外源GSNO对NaCl胁迫下番茄幼苗生长及光合特性的影响

【目的】研究NaCl胁迫下外源GSNO(NO供体)对番茄幼苗生长的调节作用。【方法】以中蔬4号番茄为材料,通过对100 mmol/L NaCl胁迫下番茄幼苗分别喷施0.1 mmol/L GSNO(NO供体)(NG处理)、0.05 mmol/L cPTIO(NO清除剂)(NP处理)、0.1 mmol/L GSNO+0.05 mmol/L cPTIO(NGP处理),研究外源GSNO对NaCl胁迫下番茄幼苗生长及其盐适应性的调控作用。【结果】NaCl胁迫下施用GSNO的番茄幼苗生长情况明显好转,叶绿素含量和最大光化学效率(Fv/Fm)提高,Rubisco初始活性和总活性提高,卡尔文循环相关酶Rubisco活化酶(RCA)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(SBPase)和果糖-1,6-二磷酸酶(FBPase)的活性提高。【结论】外源GSNO对NaCl胁迫下番茄幼苗生长不良和光合作用降低有缓解作用。

甲醛诱导哮喘的一种分子机理:对GSNO还原酶的上调作用

为了研究气态甲醛对GSNO还原酶(GSNOR)的上调作用是否通过GSH途径,以昆明雄性小鼠为实验材料,采用动态吸入染毒方式,检测了0、3.0mg·m-3甲醛暴露小鼠以及3.0mg·m-3甲醛暴露同时腹腔注射α-硫辛酸小鼠的肺泡灌洗液中GSH浓度和GSNOR活力.结果表明,3.0mg·m-3甲醛暴露小鼠与对照组小鼠相比,其肺泡灌洗液中GSNOR活力极显著上升(p<0.01),同时GSH浓度极显著下降(p<0.01);α-硫辛酸注射组小鼠肺泡灌洗液中GSNOR活力较3.0mg·m-3甲醛暴露小鼠有极显著下降(p<0.01),同时GSH浓度极显著上升(p<0.01).甲醛暴露下,GSNOR与GSH呈相反的变化趋势.以上结果表明,气态甲醛可以通过GSH途径调节GSNOR表达.甲醛对GSNOR的上调作用可能是通过诱导氧化胁迫进行的,这可能是理解GSNOR在气道中调控的基础.

吸入甲醛引起的小鼠肺部GSNO还原酶基因转录上调

为了验证吸入甲醛及气道氧化还原状态变化可在转录水平调控GSNOR表达,研究了甲醛环境暴露和抗氧化剂α-硫辛酸对小鼠肺中GSNOR表达的影响.以昆明系小鼠为实验材料,经吸入甲醛染毒和α-硫辛酸注射后立即脱颈处死,取其肺组织提取总RNA,采用RT-PCR二步法将其中GSNOR及管家基因β-actin扩增后,通过光密度分析染毒前后基因转录水平的变化.实验结果表明,与对照组相比,3.0mg·m-3浓度的甲醛可使GSNOR基因转录发生显著上调(p<0.01),而α-硫辛酸的注射可拮抗这种上调作用,表明吸入甲醛可在转录水平诱导GSNOR表达上调,而且这种上调与肺部的氧化还原状态改变有关,这可能是GSNOR在气道表达及其在哮喘发生中的作用基础.

甲醛与H_2O_2对Hela细胞GSNO还原酶活力的影响

目的研究甲醛对Hela细胞GSNO还原酶(GSNOR)活力的影响及其与氧化胁迫的关系。方法Hela细胞暴露于不同浓度液态甲醛和100μmol/ml的H2O2,染毒1h,然后检测细胞裂解液中GSNOR酶活力。结果甲醛可依剂量-效应曲线的方式激活GSNOR,导致酶活力升高,其中,高浓度甲醛(1250μmol/ml)可导致GSNOR活力显著性上调(与0·1μmol/ml相比,P<0·05)。同时,高浓度的H2O2对Hela细胞GSNOR活力也有激活作用。结论甲醛可诱导哺乳动物细胞GSNOR的上调,并且这种上调可能与氧化胁迫有关。

GSNO通过亚硝酰化抑制Myocardin诱导的心肌肥厚

Myocardin可以诱导心肌肥厚,而一氧化氮(NO)对于心肌具有一定保护作用,但在心肌肥厚发生的过程中,NO的作用尚未报道.本文首先用NO荧光探针检测亚硝基谷胱甘肽(S-Nitrosoglutathione,GSNO)处理能够引起H9c2细胞中NO总含量的上升.随后利用200,μmol/L GSNO处理细胞,检测发现Myocardin可以发生亚硝酰化修饰,同时心肌肥厚标志基因α-MHC在mRNA水平和蛋白水平的表达均下调.最后通过荧光素酶报告分析、RT-PCR以及Western blot分析表明,过表达Myocardin可以激活GSNO还原酶(GSNO reductase,GSNOR)的表达,并且降低细胞内NO总量.以上结果表明,亚硝酰化可以抑制由Myocardin诱导的心肌肥厚的发生,同时Myocardin可以激活GSNOR的转录,间接抑制GSNO对Myocardin的作用.

含葡聚糖颗粒物暴露致小鼠肺部GSNO还原酶活化的研究

动物实验和体外研究都已表明,空气中有机颗粒物可引起肺部炎症反应,该反应的显著特点为细胞因子表达上调和分泌增多.葡聚糖是霉菌和细菌代谢及裂解的产物,当颗粒物受到霉菌和细菌污染之后,就会含有葡聚糖.最近的研究表明,含葡聚糖颗粒物的暴露会影响鼻腔和肺部的功能,并伴随炎症反应.然而,含葡聚糖颗粒物的暴露对一氧化氮合酶(NOS)和亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)的影响仍不太清楚.本研究旨在检测含葡聚糖颗粒物暴露对呼吸道中NO信号通路的影响.本实验力小鼠被分别暴露于20μL PBS(空白组),20μL浓度为25μg/20μL的OVA和20μL浓度为100μL/20μL的含葡聚糖颗粒物环境中,暴露持续12d.暴露结束后在肺组织匀浆中检测NOS和GSNOR的活性.同时测定肺组织中谷胱甘肽(GSH)浓度和SOD活性用以评估氧化应激水平.另外,检测肺组织中的IL–6浓度确定炎症反应的发生与否.结果显示,12天OVA和葡聚糖颗粒物暴露并未明显影响NOS活性、GSH含量、SOD活性和IL-6浓度.然而,含葡聚糖颗粒物12d的暴露却明显增加GSNOR的活性和表达.我们的研究结果表明,含葡聚糖颗粒物暴露会激活呼吸道中的GSNOR,但不激活NOS.由于GSNOR在NO信号通路中起着举足轻重的作用,我们的研究结果具有一定的临床重要性.

食淀粉乳杆菌干预PRV GDNF和GSNO的ZO-1调控

为探究食淀粉乳杆菌在猪轮状病毒(PRV)感染乳鼠空肠组织中GSNO及GDNF对紧密连接蛋白ZO-1的影响,选择2日龄清洁级中国昆明鼠乳鼠作为试验动物,分为5组,正常对照组、轮状病毒组(RV组)、食淀粉乳杆菌组(L.a组)、预防性干预组(BI组)、治疗性干预组(AI组)。空肠组织作为靶器官,分别应用实时荧光定量PCR检测GDNF和ZO-1 mRNA相对表达量,采用比色法检测抗氧化指标(NO、GSH、SOD、MDA、GSH-Px、CAT),通过ELISA定量检测GSNO和5-HT含量,Western blot检测ZO-1、GDNF、GFAP蛋白含量变化,免疫组化检测ZO-1蛋白分布表达变化。结果表明,食淀粉乳杆菌可显著上调ZO-1和GDNF mRNA相对表达量(P<0.05),RV组、BI组和AI组ZO-1和GDNF的mRNA相对表达量变化趋势相似,先升后降。攻毒后各时间点,L.a组5-HT含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组5-HT含量高于对照组,低于BI组和AI组;L.a组GSNO含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组、BI组和AI组GSNO含量整体变化趋势相似,均是先升后降;对于ZO-1、GFAP、GDNF蛋白表达,整体趋势相似,在攻毒后第2、3天表达量较显著,L.a组ZO-1和GFAP蛋白表达量比其他4组高,AI组GDNF蛋白表达量比其他4组高。免疫组化结果表明,L.a组ZO-1蛋白分布比对照组更连续均匀,BI组ZO-1蛋白分布较RV组更连续,AI组与RV组无明显差异。RV组NO含量和MDA含量显著高于其他组(P<0.05),L.a组NO和MDA含量保持不变,BI组和AI组NO和MDA含量高于L.a组,低于RV组;L.a组CAT、SOD、GSH、GSHPx含量均高于其他组,BI组和AI组CAT、SOD、GSH、GSH-Px含量整体变化趋势一致,先降后升,且高于RV组。可知,食淀粉乳杆菌通过上调GDNF和GSNO表达和增强乳鼠空肠抗氧化能力,共同促进ZO-1表达,使其在乳鼠空肠上更均匀连续,显著提高乳鼠空肠细胞屏障强度,干预轮状病毒感染。

榭皮素对GSNO诱导损伤的内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的:考察榭皮素(Quercetin)对S-亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)诱导损伤的内皮细胞的保护作用,探讨其保护机制。方法:内皮细胞(EA.hy926)预先给予不同浓度榭皮素,之后给予GSNO损伤,建立模型。采用:噻唑兰染色(MTT法)检测细胞存活率测定,之后通过对超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),活性氧(ROS),Caspase-3等指标测定进行分析。结果:榭皮素可明显提高内皮细胞内SOD,GSH-PX的活性,抑制MDA的产生,降低ROS的活性,减少细胞凋亡率,具有统计学差异(P<0.05)。结论:榭皮素对GSNO诱导损伤的细胞具有保护作用,其机制可能与榭皮素可提高细胞内抗氧化酶活性有关。

GSNO还原酶cDNA的克隆与功能验证

目的为获得能有效下调蛋白质巯基亚硝基化修饰的功能蛋白,从大鼠皮层组织中抽提总RNA,经逆转录PCR法获得GSNOR的cDNA片段,并重组到过表达载体pShuttle-IRES-GFP中。方法利用电转染法将GSNOR过表达载体导入SH-SY5Y细胞,通过逆转录PCR及western法,验证重组载体在神经细胞系中的mRNA转录及蛋白表达效率。利用外源性一氧化氮供体GSNO处理SH-SY5Y细胞,建立硝化应激模型,通过生物素转化法检测该条件下胞内蛋白质的亚硝基化修饰水平及GSNOR的去亚硝基化修饰能力。结果成功克隆大鼠源GSNOR的cDNA,其过表达载体在神经细胞系中转录效率及蛋白表达水平均显著升高。结论生物素转化法检测结果显示,GSNOR能有效降低胞内蛋白质的整体亚硝基化修饰水平,对于Parkin、PDI、GAPDH等介导神经退行性病变关键蛋白靶点的去亚硝基化修饰作用也得到验证。

植物亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)功能的研究进展

亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)能通过还原亚硝基谷胱甘肽(GSNO)途径调节细胞内一氧化氮(NO)和亚硝基硫醇(SNOs)水平,保护机体免受亚硝化胁迫的影响。在植物体内,GSNOR作为催化调节NO及其代谢物SNOs水平的关键酶,参与植物生长、抵御病原菌、热耐受性、细胞死亡和镉胁迫等多种生理过程。综述GSNOR功能的研究进展,分析存在的问题,有望为红掌、合果芋等热带观赏植物基因工程提供理论基础。

GSNO对E.tenella内LDH、G-6-PD、ACO和SOD活性的影响

亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊的孢子生殖具有不可逆地抑制作用,但其作用机理尚不清楚。本研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳来分析GSNO对E.tenella卵囊内与糖代谢有关的乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)、乌头酸酶(ACO)以及GSNO对卵囊内与抗氧化有关的超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,电泳后经特异染色显示酶活性。结果表明:GSNO处理的未孢子化与孢子化卵囊中均有LDH、G-6-PD、ACO及SOD活性,这提示外源性NO对球虫孢子生殖的抑制并没有灭活卵囊中LDH、G-6-PD、ACO和SOD的活性或NO对这些酶的作用是可逆的。

GSNO在糖尿病和非糖尿病小鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的:探讨NO供体S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)在糖尿病(DM)小鼠和非DM小鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤中的作用。方法:120只雄性昆明小鼠随机分为6组,每组20只。即假手术组(Sham)组、DM+sham组、MI/R+媒介物(Vehicle)组、DM+MI/R+Vehicle组、MI/R+GSNO组及DM+MI/R+GSNO组,使小鼠心肌缺血30 min、再灌前10 min,腹腔注入100μmol/L的GSNO溶液或等体积的生理盐水(NS)。再灌3 h后,用ELISA法检测NOx、硝基酪氨酸(N-Tyr)的含量及caspase-3的活性。使用试剂盒检测超氧阴离子(O2-)的含量。用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡,再灌注24 h,用TTC法检测心肌梗死的面积。结果:①与sham组的O2-含量[(2.02±0.21)RLU/(mg.s)]相比,DM+sham组O2-的含量[(2.76±0.21)RLU/(mg.s)]明显增加(P<0.05)。②与MI/R+媒介物组相比,MI/R+GSNO组的梗死面积明显减少[(50.4±3.32)%vs.(37.0±4.37)%,P<0.05]、心肌细胞凋亡明显减少[(60.0±5.47)%vs.(44.2±2.28)%,P<0.05],caspase-3的活性明显降低[(47.6±4.47)nmol/(h.mg蛋白)]vs.(34.6±1.80)nmol/(h.mg蛋白),P<0.05],N-Tyr的含量明显减少[(0.91±0.16)μg/mg蛋白]vs.(0.54±0.083)μg/mg蛋白,P<0.05],NOx的含量明显增加[(1.14±0.063)μmol/g蛋白vs.(1.84±0.045)μmol/g蛋白,P<0.01]。③与DM+MI/R+媒介物组相比,DM+MI/R+GSNO组的梗死面积显著增加[(64.2±2.35)%vs.(85.6±2.80)%,P<0.01],心肌细胞的凋亡显著增加[(78.0±2.47)%vs.(87.6±1.93)%,P<0.05],caspase-3的活性显著增加[(62.17±3.24)nmol/(h.mg蛋白)vs.(77±2.09)nmol/(h.mg蛋白),P<0.01],N-Tyr的含量明显增加[(1.47±0.16)μg/mg蛋白vs.(2.06±0.18)μg/mg蛋白,P<0.05],NOx的含量显著增加[(1.51±0.11)μmol/g蛋白vs.(2.24±0.18)μmol/g蛋白,P<0.05]。结论:GSNO可以减轻非DM小鼠MI/R损伤,但可加重DM小鼠MI/R损伤,其机制可能与DM心肌组织中氧化应激水平增加有关。

GSNO对人鼻咽癌细胞增殖的影响

采取GSH和NaNO2(1∶1)在酸性避光条件下反应的方法合成GSNO,用已构建的人鼻咽癌细胞(CNE-2)为模型,研究GSNO对CNE-2细胞增殖的影响.结果表明:NO能明显抑制CNE-2细胞增殖,200μmol/L GSNO作用CNE-2细胞,12h抑制率为19.1%,24h抑制率为30.4%.在一定浓度范围内,GSNO抑制CNE-2细胞的生长增殖效果与作用时间和浓度相关.

S-亚硝基谷胱甘肽对实验性心源性肺水肿的防治作用

对小鼠腹腔注射肾上腺素造成实验性心源性肺水肿动物模型,观察S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对肺水肿的防治作用。结果显示,与阳性对照相比,GSNO预防组和治疗组小鼠存活率极显著提高(P<0.01),肺指数极显著降低(P<0.01),肺组织的病理变化也明显减轻。提示:GSNO对心源性肺水肿具有明显的预防和治疗作用。

外源性一氧化氮对雏鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊作用的研究

以硝普钠 (SNP)、精胺 (Sper/NO)和亚硝基谷胱甘肽 (GSNO)作为一氧化氮 (NO)供体用于处理卵囊 ,探讨外源性NO对卵囊的孢子化率及其致病力的影响。试验结果表明 ,在以上 3种NO供体中 ,只有GSNO对卵囊的孢子化有明显的抑制作用 ,其对纯化卵囊的抑制率达 93%～ 97% ,对粪便中卵囊的抑制率可达 10 0 % ;GSNO还能明显抑制孢子化卵囊的致病力 ,经 2～ 8mmol·L-1浓度GSNO处理的卵囊明显丧失了对雏鸡的致病作用。

拟炎症高NO大鼠原代培养肝细胞的信号转导途径研究

目的 :通过对信号分子 NO在原代培养大鼠肝细胞所经由的信号转导途径研究 ,探索炎症急性期肝细胞高 NO的生物学意义 ,及药物可能作用的新靶点。方法 :采用 NO供体硝普钠 (SNP)模拟肝脏急性炎症期高 NO环境 ,Griess法测定 NO的特异氧化终产物 NO2 - / NO3- 。测定肝细胞中 c GMP的浓度和肝细胞培养液中 GSNO的浓度 ,由此分别了解在原代培养大鼠肝细胞模型 ,NO经由 c GMP通路信号转导 ,还是经由非 c GMP通路信号转导的途径。结果 :1.5 4 3mmol/ L SNP释放 NO达峰值分别为 ,以 2 5 mmol/ L GSH为 NO释放通路 ,30 min时为 (0 .6 3± 0 .0 6 ) mmol/ L ;以 2 5 mmol/ L L - Cys为活性巯基通路 ,2 5 min时为 (0 .98± 0 .11) mmol/ L。 SNP与原代培养大鼠肝细胞共孵育过程中 ,随着孵育时间的延长及 SNP浓度的增高 ,细胞内 c GMP含量与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;培养液中 GSNO浓度也有增高。与对照组比均有显著差异 (P<0 .0 5 )。结论 :NO供体 SNP在含有巯基(GSH和 Cys)的肝细胞培养液中可持续释放 NO,通过 c GMP依赖性通路和 c GMP非依赖性通路—— GSNO通路进行信号转导 。

外源性NO供体对脑缺血/再灌注神经元的保护作用

目的观察外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对脑缺血/再灌注过程中c-jun N末端激酶3(JNK3)磷酸化的影响,及其对再灌注海马CA1区锥体神经元的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型。SNP(5 mg/kg)溶于生理盐水,间隔1.5 h分别腹腔注射3次,第1次注射时间在全脑缺血前30 min。GSNO(100μg/kg)溶于生理盐水,缺血前20 min于侧脑室注射给药。大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注溶剂对照组、缺血/再灌注给予SNP组和缺血/再灌注给予GSNO组,缺血15 min后分别灌注1天或5天。利用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法检测相关蛋白的表达、磷酸化水平及神经元细胞的存活。结果给予SNP组和GSNO组与生理盐水对照组相比,能够显著抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,并且能显著提高再灌注过程中海马CA1区锥体神经元的存活。结论外源性NO供体能够抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,进一步对海马CA1区锥体神经元发挥了保护作用。本研究为外源性NO对脑卒中的有效治疗提供了参考价值。

复合益生菌对K99引起的犊牛腹泻小肠结构及肠胶质细胞分泌亚硝基谷胱甘肽的影响

本研究旨在探究复合益生菌对大肠杆菌K99引起的犊牛腹泻小肠病理变化及肠胶质细胞(EGC)分泌亚硝基谷胱甘肽(GSNO)的影响。犊牛随机分为三组:对照组犊牛灌服10mL磷酸缓冲盐溶液;益生菌组犊牛灌服K99菌液10mL及饲喂复合益生菌;感染组犊牛灌服大肠杆菌K9910mL,分别于7d、14d、21d取组织样用苏木精-伊红染色法染色观察,酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组犊牛小肠GSNO含量。结果表明:与对照组相比,益生菌组各段小肠绒毛结构完整,无病理变化,感染组各段小肠肠绒毛断裂及水肿的较多;ELISA结果显示,十二指肠中GSNO含量各处理组间无显著差异(P>0.05);空肠中益生菌组GSNO含量最高,与对照组间无显著差异(P>0.05),感染组GSNO含量最低,且显著低于对照组和益生菌组(P<0.05);回肠中感染组GSNO含量极显著低于对照组和益生菌组(P<0.01),益生菌组与对照组间差异不显著(P>0.05)。试验表明K99可导致小肠组织病理学变化,降低GSNO的分泌;益生菌可保护犊牛小肠组织结构,提高GSNO的分泌。

The Effects of Exogenous Nitric Oxide on Eimeria tenella Oocysts

The effects of exogenous NO on Eimeria tenella oocysts were studied. The E. tenella oocysts freshly isolated from feces of experimental chickens infected with E. tenella and sporulated E. tenella oocysts were treated in vitro by the well-known NO-donors, SNP, SPER/NO and GSNO. The results showed that among the 3 NO donors, only GSNO had significant effects on the percentage of sporulated oocysts, the inhibiting rate of purified oocysts was from 93 to 97%, and reached 100% on the oocysts in the feces of chickens with E. tenella infection. GSNO also significantly decreased the virulence of E. tenella oocysts, and the oocysts treated by 2 - 8 mmol L-1 GSNO almost lost their pathogenicity to chickens.