矩阵热转移技术鉴定有机酸类代谢物的结合蛋白质

有机酸类代谢物在表观遗传、肿瘤发生和发展以及细胞内信号转导等方面发挥着重要作用,对这类代谢物在体内的结合蛋白质进行鉴定,将有助于从分子学层面理解和揭示它们的功能。本研究采用矩阵热转移技术(mTSA),在HeLa细胞裂解液中系统鉴定了3种有机酸类代谢物(琥珀酸、富马酸和乳酸)的结合蛋白质。首先,向细胞裂解液中加入一系列不同浓度的琥珀酸、富马酸或乳酸,在52℃下加热3 min,离心并收集上清蛋白质,进行酶解及后续质谱分析。在数据非依赖性采集(DIA)模式下,本研究在琥珀酸、富马酸和乳酸的mTSA实验中分别鉴定到5870、5744和5816个蛋白质;通过对蛋白质热稳定性的显著性差异值(p)和皮尔森相关系数平方值(R^(2))进行考察,该研究鉴定到了多个高可信度的有机酸类代谢物结合蛋白质。此外本研究发现,虽然富马酸和琥珀酸均能够与α-酮戊二酸依赖的双加氧酶(FTO)结合,但琥珀酸是FTO更强的竞争性抑制剂。除此之外,本研究还鉴定到了两个先前未曾报道过的乳酸结合蛋白质,即鸟氨酸转氨酶(OAT)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(MPST),并通过溶剂诱导沉淀技术(SIP)和两种数据检验方法证明了其可信度;同时,OAT和MPST的发现有助于揭示乳酸在氨基酸合成和细胞内氧化还原平衡调节方面的重要作用。

血清视黄醇结合蛋白4与2型糖尿病合并代谢综合征的相关性

目的探讨血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)水平与2型糖尿病(T2DM)及代谢综合征(MS)的相关性及作用机制。方法将108例T2DM患者根据有无合并MS分为T2DM合并MS组(MS组,57例)和T2DM不合并MS组(NMS组,51例),同时按照RBP4水平差距的三分位法将所有患者分为A、B、C 3组,另选择健康体检者37例为对照组。比较各组的血脂、空腹血糖(FPG)等生化指标和RBP4的差异。结果与对照组比较,NMS组和MS组的收缩压、舒张压、TG、LDL、FPG、RBP4显著升高,HDL降低(P<0.05);与A组和B组比较,C组的TG、腰围和大血管并发症明显升高(P<0.05,P<0.01);Pearson分析显示,RBP4与体质量指数(BMI)、腰围、收缩压、舒张压、FPG、TG呈正相关,与HDL呈负相关。logistic分析显示,RBP4、BMI、腰围、FPG、TG、TC是MS的危险因素(P<0.05)。结论 RBP4在T2DM的发生中起重要作用,并促进MS的发生。

脂肪型脂肪酸结合蛋白与非脂质代谢性疾病

脂肪酸结合蛋白（fatty acid-binding proteins,FABPs）是一族相对分子质量为14 000～16 000的蛋白质,存在于多种哺乳动物的多种组织中,目前已证实9种不同的FABPs,分别是肝脏型FABP（L-FABP或FABP1）、肠型FABP（I-FABP或FABP2）、心脏型FABP（H- FABP或FABP3 ）、脂肪细胞型FABP（A-FABP或FABP4）、表皮型FABP（E-FABP或FABP5）、回肠型FABP（IL-FABP或FABP6）、脑型FABP（B-FABP或FABP7）、髓磷脂型FABP（M-FABP或FABP8）和睾丸型FABP（T-FABP或FABP9）.

维持性血液透析患者血清视黄醇结合蛋白4的水平变化

目的观察终末期肾病维持性血液透析患者血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)的水平变化及其与营养不良和血脂的关系。方法选择我院终末期肾病维持性血液透析患者48例及30例健康体检者,测定两组尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)及RBP4的浓度,分析RBP4与所测定指标的关系。结果①与对照组相比,维持性血液透析患者TP、Alb、TC、HDL-C、LDL-C的水平是降低的,TP(64.33±4.42)g/L vs(70.25±4.94)g/L,Alb(38.98±6.07)g/L vs(45.23±7.67)g/L,TC(4.20±1.83)mmol/L vs(5.29±1.09)mmol/L,HDL-C(1.37±0.52)mmol/Lvs(1.62±0.43)mmol/L,LDL-C(2.99±1.02)mmol/L vs(4.08±1.14)mmol/L(均P<0.01)。②维持性血液透析患者的RBP4的水平明显高于正常对照组,(43.58±5.42)μg/L vs(32.42±6.71)μg/L,且与BUN、Cr、UA呈正相关(r=0.651、0.671、0.449,P<0.01),与HDL-C、Alb呈负相关(r=-0.289、-0.249,P<0.05)。结论维持性血液透析患者存在有营养不良及脂代谢紊乱,RBP4可能参与营养不良及脂代谢紊乱。

返平原近5年高原移居人群脂肪酸结合蛋白检测分析

目的研究从高原返回平原近5年人群脂肪酸结合蛋白(FABP)与对照组间的差异。方法选择64例由高原返回平原近5年人群作为观察组,同时选择87例健康体检者作为对照组,采用ELISA法检测受试人员的FABP,对两组资料进行统计学比较。结果观察组FABP水平均高于对照组,FABP与高原居留时间呈正相关,与返回平原后的时间呈负相关,与所在海拔高度无相关性。结论观察组人群因高原缺氧引起脂代谢增强,在返回平原近5年后,脂代谢脱适应过程仍未结束。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白靶基因Staufen在小鼠海马的原位杂交定位

目的:依据环磷酸腺苷反应元件结合蛋白靶基因STAUFEN蛋白序列寻找与人类亲缘关系较近的动物模型,并在动物模型的脑组织上进行Staufen1mRNA的定性和定位。方法:查找相关动物的STAUFEN蛋白序列,构建生物进化树,寻找合适的动物模型。采用反转录PCR扩增Staufen1片断,接入载体制作亚克隆,转化细菌后筛选、扩增、抽提,然后测序鉴定。体外转录Staufen1基因mRNA探针,将其和脑组织冰冻切片原位杂交、显色。结果:生物进化树提示,小鼠与人的Staufen1的蛋白序列相似性达99.7%;原位杂交结果显示,小鼠海马CA1、CA2、CA3和DG区存在Staufen1 mRNA的表达。结论:小鼠是研究Staufen1基因在海马转录的合适动物模型。

低密度脂蛋白受体与代谢综合征的相关性研究进展

低密度脂蛋白受体（LDLR）与代谢综合征（MS）关系密切。LDLR的表达量、反馈调节水平和降解水平的变化，LDLR缺陷对血脂水平的影响，LDLR在胰岛β细胞损伤和胆固醇稳态失调中的作用， LDLR基因核转录因子的表达以及基因片段的多态性等均与MS特定组分的发生、发展存在一定的相关性。近年来，多个与LDLR及MS相关的靶点和干预机制得到了广泛研究。了解LDLR与MS的相关性，对MS的防治具有十分重要的意义。本文就LDLR与MS的相关性研究进展作一综述。

视黄醇结合蛋白4与妊娠期糖尿病的研究进展

视黄醇结合蛋白4(RBP4)是新近发现的脂肪因子,主要由肝脏和脂肪组织分泌,具有调节糖脂代谢的作用。RBP4与胰岛素抵抗(IR)、代谢综合征等密切相关。妊娠期糖尿病(GDM)是常见的妊娠合并症,发病率逐年上升,但其发病机制不甚明确,认为与IR和胰岛素分泌相对不足相关。近年来对RBP4及相关脂肪因子的研究发现,RBP4不仅是肥胖及糖尿病患者IR的关联因子,而且和其他脂肪因子一同与GDM的发病、产后发生2型糖尿病、代谢综合征及子代预后等密切相关,但对此结论仍存在争议。

铁代谢及相关蛋白的miRNA在肿瘤中的研究进展

铁是促进细胞增殖和生长的必需营养物质,涉及许多代谢过程,肿瘤细胞比正常的非恶性细胞有更高的铁需求。由于铁进行氧化还原循环并参与自由基产生,机体多余的铁会增加癌症的风险。铁代谢紊乱与肿瘤的发生和发展有关。参与铁代谢的相关蛋白在肿瘤的发生发展中起重要作用。miRNA与肿瘤关系是近年来研究的热点,铁代谢相关蛋白miRNA在肿瘤发生发展中起到重要作用,这些可能为肿瘤的诊断以及治疗提供新的思路。

甲状腺肿瘤G蛋白α亚基mRNA表达的初步研究

为研究G蛋白α亚基 (Ga)mRNA在甲状腺肿瘤组织中的表达 ,收集手术切除 5例甲状腺乳头状癌(TPC)及 6例无功能甲状腺腺瘤 (NFTA)组织 ,利用RT PCR技术观察Gs和Giα亚基的表达。结果发现 ,GsamRNA在TPC的表达较正常甲状腺 (NT)和NFTA明显增高 (P <0 0 5 ) ,NFTAGsamRNA表达水平的增高与NT无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;Gia 3mRNA在NFTA的表达明显高于NT(P <0 0 5 ) ,两种甲状腺肿瘤组织中 3种Gia的表达水平无显著性差异 (P >0 0 5 )。研究表明Gsa和Gia

G蛋白在快速老化痴呆小鼠SAMP8脑组织中的表达

目的:观察在不同月龄小鼠SAMP8皮质和海马中G蛋白的表达情况。方法:利用Western-blot方法检测Gαq/11、Gαi和GαS蛋白在8月龄和18月龄快速老化痴呆小鼠SAMP8的表达,并以正常老化小鼠SAMR1作为对照研究。结果:与同月龄SAMR1相比,Gαq/11、Gαi和Gαs蛋白在8月龄小鼠SAMP8皮质和海马组织中的表达无明显异常(P>0.05),而到18月龄时,SAMP8皮质部位Gαq/11表达量低于SAMR1(P<0.05),海马部位Gαq/11和Gαi的表达量低于SAMR1(P<0.05)。结论:18月龄SAMP8脑组织中Gαq/11和Gαi的异常表达参与了阿尔茨海默病(AD)的病理进展,并有望作为AD治疗的一个靶点。

G蛋白β_3亚单位基因C825T多态性影响缬沙坦的降压疗效

目的探讨G蛋白β3亚单位基因C825T多态性与缬沙坦的降压疗效的关系。方法采用聚合酶链反应限制片段长度多态性方法检测147例健康人(对照组)和321例高血压病患者(高血压组)的G蛋白β3亚单位C825T多态性,其中102例高血压病患者口服缬沙坦4周。结果高血压组G蛋白β3亚单位C825T多态性中基因型频率(CC28.7%、CT 52.0%、TT 19.3%)、等位基因频率(C 54.7%、T 45.3%)与对照组基因型频率(CC 27.2%、CT 46.9%、TT25.9%)、等位基因频率(C 50.7%、T 49.3%)比较无显著性差异;缬沙坦对CT[(18.29±11.17)mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa]、TT[(25.63±22.68)mm Hg]、CT+TT[(19.25±13.20)mm Hg]基因型患者降低收缩压的作用强于CC基因型[(11.33±9.15)mm Hg,P<0.05];对CT[(15.03±9.35)mm Hg]、CT+TT[(14.50±9.23)mm Hg]基因型患者降低舒张压的作用强于CC基因型[(8.81±5.60)mm Hg,P<0.05]。结论G蛋白β3亚单位基因C825T多态性与缬沙坦的降压疗效相关,而与原发性高血压无关。

乙醇性脂肪肝模型大鼠肝脏G蛋白表达水平的变化

目的探讨乙醇联合高脂饮食诱导大鼠肝脏早期脂肪变性的可能机制。方法高脂饮食配合乙醇灌胃,连续6周,制备大鼠脂肪肝模型。6周末取血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);制备石蜡及冰冻切片,进行肝脏病理学检查。Westernblot分析各组大鼠肝脏组织中抑制型G蛋白α1(Gαi1)、抑制型G蛋白α2(Gαi2)、抑制型G蛋白α3(Gαi3)、刺激型G蛋白(Gαs)表达水平的改变。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT、AST、TG、TC明显升高且伴有HDL-C的显著下降;OilRedO(油红O)染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织中的Gαi1、Gαi2、Gαs表达明显下降,Gαi3的表达水平在模型组中呈增高趋势。结论乙醇联合高脂饮食能够进一步诱导大鼠肝脏的脂肪变性,病变程度与乙醇剂量呈正相关,其发病机制可能和G蛋白介导的信号传导通路的改变密切相关。

小分子G蛋白Rap1介导的细胞信号转导通路

Rap1属于小分子G蛋白Ras超家族成员之一,具有逆转原癌基因Ras激活突变体(K-ras)引起的细胞形态改变的功能和传递致癌信号两种相反的作用。Rap1和其他G蛋白一样,表现为无活性的GDP结合形式和有活性的GTP结合形式两种构象。通过两种构象之间的转换,起到分子开关的作用,调节细胞对外界刺激作出相应的反应。现对Rap1活性的调节及近年来有关Rap1介导的细胞信号转导通路及其对细胞行为影响的研究进行综述。

ARHI基因mRNA和蛋白表达水平与胶质瘤恶性度相关性探讨

目的探讨ARHI基因表达水平与人脑胶质瘤恶性度的相关性。方法采用RT-PCR和Western blot法检测10例正常脑组织、59例胶质瘤组织、4种胶质瘤细胞系(U251,SHG44,BT325,U87)中ARHI基因mRNA和蛋白的表达强度,结合临床病理资料统计分析。结果胶质瘤组织、细胞系中ARHI基因的表达水平显著低于正常脑组织,胶质瘤组织中ARHI的表达水平随肿瘤恶性程度增加而明显降低(P<0.01)。结论 ARHI基因mRNA和蛋白在胶质瘤中低表达,且表达水平与胶质瘤恶性程度负相关,提示ARHI基因低表达对胶质瘤的形成和恶性演变具有重要作用。

MAPK通路在G蛋白偶联受体40介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在G蛋白偶联受体40(GPR40)介导的小鼠胰岛NIT-1细胞脂性凋亡中的作用.方法:利用小RNA干扰(siRNA)技术抑制GPR40在NIT-1细胞表达,观察对细胞脂性凋亡(棕榈酸、油酸干预)的影响.采用Hoechst33342染色、TUNNEL及流式细胞仪检测细胞凋亡.Western Blot检测棕榈酸、油酸孵育NIT-1细胞各时间点及GPR40 siRNA转染NIT-1细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平.并予相应激酶阻断剂预处理后观察细胞脂性凋亡变化.结果:棕榈酸孵育后空转组,对照siRNA转染和GPR40 siRNA转染细胞凋亡率差异无统计学意义.予棕榈酸和油酸共孵育,GPR40 siRNA转染细胞凋亡率明显高于空转组细胞;油酸孵育使ERK1/2呈时间依赖性地激活(磷酸化),ERK的特异性抑制剂预处理NIT-1细胞后,继予棕榈酸和油酸共孵育,NIT-1细胞凋亡率较对照组明显升高.油酸刺激GPR40 siRNA转染细胞的ERK磷酸化水平较空转组明显下降.结论:棕榈酸诱导NIT-1细胞脂性凋亡不依赖GPR40,而不饱和脂肪酸油酸对NIT-1细胞脂性凋亡的保护作用至少部分通过GPR40介导.其可能的假设机制为不饱和脂肪酸通过受体GPR40,激活ERK-MAPK通路,导致抗凋亡效应产生.

心肌缺血再灌注时Gsα和Giα蛋白含量mRNA水平变化及意义

目的:研究新生豚鼠心肌缺血再灌注时Gsα和Giα蛋白含量及其mRNA水平的变化以及与心功能变化的关系.方法:30只新生豚鼠随机分为3组(每组n=10),建立离体心脏左心做功模型.组Ⅰ:离体心脏缺血90min;组Ⅱ:缺血时予ThomasⅡ号液;组Ⅲ:缺血时予冷血心停搏液.各组均再灌注60min.检测心功能指标,Gsα和Giα蛋白含量及其mRNA水平的变化.结果:组Ⅰ和组Ⅱ在再灌注时的心功能明显受损(P<0.01),组Ⅲ在再灌注结束时无明显变化(P>0.05).组Ⅰ和组Ⅱ在缺血后和再灌注后Gsα蛋白含量分别为缺血前的37.5%,40.3%,36.6%和39.5%,GsαmRNA水平分别为缺血前的38.6%,41.4%,35.7%和40.1%,明显降低(P<0.01);Giα蛋白含量分别为缺血前的198.1%,175.4%,201.3%,181.4%,Gi2αmRNA水平分别为缺血前的215.4%,180.2%,210.3%和176.2%,显著升高(P<0.01).组Ⅲ在再灌注后Gsα和Giα蛋白含量及其mRNA恢复至缺血前的水平(P>0.05).结论:Gsα和Giα蛋白的平衡遭受破坏可能是未成熟心肌缺血再灌注损伤发生的机制之一.

肝素、IGFBP-4及IGF-1对肺成纤维细胞糖代谢及功能的影响

目的:探讨类胰岛素生长因子(IGF-1)及其结合蛋白-4(IGFBP-4)、肝素在肺纤维化形成过程中的相互关系。方法:选择二倍体人胚肺成纤维细胞(lung fibroblast,LF)株,分别给予100μg/L IGF-1、100μg/LIGF-1+100μg/LIGFBP-4、100μg/LIGF-1+200μg/LIGFBP-4、100μg/LIGF-1+100μg/LIGFBP-4+100μg/L肝素、100μg/L IGF-1+100μg/L IGFBP-4+200μg/L肝素、100μg/L IGF-1+100μg/L肝素、100μg/LIGF-1+200μg/L肝素刺激24 h。检测细胞外弹性蛋白、胶原蛋白及细胞内葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)、己糖激酶-2(HK-2)的含量。结果:与空白对照组相比,IGF-1组HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达增强(P<0.05);加入IGFBP-4以后HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达明显强于IGF-1组(P<0.05);而同时加入肝素与IGFBP-4后HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达明显抑制(P<0.05),并且这一抑制效应随肝素用量增加而更加明显;但单加肝素时HK-2及GLUT-4mRNA及相关蛋白表达抑制不如前组明显(P<0.05)。结论:(1)IGF-1能够刺激肺成纤维细胞的糖代谢,使HK-2及GLUT-4mRNA及细胞外基质(ECM)蛋白表达增强;(2)单纯增加IGFBP-4不仅不能抑制IGF-1的刺激作用,反而增加HK-2及GLUT-4mRNA及相应蛋白表达,可能与IGFBP-4的降解有关;(3)IGFBP-4在肝素存在的情况下,能明显抑制IGF-1对肺成纤维细胞的刺激作用,使HK-2及GLUT-4及细胞外基质蛋白表达明显减少,说明肝素以及未被降解的IGFBP-4对肺纤维化可能是有效的防护因子。

极性蛋白Par3在小鼠胚胎着床子宫内膜中的表达

目的：探讨极性蛋白Par3在不同小鼠模型子宫内膜中的表达水平及其在小鼠胚胎着床过程中的作用。方法：建造妊娠1-8 d（早孕组）、假孕1-5 d（假孕组）、卵巢切除后类固醇激素注射（类固醇激素处理组）小鼠模型,应用免疫组织化学方法检测各种模型中小鼠子宫内膜腔上皮中Par3的表达情况,并使用Image-Pro Plus（IPP）图像分析系统进行半定量分析。结果：早孕组妊娠1-4 d小鼠内膜腔上皮中持续表达Par3并于妊娠4 d达高峰,于妊娠5 d明显减弱,妊娠6-8 d围绕胚胎初级蜕膜区域阴性表达并于次级蜕膜区域阳性表达;假孕组Par3表达趋势与早孕组类似,趋势变化幅度较早孕组小;类固醇激素处理组中,注射雌二醇（E_2）组、孕酮（P_4）组以及同时注射E_2＋P_4组的Par3表达水平均明显低于注射芝麻油对照组。结论：雌、孕激素可下调Par3表达,Par3表达水平下降引起子宫内膜腔上皮极性短暂下调有利于胚胎着床。

NADH对化学损伤PC12细胞转谷酰胺酶Ⅱ、Cyclin和G蛋白表达的调控

为探讨NADH对PC12细胞化学药物损伤后的修复作用 ,采用细胞实验检测NADH对顺铂、阿霉素、鱼藤酮对肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞系细胞毒性作用的影响 ,并运用流式细胞仪对细胞周期蛋白、G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ含量进行分析。结果发现 ,NADH能够明显抑制化学药物顺铂、阿霉素、鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用 ,上调细胞损伤后周期蛋白A和B1表达及下调周期蛋白D1表达 ;上调G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ表达。提示NADH抑制和修复化学药物对PC12细胞的损伤与细胞周期蛋白。