四种耐药基因蛋白及Ki-67在浸润性乳腺癌组织中表达的临床意义

目的:探讨Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ和Ki-67在浸润性乳腺癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学Envision法检测267例乳腺癌患者Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ和Ki-67的表达,分析它们与患者的临床病理特征的相关性。结果:乳腺癌患者Ki-67增殖指数为:27.73%±21.85%,Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ的阳性率分别为69.29%、64.04%、23.60%、29.21%;Ki-67与肿块直径、ER、PR具有相关性;Pgp与肿块大小具有相关性;GST-π、TopoⅡ与ER、PR具有相关性;Pgp与TS、GST-π呈正相关性,TopoⅡ与TS呈负相关性,与Ki-67呈正相关性。结论:Pgp、TS、GST-π、TopoⅡ及Ki-67在乳腺癌的表达中存在一定的相关性,联合上述指标检测对乳腺癌患者的临床诊疗及预后具有重要意义。

人MCM7 N-端融合蛋白的原核表达、纯化及其与AR蛋白相互作用的研究

目的:制备人MCM7 N-端的GST融合蛋白(GST-MCM7N),研究其是否和雄激素受体(AR)蛋白存在直接的相互作用。方法:利用RT-PCR获得长度为744 bp的人mcm7基因N-端cDNA碱基片段,把该片段构建到原核表达载体pGEX-5x-3中,转化大肠杆菌BL-21菌株。经IPTG诱导菌株基因表达产生了GST-MCM7N融合蛋白;使用Glutathione Sepharose 4B球珠分离纯化。利用GSTpull-down技术把纯化的融合蛋白分别和前列腺癌细胞LNCaP细胞裂解液及基因工程获得的AR蛋白孵育,检测MCM7蛋白的N-端是否和AR蛋白直接相互作用。结果:酶切鉴定及基因测序表明,mcm7基因cDNA的N-端片段被构建到表达载体pGEX-5x-3中;SDS-PAGE及Westernblotting结果分别显示,获得了GST和GST-MCM7N融合蛋白;GST pull-down结果证实GST-MCM7N和AR蛋白存在相互作用。结论:MCM7蛋白的N-端和AR蛋白至少在体外可以发生直接的相互作用。