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LRG47/EBP50重组慢病毒靶向载体疫苗增强RAW264.7小鼠巨噬细胞的抗结核免疫及机制 被引量:1
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作者 呙阳 周洁 +6 位作者 乐芳 王依珍 付鹏 苏日古 黄自坤 罗清 李俊明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期679-684,共6页
目的构建免疫相关p47 GTP酶/埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白结合磷蛋白50(LRG47/EBP50)基因共表达重组慢病毒靶向载体,探讨该基因疫苗在抗结核免疫中的作用。方法利用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒载体pLenti-EBP50-LRG47,包装成慢病毒LV-E... 目的构建免疫相关p47 GTP酶/埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白结合磷蛋白50(LRG47/EBP50)基因共表达重组慢病毒靶向载体,探讨该基因疫苗在抗结核免疫中的作用。方法利用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒载体pLenti-EBP50-LRG47,包装成慢病毒LV-EBP50-LRG47后,H37Rv菌株感染RAW264.7小鼠巨噬细胞。荷菌量计数检测各组杀菌能力,流式细胞术检测巨噬细胞的自噬和凋亡水平,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达,紫外分光光度计法检测一氧化氮(NO)的表达水平。结果重组慢病毒LV-EBP50-LRG47感染巨噬细胞后,可成功过表达EBP50和LRG47,与对照组相比,LV-EBP50-LRG47可显著抑制胞内H37Rv的生长,LV-EBP50-LRG47感染巨噬细胞自噬和凋亡水平显著上调,iNOS和NO表达水平显著上调。结论LRG47/EBP50共表达的巨噬细胞自噬、凋亡增强,iNOS、NO产生增加,显著抑制胞内H37Rv的生长。 展开更多
关键词 免疫相关p47 gtp(lrg47) 埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白结合磷蛋白50(EBP50) 结核分枝杆菌(MTB) 巨噬细胞 自噬 凋亡 诱导型一氧化氮合(iNOS) 一氧化氮(NO)
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干扰素诱导的GTP酶及其在抗感染先天免疫系统中的作用
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作者 张艳 叶向群 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期613-616,共4页
干扰素(interferon,IFN)介导脊椎动物对微生物天然免疫反应的重要免疫分子。一般认为其效应主要是通过诱导ISG(interferon-stimulated gene)转录、表达生成相应效应蛋白来实现。其中GTPase家族是IFN诱导的蛋白质中最丰富的成员之一。目... 干扰素(interferon,IFN)介导脊椎动物对微生物天然免疫反应的重要免疫分子。一般认为其效应主要是通过诱导ISG(interferon-stimulated gene)转录、表达生成相应效应蛋白来实现。其中GTPase家族是IFN诱导的蛋白质中最丰富的成员之一。目前研究较多的几个GTP酶(GTPase)有Mx蛋白(myxovirus-resistant,抗黏液病毒蛋白)、p47GTPase(immunity-related GTPase,IRG)、GBP(guanine bindin gprotein)、VLIG(very large inducible GTPase)。不同的脊椎动物中,GTPase家族成员的基因分布、蛋白质结构和功能及其机制等存在较大的差异。 展开更多
关键词 gtp MX p47 GBP VLIG
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IL-10在感染日本血吸虫p47 GTP酶缺失小鼠中的免疫调节作用 被引量:1
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作者 吴婧娇 田芳 +4 位作者 高雅楠 杜晓棠 张美娟 季旻珺 吴观陵 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期111-116,F0003,共7页
目的在日本血吸虫早期感染模型和SEA致敏模型中,研究IGTP和IRG-47缺失小鼠在抵抗日本血吸虫感染过程中IL-10的免疫调节作用。方法以IGTP基因敲除(IGTP-/-)小鼠、IRG-47基因敲除(IRG-47-/-)小鼠和野生型(WT)小鼠为研究对象,建立日本血吸... 目的在日本血吸虫早期感染模型和SEA致敏模型中,研究IGTP和IRG-47缺失小鼠在抵抗日本血吸虫感染过程中IL-10的免疫调节作用。方法以IGTP基因敲除(IGTP-/-)小鼠、IRG-47基因敲除(IRG-47-/-)小鼠和野生型(WT)小鼠为研究对象,建立日本血吸虫早期感染模型和可溶性虫卵抗原(SEA)致敏模型。在早期感染模型中,以HE染色观察耳廓的病理变化,间接ELISA法检测耳廓皮片培养上清中Th1/Th2型细胞因子的表达水平;在SEA致敏模型中,以间接ELISA法检测血清中日本血吸虫特异性IgG抗体、脾单个核细胞培养上清中Th1/Th2型细胞因子的表达水平;以及流式细胞术检测脾细胞亚群比例的变化。结果日本血吸虫感染7d后,IGTP-/-、IRG-47-/-和WT小鼠的耳廓病理变化无显著差异;但IRG-47-/-小鼠耳廓培养上清中IL-10水平显著低于IGTP-/-小鼠。SEA致敏小鼠3周后,IGTP-/-小鼠血清中SEA特异性IgG抗体水平显著低于WT小鼠;IRG-47-/-小鼠脾细胞在体外SEA刺激下,产生的IL-10水平显著高于IGTP-/-小鼠和WT小鼠;流式结果显示IRG-47-/-小鼠脾中Th2细胞比例显著低于WT小鼠。结论SEA是IRG-47缺失小鼠抵抗日本血吸虫、促使宿主产生保护性应答的重要调节因素,IL-10在此过程中是重要的免疫调节分子。 展开更多
关键词 日本血吸虫 p47gtp 免疫调节 IL-10 基因敲除 小鼠
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p47 GTP酶在日本血吸虫感染中的应答特征
4
作者 陈莹莹 高雅楠 +4 位作者 陈琳 侯敏 王铖芸 季旻珺 吴观陵 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第1期12-18,共7页
目的建立日本血吸虫感染小鼠模型,研究IGTP和IRG-47在日本血吸虫感染中的作用特点及参与免疫应答的能力。方法以IGTP基因敲除(IGTP KO)小鼠、IRG-47基因敲除(IRG-47KO)小鼠和野生型C57BL/6J小鼠(WT)为研究对象,建立日本血吸虫感染实验... 目的建立日本血吸虫感染小鼠模型,研究IGTP和IRG-47在日本血吸虫感染中的作用特点及参与免疫应答的能力。方法以IGTP基因敲除(IGTP KO)小鼠、IRG-47基因敲除(IRG-47KO)小鼠和野生型C57BL/6J小鼠(WT)为研究对象,建立日本血吸虫感染实验模型。感染10周后计数成虫数和虫卵数,以HE染色观察肝脏的病理变化,以间接ELISA法检测血清中日本血吸虫特异性IgG抗体,以RTQ-PCR检测脾细胞中细胞因子和趋化因子的mR-NA表达水平。结果日本血吸虫感染10周后,IGTP KO小鼠与WT小鼠虫荷数和卵荷数差异无统计学意义(P<0.05),IRG-47KO小鼠的虫荷数和卵荷数均低于IGTP KO和WT小鼠。IRG-47KO组小鼠肝脏单个虫卵肉芽肿面积显著小于IGTP KO组和WT组(P<0.05)。日本血吸虫感染10周后,IGTP KO小鼠SWAP和SEA特异IgG2a水平高于IRG-47KO小鼠和WT小鼠(P<0.05);IGTP KO小鼠脾细胞il12、il4mRNA表达高于WT小鼠(P<0.05),且if-ng表达高于IRG-47KO小鼠(P<0.05);IRG-47KO小鼠趋化因子ccl3、cxcl9、cxcl10mRNA表达显著低于IGTP KO小鼠和WT小鼠(P<0.05)。结论 IRG-47缺失对日本血吸虫感染有一定保护作用,IRG-47KO小鼠肝脏病理特征与其趋化因子的表达相一致。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 p47 gtp 免疫应答 特征
原文传递
p47 GTPase缺失对小鼠巨噬细胞成熟及功能的影响
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作者 杜晓棠 陈雪松 +2 位作者 张美娟 季旻珺 吴观陵 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第4期275-279,共5页
目的以日本血吸虫感染小鼠为模型,研究p47GTP酶家族成员IGTP及IRG-47缺失对巨噬细胞发育成熟及功能的影响。方法常规方法建立日本血吸虫感染小鼠模型,通过实时荧光定量PCR观察日本血吸虫不同感染时期igtp或irg47单一基因缺失的巨噬细胞i... 目的以日本血吸虫感染小鼠为模型,研究p47GTP酶家族成员IGTP及IRG-47缺失对巨噬细胞发育成熟及功能的影响。方法常规方法建立日本血吸虫感染小鼠模型,通过实时荧光定量PCR观察日本血吸虫不同感染时期igtp或irg47单一基因缺失的巨噬细胞igtp、lrg47和irg47的mRNA水平;流式细胞术检测巨噬细胞表面分子MHC-Ⅱ类(I-A)、CD16/32、CD40和CD80的表达;应用硝酸还原酶法检测感染急性期巨噬细胞产生炎症因子NO的能力。结果巨噬细胞igtp、irg47及lrg47基因在感染血吸虫后3周表达快速上调,感染后6周上调表达的幅度相差各异,IRG-47-/-小鼠igtp和lrg47转录明显上调。感染前和感染后3周IGTP-/-组的巨噬细胞表面CD16/32和CD40表达均较IRG-47-/-组和WT组高;感染后6周表达差异均无统计学意义(P>0.05)。在感染后6周,无有丝分裂原刺激情况下IGTP-/-组的巨噬细胞较IRG-47-/-组和WT组产生更高水平的NO;LPS刺激后,3组巨噬细胞产生的NO水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论IGTP及IRG-47缺失不影响巨噬细胞发育成熟,也不影响巨噬细胞产生炎症因子NO的潜能,提示p47GTP酶可能具有独特的、不依赖NO的作用方式。 展开更多
关键词 p47 gtp 巨噬细胞 血吸虫 日本 小鼠
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