急性酒精性肝损伤小鼠模型及早期诊断指标GSTA1的研究

为研究谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)在肝损伤早期诊断中的价值,本试验通过检测血清谷丙转氨酶(GPT)及肝组织指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)变化,成功复制急性酒精性肝损伤小鼠模型;通过时间-效应和剂量-效应关系研究血清中GSTA1和ALT变化。结果显示,给予小鼠灌服乙醇溶液后,2 h血清中GSTA1含量变化与对照组相比差异极显著(P<0.01),而ALT活性变化在6 h才显示出一定的差异性(P<0.05);当乙醇剂量为10 m L/kg体重时,血清中GSTA1含量变化与对照组相比差异极显著(P<0.01),而当乙醇剂量达到14 m L/kg体重时,ALT活性变化与对照组相比差异极显著(P<0.01)。表明在急性酒精性肝损伤模型中,GSTA1的含量变化在肝损伤早期就可检测出来,作为肝损伤标记物,GSTA1比ALT更敏感。

GSTA1作为CCl_4致小鼠急性肝损伤早期诊断指标的研究

通过时间-效应和剂量-效应关系研究急性肝损伤时血清中谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)与丙氨酸氨基转移酶(ALT)的变化。用0.35%的CCl_4给小鼠灌胃,分别于染毒后1、2、4、6、12、16、24、28、48 h检测小鼠血清中GSTA1的含量和ALT活性。2 h时GSTA1开始升高,与对照组相比差异显著(P<0.05),而ALT在6 h才开始升高,与对照组相比差异显著(P<0.05)。在6 h时GSZA1的增加量与ALT相比较差异已相当显著,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。在染毒后24 h,GSTA1和ALT都达到最大值。分别以0.125%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.5%、0.7%的CClJ_4给小鼠灌胃,染毒24 h后检测ALT活性和GSTA1含量。当CCl_4浓度为0.125%时,与对照组相比,GSTA1含量增加差异极显著(P<0.01),而ALT与对照组相比无明显变化;当CCl_4浓度为0.35%时,ALT活性显著增加,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。结果表明,在CCl_4、小鼠急性肝损伤中GSTA1比血清转氨酶检测出的时间更早,并且更加敏感,因此,GSTA1可作为急性肝损伤的标记物。

HepG2细胞中TNFα通过NF-κB信号通路下调GSTA1/GSTA4表达（英文）

谷胱甘肽巯基转移酶α1/α4(GSTA1/A4)是体内重要的解毒酶,可降低多种内、外源性毒性化合物的毒性.然而,胆汁淤积病人肝细胞内G STA1/A4的表达是下调的,下调机制尚不清楚.本研究通过肿瘤坏死因子α(TNFα)处理人肝癌细胞Hep G2细胞,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测GSTA1/A4、核因子κB(NF-κB)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达.发现TNFα在m RNA水平和蛋白质水平均抑制GSTA1/A4表达,且呈剂量与时间依赖关系.干扰NF-κB信号通路,可减弱T NFα对G STA1/A4表达的抑制作用.以上结果表明,在Hep G2细胞中,TNFα可通过激活N F-κB信号通路抑制G STA1/A4表达.

GSTA1基因多态性与白消安为基础预处理方案致急性肝损伤的相关性研究

目的探讨GSTA1基因多态性与以白消安为基础预处理的造血干细胞移植人群发生急性肝损伤的相关性。方法收集以白消安为基础的预处理的HSCT患者115例,PCR-RFLP法测定样本GSTA1 C-69T基因多态性,MALDI-TOF-MS法验证,经χ^(2)检验分析基因型与急性肝损伤相关性。结果GSTA1*A/*A(野生型)、*A/*B(杂合型)、*B/*B(纯突变表型)基因型频率分别为80.9%、19.1%、0%,该分布符合Hardy-Weinberg平衡;该基因型与急性肝损伤的发生存在相关性(χ^(2)=5.222,P=0.022,RR=2.416,95%CI:1.160-5.032)。结论携带GSTA1*A/*B(杂合型)的患者急性肝损伤的发生率显著高于携带GSTA1*A/*A(野生型)的患者,有必要对Bu实行个体化给药并对携带GSTA1*B等位基因的患者加强监测和保护。

GSTA1基因C-69T多态性与糖尿病视网膜病变的相关性研究

糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见的微血管病变之一,是工作年龄成人致盲的主要原因。氧化应激是活性氧生成和清除不平衡的结果,在糖尿病视网膜病变的发生中起重要作用。GSTA1是重要的氧化应激相关的谷胱甘肽硫转移酶之一,目前暂没有其多态性与糖尿病视网膜病变发病之间的研究。本实验以546例2型糖尿病样本为研究对象,根据直接眼底镜的结果把病人分成糖尿病视网膜病变组和有糖尿病但没有视网膜病变组。采用构象差异凝胶电泳方法检测GSTA1基因C-69T多态性。GSTA1基因C-69T多态性的CC、CT和TT种基因型在DR组的频率分别为79.8%、17.7%和2.5%,在NDR组的频率分别为77.8%、20.6%和1.6%,两组比较差异无统计学意义(x^2=1.254,p=0.561)。本实验结果表明,GSTA1基因C-69T多态性与中国江西汉族糖尿病视网膜病变的发病没有关联。

丁香叶黄酮对小鼠药物性肝损伤的保护作用研究

为确定丁香叶黄酮的保肝作用,将小鼠随机分为5组,即对照组、模型组、丁香叶黄酮高剂量组(40 mg/kg体重)、中剂量组(35 mg/kg体重)、低剂量组(30 mg/kg体重),以血清转氨酶(ALT、AST)、肝组织指标(MDA、NO、SOD、GSH、GSH-Px)及II相药物代谢酶GSTA1为检测对象,结合小鼠肝脏病理变化综合分析。结果显示,丁香叶黄酮高剂量组血清转氨酶和肝组织中MDA、NO均极显著降低(P<0.01),SOD、GSH、GSH-Px均极显著升高(P<0.01),GSTA1的含量也极显著升高(P<0.01);肝脏组织病理学显示脂肪变性、坏死及炎性细胞浸润减轻;而中、低剂量组的各指标和组织学变化均不如高剂量组明显。研究表明,丁香叶黄酮以40 mg/kg体重剂量对小鼠药物性肝损伤有较好的保护作用。

小鼠急性肝损伤中谷胱甘肽S转移酶A1的表达分析

为研究谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)在3种急性肝损伤动物模型中的表达情况,选用雄性昆明系小鼠32只,随机分为4组,包括CCl_4组、APAP组、酒精组和对照组,按本课题组前期建立的方法复制三种急性肝损伤模型。采集血清检测转氨酶(ALT、AST),肝脏检测肝组织指标(SOD、MDA、GSH、GSH-Px),应用RT-PCR方法测定肝组织中GSTA1 mRNA表达量。结果显示,3种模型组中血清转氨酶及肝组织指标与对照组相比差异极显著(P<0.01);3种模型组中GSTA1 mRNA的表达量与对照组相比极显著降低(P<0.01),其中CCl_4组降低了4.9倍、APAP组降低了2.1倍、酒精组降低了3.7倍。研究表明,在急性肝损伤中,GSTA1 mRNA的表达水平与肝损伤的程度呈负相关。

人谷胱甘肽硫转移酶A1原核表达系统的构建及高效表达

目的 对人谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)原核表达系统的构建及高效表达。方法 采用RT -PCR方法将肝组织中提取总RNA扩增人GSTA1基因的cDNA序列 ,将其插入到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,构建重组表达质粒 ,并用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定 ,并进行了高效表达。结果 人GSTA1克隆到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,测序结果同GenbankGSTA1(GI:2 2 0 914 5 3)cDNA序列相比较 ,在 5 12位点T→C ,氨基酸由Met→Thr,同源性为 99% ,基因登陆号为AY5 32 92 8。通过IPTG诱导表达 ,在 34.4KDa处 1、2、3、4小时的表达量分别为 4 1.8%、6 8%、6 8.3%、83%。结论 经Westernblot分析 。

共轭亚油酸和α-亚麻酸对HepG2细胞核转录因子NF-E2相关因子及谷胱甘肽硫转移酶A1表达的影响

本试验旨在研究共轭亚油酸(CLA)和α-亚麻酸(ALA)对于HepG2细胞核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)及其调控的谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)mRNA和蛋白质表达的影响。试验组采用浓度为0.2、0.5和1.0mmol/L的CLA和ALA作用HepG2细胞24h,采用荧光定量PCR法测定mRNA的表达量,蛋白质印迹法测定蛋白质的表达量。结果表明,CLA浓度分别为0.2和0.5mmol/L时,Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质表达量与对照组相比极显著增加(P<0.01),并随CLA浓度增加呈下降趋势;采用ALA作用的细胞,Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质表达量与对照组相比,随ALA浓度的增加呈现极显著上升(P<0.01)。由此可见,CLA在较低浓度时,诱导Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质表达量作用较强,而随ALA浓度增加Nrf2和GSTA1mRNA和蛋白质的表达量逐渐增多。

Hepatoprotective Effects of Folium syringae Extracts Against Ethanolinduced Acute Liver Injury

The aim of the study was to investigate the hepatoprotective effects of Folium syringae(FS) extracts against ethanolinduced acute liver injury. Mice and primary hepatocytes were pretreated with FS extracts at different dosages before ethanol administration. Transaminases, glutathione S-transferase A1 level and hepatic biochemical indices(malondialdehyde, superoxide dismutase, glutathione and glutathione peroxidase) were determined. Pretreatment with FS extracts significantly inhibited the damage caused by ethanol and the hepatoprotective effects of FS were almost similar to Silymarin that was used to treat alcoholic liver injury. GSTA1 contents in all the FS extract-treated groups were significantly different from those in the ethanol-induced acute liver injury model group(p<0.01), and similar trends were observed in transaminases and hepatic indices level both in vitro and in vivo. The results showed that FS extracts had hepatoprotective effects against ethanol-induced injury. Those effects might be related to the enhancement of antioxidant capacity of liver cells, and FS extracts could reduce the release of liver GSTA1, which contributed to improve liver detoxification.

Genetic polymorphism of human glutathione S-transferase A1 gene in mainland Chinese and its association with phenotype

AIM Human glutathione S-transferase A1 (GSTA1) is an important phase Ⅱ metabolizing enzyme involved in the metabolism of many therapeutic drugs and is responsible for the metabolic detoxification of numerous promutagens and procarcinogens. The genetic polymorphism of GSTA1 has important implications for drug efficacy and cancer susceptibility. In this study, we determined the distribution of GSTA1 genetic polymorphism in Mainland Chinese. And we also investigated whether there exists the potential phenotype alterations caused by the genetic polymorphism in human. METHODS Genomic DNA was ex-tracted from peripheral blood of 140 Chinese people and 16 liver tissues obtained from non-liverish patients who underwent partial hepatectomy. And then the genotypes of human GSTA1 gene were analyzed by polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism (PCR-RFLP).

抗GSTAl单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备鼠抗人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTAI)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用纯化后的GSTAl融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备抗GSTAl的单克隆抗体(mAb)。用ELISA法测定鼠抗人GSTA1血清的效价;用Western blot方法鉴定抗血清的特异性。结果:筛选到l株可稳定分泌抗人GSTAlmAb的细胞株。腹水效价为12 800。Western blot显示在相对分子量(Mr)约25KD处出现特异性条带。说明制备的mAb可特异地识别成人肝细胞中相对分子量(Mr)约25KD的GST-GSTA1。结论:获得一株能特异性识别抗人GSTAI的单克隆抗体,可用于肝损伤性疾病的诊断。

饮用水有机提取物致大鼠肝脏损伤中GSTs活性及其编码基因表达的变化

[目的]观察饮用水有机提取物对大鼠肝脏谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GSTs)活性及谷胱甘肽-S-转移酶A1(GSTA1)基因m RNA和蛋白表达的影响,探讨其在饮用水有机提取物肝脏损伤中作用。[方法]采用固相萃取法提取水样中有机污染物,50只SD大鼠随机分成5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(玉米油)和低、中、高3个染毒组(剂量分别为每天5、20、80 L/kg·bw),进行经口灌胃染毒12周。分光光度法检测GSTs的活性,实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法分别检测GSTA1基因的m RNA和蛋白质表达水平,同时检测肝功能各指标。[结果](1)大鼠肝脏GSTs酶活性:与空白对照、溶剂对照及低剂量组相比,中剂量[(50.66±5.62)U/mg蛋白]和高剂量组[(39.80±12.95)U/mg蛋白]的GSTs酶活性升高(P<0.05);与中剂量组相比,高剂量组GSTs的酶活性则明显降低(P<0.05)。(2)GSTA1的m RNA及蛋白表达水平:中、高剂量组高于空白对照组、溶剂对照及低剂量组(P<0.05);而与中剂量组相比,高剂量组GSTA1的m RNA表达水平下降(P<0.05)。Western blot检测结果显示,随染毒剂量的增加,GSTA1蛋白表达呈先升高后降低的趋势,与空白对照、溶剂对照及低剂量组比较,中、高剂量组的升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而与中剂量组比较,高剂量GSTA1的蛋白表达则下降(P<0.05)。(3)肝功能指标:与对照组比较,血清胆碱酯酶(CHE)在中、高剂量染毒组升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转换酶(AST)则仅在高剂量组升高(P<0.05)。总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)在高剂量组下降(P<0.05)。GSTA1蛋白表达、GSTs活性与染毒大鼠肝脏CHE水平均呈正相关关系(r=0.490 5,r=0.685 2;P<0.05)。[结论]在本实验条件下,饮用水有机提取物较高剂量染毒可上调大鼠肝脏GSTA1的m RNA及蛋白质表达水平,调控GSTs活性改变,从而导致大鼠肝细胞对毒物的易感性增强,肝损伤加重。

神经酰胺对人结肠癌Caco-2细胞中谷胱甘肽硫转移酶A1的影响

谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）是一组多功能Ⅱ相药物代谢酶,能够清除外源性的亲电子化合物,包括致癌物、氧化应激产物和化疗药物等。己有研究表明,GSTs的过表达与肿瘤细胞化疗耐药性的产生存在着密切的关系,某些肿瘤耐药细胞株内GSTs含量要比敏感株高出许多倍,肿瘤细胞可通过表达GSTs而保护自身免受化疗药物的损害,

谷胱甘肽S转移酶A1基因多态性与子癇前期发病的相关性

目的研究谷胱甘肽S转移酶A1（Glutathinoe S-transferase A1,GSTA1）基因多态性与无锡地区汉族妇女中子癇前期发病的相关性。方法随机抽取就诊于无锡市妇幼保健院产科的子癇前期产妇90例作为实验组,正常妊娠产妇90例作为对照组,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）检测两组产妇血液中位于GSTA1基因启动子区的SNP位点rs3957357（GSTA1-69C/T）的等位基因型及基因型。结果 GSTA1-69C/T中T等位基因在实验组和对照组中的频率分别为12.2%及13.3%,两组差异无统计学意义（χ~2=0.0997,P=0.752）;同样,该多态性位点的三种基因型CC、CT、TT在实验组中的分布频率为77.8%、20.0%、2.2%,在对照组中的分布频率分别为74.5%、24.4%、1.1%,差异无统计学意义（χ~2=0.7990,P=0.691）。结论GSTA1基因多态性与无锡地区汉族妇女子癇前期的发病无相关性。