,取全脑。作病理切片,观察大鼠神经细胞变化;测定脑组织中GSH-Px活性和MDA含量。结果低硒各组大鼠脑组织中GSH-Px活性均显著低于基础组(P<0.05);各组大鼠脑组织中MDA含量均显著高于基础组(P<0.05)。结论 T-2毒素能够抑制GSH-Px活性,引起MDA明显增多,并与低硒因素有协同作用。 展开更多
关键词 T-2毒素低硒GSH—Px MDA
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姜黄素类似物EF25-(GSH)_2抗肝癌作用的研究 被引量:1
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作者 叶莉莉 周桃 +2 位作者 James P.Snyder 傅海安 黄蓓 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1241-1249,共9页
在细胞及动物个体水平探讨姜黄素类似物EF25-(GSH)2的抗肝癌作用。用不同浓度的EF25-(GSH)2处理体外培养的肝癌细胞、正常肝细胞以及HepG2荷瘤裸鼠,MTT法检测细胞存活率,电镜及激光共聚焦显微镜观察细胞形态,蛋白质免疫印迹法(Western b... 在细胞及动物个体水平探讨姜黄素类似物EF25-(GSH)2的抗肝癌作用。用不同浓度的EF25-(GSH)2处理体外培养的肝癌细胞、正常肝细胞以及HepG2荷瘤裸鼠,MTT法检测细胞存活率,电镜及激光共聚焦显微镜观察细胞形态,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测AMPK/Akt/mTOR相关通路蛋白磷酸化水平的变化。结果显示,EF25-(GSH)2对HepG2作用48 h的IC50为7.2μmol/L,对其生长抑制作用明显优于姜黄素及顺铂,且对正常细胞的杀伤作用较小。形态学观察到细胞中有自噬现象的发生。免疫印迹法结果提示,EF25-(GSH)2可能通过AMPK/Akt/mTOR的相关通路抑制肿瘤细胞生长。对肝癌模型裸鼠的实验显示,给药后的肿瘤体积明显缩小。该实验结果证明,EF25-(GSH)2具有良好的作为肝癌治疗药物的开发前景。 展开更多
关键词 EF25-(GSH)2 肝癌 细胞自噬
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