多巴胺再摄取抑制剂对小鼠和人精子运动的影响研究

目的探究多巴胺再摄取抑制后对小鼠和人精子运动的影响及其作用机制。方法精子经多巴胺再摄取抑制剂GBR 12909和GBR 12935处理后,应用计算机辅助精液分析系统(Computer-Assisted Semen Analysis,CASA)评估精子活力;伊红-苯胺黑染色检测精子存活率;通过荧光探针分别检测细胞内pH(Intracellular pH,pHi)、细胞内钙离子(Intracellular Calcium,[Ca^(2+)]_i)水平变化;蛋白质免疫印迹检测蛋白磷酸化水平变化;考马斯亮蓝G250染色检测顶体反应变化。结果GBR 12909和GBR 12935可在不影响精子存活率的情况下显著抑制小鼠和人精子运动,使精子细胞[Ca^(2+)]i降低,pHi升高,糖原合酶激酶3α(Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha,GSK3α)磷酸化及蛋白激酶A(Protein Kinase A,PKA)底物磷酸化水平下降。其中GBR 12909可促进精子获能相关的蛋白酪氨酸磷酸化,GBR 12935未观察到该现象;二者均不影响小鼠精子获能后经A23187诱导的顶体反应发生率。结论多巴胺再摄取抑制剂GBR 12909和GBR 12935可降低精子[Ca^(2+)]_i,提高pH_i,并可能通过下调GSK3α磷酸化及PKA底物磷酸化水平降低精子运动能力。