重组GST-Crosstide蛋白的表达纯化及其在AGC型蛋白激酶活性检测中的应用

AGC型蛋白激酶在信号通路中占据着极为重要的地位,通过对各种信号通路的调控来影响细胞的生长、增殖和凋亡进程.为方便检测AGC型蛋白激酶的活性,设计并构建了新型AGC型蛋白激酶特异底物GST-Crosstide.通过同位素标记体外磷酸化的方法研究了酵母表达的Pkh1、Ypk1和大肠杆菌表达的Akt1三种AGC型蛋白激酶磷酸化GSTCrosstide的能力.结果显示,酵母表达的有活性的Pkh1和Ypk1均可有效磷酸化GST-Crosstide,并且由于Pkh1对Ypk1的进一步激活,二者共同作用可显著增加GST-Crosstide磷酸化.而仅采用大肠杆菌表达的没有被活化的Akt1则无法磷酸化GST-Crosstide,但Akt1可以被Pkh1或Ypk1激活,从而获得磷酸化GST-Crosstide的能力.研究表明,GST-Crosstide可以作为AGC蛋白激酶活性检测的有效工具,并将有效促进真核生物蛋白激酶调控的细胞信号转导通路的研究.