T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1和Rac GTP酶激活蛋白1在人乳腺癌组织芯片中的表达及意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)在人乳腺癌组织芯片中的表达及意义。方法:采用组织芯片和免疫组织化学法检测65例乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织中Tiaml和Rac1的表达,并探讨其表达与乳腺癌临床病理特征的关系,以及两分子标志物之间的相互关系。结果:Tiaml、Rac1在乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中阳性表达率分别为73.8%、41.5%和70.8%、32.3%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。Tiaml与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、ER、PR、Ki-67表达密切相关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤大小、CerbB-2、p53、E-cadherin表达均无关(P>0.05),Rac1与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、Ki-67表达密切相关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤大小、ER、PR、CerbB-2、p53、E-cadherin表达均无关(P>0.05)。Tiaml和Rac1的表达呈正相关关系(r=0.541,P=0.000)。结论:Tiaml和Rac1在乳腺癌增殖、侵袭和转移中起促进作用,联合检测Tiam1及Rac1的表达有望成为乳腺癌预后和个体化治疗的有效指标。

IQ结构域GTP酶激活蛋白1在胰腺癌中表达及与预后的相关性研究

目的检测胰腺癌组织中IQ结构域GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)的表达与临床病理特征及与预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测66例胰腺癌组织和49例癌旁组织中IQGAP1的表达情况,分析IQGAP1与胰腺癌临床病理特征及其与预后的相关性。结果胰腺癌组织和癌旁组织中IQGAP1的阳性表达率分别为63.636%和12.245%,胰腺癌组织高于癌旁组织(P<0.05);IQGAP1的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、神经浸润及临床分期差异无统计学意义(P>0.05)。IQGAP1阳性患者的总生存期短于IQGAP1阴性患者(P=0.002),Cox多因素分析显示IQGAP1阳性表达是独立预后危险因素(^HR=2.128,95%CI=1.127,4.019,P=0.020)。结论胰腺癌组织中高表达的IQGAP1可能参与胰腺癌的发生、发展及转移过程,并可作为判断胰腺癌预后的重要指标。

ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1、肌动蛋白束蛋白1在胃癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的探讨ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1(ASAP1)、肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)在胃癌中的表达、预后相关性。方法运用UALCAN、Kaplan-Meier数据库分析ASAP1、FSCN1在胃癌组织与正常胃黏膜组织中的表达与患者预后的关系,并采用qRT-PCR、免疫组化验证ASAP1、FSCN1在胃癌与癌旁的表达差异。结果与正常胃黏膜组织相比,ASAP1、FSCN1在胃癌组织中表达升高(P<0.01),且ASAP1、FSCN1高表达组患者的总生存率下降(P<0.05)。qRT-PCR显示胃癌中ASAP1、FSCN1 mRNA的表达水平高于癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。免疫组化结果显示,胃癌ASAP1、FSCN1阳性表达率高于癌旁正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。ASAP1 mRNA和FSCN1 mRNA的表达成正相关(r=0.558,P=0.000)。ASAP1、FSCN1的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,ASAP1、FSCN1阴性表达总体生存率高于阳性表达(P<0.05)。结论ASAP1、FSCN1在胃癌组织中均高表达,2者可能协同促进胃癌的发生和发展,且在胃癌的浸润、转移中发挥了重要作用。

IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达

目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定。用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果。结果经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确。IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5. 780)%和(83±3. 851)%。IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 001),表达抑制率分别为(82±2. 424)%及(77±2. 791)%。结论成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础。

Rap1 GTP酶激活蛋白1、基质金属蛋白酶2与基质金属蛋白酶9在结直肠癌中的表达及其意义

目的 探讨Rap1 GTP酶激活蛋白1（Rap1GAP）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）与基质金属蛋白酶9（MMP-9）在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学法检测Rap1GAP、MMP-2与MMP-9在结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤及正常结直肠组织中的表达，分析各组间表达的差异及与临床病理参数的关系。结果 Rap1GAP在结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤和正常结直肠组织中的阳性率分别为30.4 %（14／46）、77.8 %（14／18）、69.6 %（16／23）、95.2 %（20／21），各组间表达差异有统计学意义（χ^2＝30.659，P＝0.000）；MMP-2的阳性率分别为71.7 %（33／46）、55.6 %（10／18）、52.2 %（12／16）、9.5 %（2／21），各组间表达差异有统计学意义（χ^2＝22.459，P＝0.000）；MMP-9的阳性率分别为76.1 %（35／46）、61.1 %（11／18）、56.5 %（13／23）、14.3 %（3／21），各组间表达差异有统计学意义（χ^2＝22.643，P＝0.000）。在结直肠癌中，Rap1GAP阳性率与肿瘤分化程度有关（χ^2＝5.275，P＝0.022），与患者性别、年龄及淋巴结转移无关（均P＞0.05）；MMP-2、MMP-9阳性率与淋巴结转移有关（χ^2＝6.661，P＝0.010；χ^2＝8.475，P＝0.040），与患者性别、年龄、分化程度均无关（均P＞0.05）。在结直肠癌中，Rap1GAP的表达与MMP-2及MMP-9呈负相关（r＝-0.424，P＝0.003；r＝-0.294，P＝0.048）；MMP-2和MMP-9的表达无相关性（r＝0.101，P＝0.505）。结论 Rap1GAP、MMP-2与MMP-9在结直肠癌的恶性生物学行为中起重要作用。在结直肠癌中，Rap1GAP与MMP-2和MMP-9的表达呈负相关，三者相互作用影响着结直肠癌的发生、发展。

GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1表达下调对人肺癌细胞A549体外迁移的抑制作用

目的研究GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1〔GTPase activating protein(Src homology domain 3)binding protein 1,G3BP1〕是否在人非小细胞肺癌细胞系A549体外迁移中起作用,以判断该蛋白质是否可以作为抗肿瘤药物靶点。方法人非小细胞肺癌细胞系A549及乳腺癌细胞系MDA-MB-231培养于10%(V/V)的RPMI1640培养基中。以G3BP1过表达的乳腺癌细胞系MDA-MB-231作为阳性对照,采用Western印迹法检测A549细胞内G3BP1的表达情况;向A549细胞内转染以G3BP1的mRNA为靶标的小干扰RNA(siRNA)以抑制G3BP1的表达;分别检测G3BP1表达抑制后A549细胞穿过8μm聚碳酸酯膜细胞数、定向运动距离及穿过人工基底膜细胞数。结果 Western印迹法显示G3BP1在非小细胞肺癌细胞系A549中过表达;转染siRNA后72 h内提取A549细胞蛋白质,Western印迹法检测显示G3BP1表达被完全抑制;G3BP1表达抑制后A549细胞穿过8μm聚碳酸酯膜细胞数、定向运动距离及穿过人工基底膜细胞数均显著减少(P<0.05)。结论下调G3BP1表达抑制人肺癌细胞A549的体外迁移。

早期宫颈癌组织GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1的表达与宫颈癌临床病理特征和根治术后复发的相关性

目的探讨早期宫颈癌组织GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)的表达与根治术后复发的相关性。方法选取2015年2月—2018年2月丽水市人民医院收治的拟行根治性手术治疗的早期宫颈癌患者372例,均于手术时保留宫颈癌组织与癌旁组织,采用免疫组织化学法检测宫颈癌组织与癌旁组织中G3BP1表达情况,并分析宫颈癌组织中G3BP1蛋白表达与患者临床病理特征的关系。另术后随访3年,根据患者复发情况将其分为复发组与未复发组,对比复发组、未复发组宫颈癌组织中G3BP1蛋白表达情况,采用多因素logistic回归性分析法分析宫颈癌组织中G3BP1蛋白表达与宫颈癌患者根治性术后复发的关系,并采用受试者工作曲线(ROC)分析癌组织中G3BP1蛋白表达对宫颈癌患者根治性术后复发的预测效能。结果宫颈癌组织中G3BP1蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);G3BP1蛋白在不同病理类型、有无子宫旁侵犯患者中的阳性表达率无显著性差异(P>0.05),年龄>40岁、最大肿瘤直径≥4 cm、临床分期为ⅡA1~ⅡA2、低/未分化、出现淋巴结转移、有肌层浸润、有阴道浸润的宫颈癌患者G3BP1蛋白阳性表达率均分别高于年龄≤40岁、最大肿瘤直径<4 cm、临床分期为ⅠA1~ⅠA2、ⅠB 1~ⅠB 2、高/中分化、无淋巴结转移、无肌层浸润及无阴道浸润的患者(P<0.05);早期宫颈癌患者根治术后3年复发率为6.45%,复发组宫颈癌组织中G3BP1蛋白阳性表达率高于未复发组(P<0.05);阴道切缘阳性、G3BP1蛋白阳性表达均是宫颈癌患者根治术后复发的独立危险因素(P<0.05)。宫颈癌组织中G3BP1蛋白阳性表达预测宫颈癌患者根治性术后复发的灵敏度、特异度、AUC及95%CI分别为91.75%(22/24)、86.50%(301/348)、0.938及0.908~0.960(P<0.001)。结论早期宫颈癌组织中G3BP1蛋白呈现高表达,其在不同的年龄、肿瘤大小、临床分期、分化程度、淋巴结转移、肌层浸润及阴道浸润等病理特征患者中呈显著差异性表达,且在根治术后复发的患者中阳性表达率更高,是早期宫颈癌患者根治术后复发的危险因素,对术后复发具有一定的预测价值。

Tiam1和Rac1在食管鳞癌组织中蛋白表达的相关性及临床病理意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)的表达与食管鳞癌发生发展、浸润转移的关系.方法:62例食管癌手术切除标本于2006-02-26/03-16取自食管癌高发区河南省安阳市肿瘤医院.应用免疫组织化学SP法检测62例食管鳞癌组织、20例癌旁不典型增生组织及20例正常食管黏膜组织中Tiam1及Rac1蛋白表达.结果:食管鳞癌组织中Tiam1蛋白表达与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.779,7.680,4.502,4.987;均P<0.05);在食管鳞癌癌变过程中Tiam1蛋白表达在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为5.0%(3/20)、55.0%(11/20)、72.6%(45/62),组间比较有明显差异(χ2=20.643,P<0.05);Rac1蛋白表达也与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.652,6.884,8.276,6.371;均P<0.05);Rac1蛋白在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为25.0%(5/20)、70.0%(14/20)、70.0%(44/62),组间比较有明显差异(χ2=14.245,P<0.05).Tiam1及Rac1的表达呈正相关关系(γp=0.642,P<0.05).结论:Tiam1及Rac1可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的辅助指标.

人SRGAP1蛋白结构和功能预测

目的:利用生物信息学对人Slit-Robo GTP酶激活蛋白1(SRGAP1)蛋白质的理化性质,信号肽,亲水性/疏水性,跨膜区域,蛋白质二级结构、三级结构,蛋白质间的相互作用及GO注释进行预测分析。方法:使用多种分析软件对SRGAP1蛋白进行在线预测分析。结果:SRGAP1理化性质分析结果显示,人SRGAP1蛋白有1 085个氨基酸,等电点为6.36;生物信息学预测分析结果显示,SRGAP1是无信号肽、无跨膜结构的亲水不稳定蛋白质。二级结构存在19个α螺旋和11个β折叠,预测到10个与SRGAP1存在相互作用的蛋白。SRGAP1蛋白在调控GTP酶活性,细胞迁移,信号通路中有重要的作用。结论:系统预测分析了等电点为6.36的人SRGAP1蛋白理化性质、结构和功能,为将来探索SRGAP1具体功能和分子机制提供了一定的思路和理论基础。

Rap1GTP酶激活蛋白甲基化状态与结肠癌关系的研究

目的 探讨结肠癌中抑癌基因Rap1GTP酶激活蛋白（Rap1GAP）启动子甲基化情况,为结肠癌的早期诊断、早期治疗、靶向治疗及改善预后等提供理论依据及研究方向.方法 回顾性分析山西省忻州市人民医院病理科2010年1月至2014年9月病理诊断为结肠腺癌的患者33例,其中男性19例,女性14例,年龄41~72岁,取手术切除石蜡包埋标本.选取同期16例结肠腺瘤患者的石蜡包埋标本,包括男性9例,女性7例,年龄34~58岁.选取肿瘤远端（距肿瘤〉15 cm）切缘正常组织13例.使用定量甲基化特异性聚合酶链反应（q-MSP）技术检测Rap1GAP基因启动子区甲基化水平.比较3种组织间及临床病理因素亚组间Rap1GAP基因启动子区甲基化水平的差异.结果 Rap1GAP启动子甲基化率[中位数（四分位数间距）]在结肠癌、结肠腺瘤和癌旁正常组织中分别为65.43%（50.35%）、21.37%（8.39%）、17.43%（15.71%）,结肠癌组高于结肠腺瘤组及癌旁正常组织组,差异有统计学意义（P〈0.05）.结肠癌组男性、女性Rap1GAP启动子甲基化率分别为42.74%（70.44%）、21.98%（80.00%）;≤60岁与〉60岁分别为36.26%（62.62%）、26.23%（76.42%）;高分化癌、中低分化癌分别为21.98%（40.32%）、42.74%（74.20%）;TNMⅠ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期分别为25.31%（48.27%）、36.26%（75.55%）.结肠癌中Rap1GAP甲基化率与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、TNM分期均无关（均P〉0.05）.结论 Rap1GAP启动子甲基化可能与结肠癌的发生、发展有关,可能作为结肠癌早期诊断的靶标.

微小RNA-329靶向三磷酸鸟苷酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭

目的筛选骨肉瘤相关的微小RNA(miRNA,miR),研究其对骨肉瘤细胞的影响及其机制。方法生物信息学筛选GSE39058中骨肉瘤相关miRNA的表达差异,确定miR-329为研究目标。细胞计数试剂盒(CCK-8)分析miR-329对骨肉瘤143B细胞增殖能力的影响,Transwel比较miR-329对骨肉瘤143B细胞侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验观察miR-329对G3BP1的调控作用。蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-329转染前后G3BP1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达水平。组间比较采用t检验。结果获得差异miRNA 90个,其中miR-329功能富集程度较高。聚合酶链反应(PCR)结果表明miR-329在各骨肉瘤细胞中的表达低于成骨细胞hFOB1.19(P<0.05)。CCK-8结果显示miR-329模拟物组143B细胞增殖率较对照组NC低(0.571±0.019比0.975±0.022,P<0.05),差异有统计学意义。Transwell分析发现转染miR-329模拟物组侵袭细胞数明显少于对照组[(28.83±4.55)个比(58.17±6.25)个,t=6.220,P<0.05],差异有统计学意义。双荧光素酶报告基因分析结果显示共转染G3BP1 mRNA3’端非编码区(3’UTR)wt和miR-329质粒的细胞荧光素酶相对活性较对照组显著降低(0.45±0.06比1.01±0.09,t=1.250,P<0.05),差异有统计学意义。Western blot结果表明转染miR-329 mimic后E-cadherin表达水平高于对照组(0.51±0.11比0.31±0.12,t=2.903,P<0.05),而Vimentin、N-cadherin表达量低于对照组(0.13±0.03比0.25±0.06,t=2.859,P<0.05;0.28±0.11比0.45±0.12,t=2.574,P<0.05),差异有统计学意义。结论miR-329通过靶向抑制G3BP1表达,抑制肿瘤细胞的上皮-间充质转化,从而抑制骨肉瘤143B细胞的体外增殖和侵袭。

microRNA-124高表达对甲状腺乳头状癌细胞系K1侵袭、迁移的影响及其机制

目的观察微小RNA 124(microRNA-124)高表达对甲状腺乳头状癌(TPC)细胞系K1侵袭、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期K1细胞,分为三组,观察组用促进microRNA-124表达的microRNA-124mimics转染,对照组转染microRNA无关序列,空白组不做任何处理。培养24 h,Transwell试验观测三组侵袭数,采用细胞划痕试验观测三组迁移细胞数,采用Real-time PCR法检测细胞含IQ基元GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)mRNA及蛋白、microRNA-124,采用荧光素酶报告基因试验检测三组细胞中含有IQGAP1基因3'非翻译区(UTR)报告质粒的荧光素酶活性。结果培养24 h时观察组、对照组、空白组细胞侵袭数分别为(104.32±11.21)、(304.27±20.83)、(299.38±18.32)个,观察组细胞侵袭数低于对照组和空白组(P均<0.05)。培养24 h后,观察组、对照组、空白组细胞迁移数分别为(62.16±3.21)、(104.27±6.83)、(99.38±5.32),观察组划痕愈合百分比低于对照组和空白组(P均<0.05)。观察组细胞IQGAP1 mRNA及蛋白相对表达量均低于对照组、空白组(P均<0.05);观察组microRNA-124相对表达量均高于对照组、空白组(P均<0.05)。培养48 h观察组、对照组、空白组基因质粒的相对荧光素酶活性分别为0.24±0.06、1.06±0.15、1.10±0.17,观察组相对荧光素酶活性低于对照组和空白组(P均<0.05)。结论 microRNA-124高表达可抑制K1细胞的侵袭、迁移,其机制可能为microRNA-124下调IQGAP1表达。

胃癌组织Rap1GAP、HHLA2表达变化及其与患者临床病理特征和预后的关系

目的观察胃癌组织Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)、人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)mRNA表达变化,并探讨其表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择胃癌患者97例,取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达。比较胃癌组织与癌旁正常组织Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达差异,分析二者表达与胃癌患者临床病理特征的关系。以Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达的中位数为截断值,将患者分为Rap1GAP、HHLA2 mRNA高表达者与低表达者,比较不同Rap1GAP、HHLA2 mRNA表达者5年生存率差异。采用Cox风险比例回归模型分析影响胃癌患者预后的危险因素。结果胃癌组织Rap1GAP mRNA相对表达量低于癌旁正常组织,HHLA2 mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P均<0.05)。Rap1GAP、HHLA2A mRNA表达与肿瘤浸润深度、TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05)。Rap1GAP mRNA低表达者5年生存率低于Rap1GAP mRNA高表达者,HHLA2 mRNA高表达者5年生存率低于HHLA2 mRNA低表达者(P均<0.05)。Cox风险比例回归分析显示,有淋巴结转移、Rap1GAP mRNA低表达、HHLA2 mRNA高表达是胃癌患者预后不良的危险因素(P均<0.05)。结论胃癌组织Rap1GAP低表达、HHLA2高表达,二者异常表达与胃癌恶性生物学行为和患者预后不良有关。Rap1GAP、HHLA2有可能成为胃癌预后评估的生物标志物和潜在的治疗靶点。

脑胶质瘤组织Rap1GAP的水平及其临床意义

目的探讨Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)在脑胶质瘤组织中的表达及其与临床病理特征和预后关系。方法收集本院2011年1月至2016年12月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织79例和正常脑组织33例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测以上组织中的Rap1GAP mRNA水平,分析脑胶质瘤组织和正常脑组织中的Rap1GAP mRNA水平;分析脑胶质瘤不同临床病理特征(年龄、性别、病理类型、分化程度、病理分级、瘤周水肿和浸润深度)的Rap1GAP mRNA水平和分布情况,根据随访资料分析Rap1GAP mRNA水平与预后的关系。结果脑胶质瘤组织的Rap1GAP mRNA水平为0. 172±0. 019,低于正常脑组织的1. 068±0. 069,差异有统计学意义(P<0. 05)。Rap1GAP mRNA水平和分布与年龄、性别、瘤周水肿和浸润深度无关,但与病理类型、分化程度和病理分级有关(P<0. 05),在胶质母细胞瘤、低分化和Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤组织的Rap1GAP mRNA水平和高表达率均较低,依次为0. 104±0. 006和27. 0%(10/37)、0. 099±0. 006和16. 1%(5/31)及0. 127±0. 007和39. 3%(22/56)。Rap1GAP低表达组的中位总生存期(OS)为14. 5个月,低于高表达组的21. 4个月(P<0. 05);胶质母细胞瘤、低分化和Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤组织中,低表达组的中位OS分别为8. 8、11. 2和11. 5个月,均低于高表达组的18. 2、19. 8和19. 8个月(P<0. 05)。结论脑胶质瘤组织中Rap1GAP低表达参与了该肿瘤的发生发展,Rap1GAP低表达者的预后较差,提示Rap1GAP发挥类似抑癌基因的作用,可作为脑胶质瘤的治疗的候选基因。

胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin的表达及临床意义

目的:探讨胰腺癌组织中IQ结构域GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)、癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)的表达及临床意义。方法:回顾性分析2011年1月—2014年1月武威市人民医院行胰腺癌根治术治疗的95例胰腺癌患者的病历及随访资料,免疫组织化学染色法检测正常胰腺组织、胰腺癌组织及癌旁组织中IQGAP1和Gankyrin的表达,分析IQGAP1和Gankyrin表达与胰腺癌临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同IQGAP1和Gankyrin表达患者的总生存率的差异,Cox比例风险回归模型分析患者预后的影响因素。结果:与癌旁组织和正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin表达均上调(P<0.05)。IQGAP1和Gankyrin表达均与胰腺癌TNM分期、分化程度和糖类抗原199(CA199)表达相关(P<0.05)。IQGAP1阳性、Gankyrin阳性患者的5年生存率均明显低于阴性患者(P<0.05);Cox比例风险回归分析结果显示,TNM分期、IQGAP1表达、Gankyrin表达和CA199表达均是胰腺癌患者预后的独立危险因素(HR=1.250、13.316、3.542、4.089,P<0.05)。结论:胰腺癌组织中IQGAP1和Gankyrin表达上调,IQGAP1和Gankyrin表达与胰腺癌患者生存以及预后相关,可能作为胰腺癌患者的预后预测因子,辅助胰腺癌的诊断和临床治疗。

miR-506-3p通过靶向IQGAP1基因抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的体外研究

目的探讨miR-506-3p靶向IQ结构域GTP酶激活蛋白(IQGAP)1调控甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法采用qRT-PCR和Western印迹检测甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、KAT-18和正常甲状腺上皮细胞TEC中miR-506-3p、IQGAP1 mRNA和IQGAP1蛋白的表达;建立miR-506-3p过表达或IQGAP1抑制表达的SW579细胞株。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、P21、P27、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和MMP-14蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-506-3p对IQGAP1的靶向作用。结果与正常甲状腺上皮细胞TEC相比,甲状腺癌细胞SW579、FTC-133和KAT-18中miR-506-3p表达显著降低,而IQGAP1表达显著升高。miR-506-3p过表达或IQGAP1抑制表达均可抑制SW579细胞的增殖、迁移和侵袭。IQGAP1是miR-506-3p的靶基因,miR-506-3p可负向调控IQGAP1表达。IQGAP1过表达可显著逆转miR-506-3p对SW579细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-506-3p可通过下调IQGAP1表达抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

人G3BP1真核表达载体的构建及其在食管癌细胞中的定位分析

目的:构建GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)的真核表达载体p EGFP-C3-G3BP1,并观察其在人食管癌EC109细胞中的表达及定位。方法:采用RT-PCR法从EC109细胞中扩增G3BP1 c DNA全长序列,用限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ双酶切PCR产物后克隆至pEGFP-C3载体,转化大肠杆菌DH5α后,挑取阳性克隆提取质粒,经双酶切及测序鉴定;将重组质粒用脂质体法转染EC109细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测G3BP1的表达,荧光显微镜观察G3BP1的定位。结果:目的基因G3BP1的序列完全正确,并在EC109细胞中获得表达,荧光显微镜观察显示G3BP1定位于细胞质。结论:构建了p EGFP-C3-G3BP1真核表达载体,并在EC109细胞中过表达,G3BP1蛋白定位于细胞质,形成应激颗粒(stress granules,SGs)。为进一步探讨G3BP1在食管癌细胞中的功能及其与SGs的相关性奠定了基础。

组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达预测脑胶质瘤外科术后复发的效能及意义研究

目的探讨脑胶质瘤组织细胞质多聚腺苷酸结合蛋白1(PABPC1)mRNA、Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)mRNA、磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(Glypican-1)mRNA表达与病理特征的关联性及预测外科术后复发的效能。方法选取2019年1月至2020年5月我院收治的106例脑胶质瘤手术患者,比较瘤组织、瘤旁组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达,并根据术后6个月复发情况分为复发组和未复发组,比较两组脑胶质瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达,分析脑胶质瘤组织各指标预测外科术后复发的效能。结果瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA低于瘤旁组织,Glypican-1 mRNA高于瘤旁组织(P<0.05);复发组WHO病理分级、PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);WHO病理分级增高,PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA逐渐降低,Glypican-1 mRNA逐渐升高(P<0.05);PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA与WHO病理分级呈负相关,Glypican-1 mRNA与病理分级呈正相关(P<0.05);WHO病理分级控制后,脑胶质瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA仍与外科术后复发相关(P<0.05);PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA联合预测外科术后复发的AUC为0.959,大于单一指标预测(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织PABPC1 mRNA、Rap1GAP mRNA、Glypican-1 mRNA表达与病理特征关系密切,且是外科术后复发的独立危险因素,联合检测可为临床完善脑胶质瘤术后复发风险评价机制提供参考。

敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力

目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核分枝杆菌H37Ra后,利用荧光共聚焦显微镜和平板计数方法对胞内细菌的载量进行检测,采用TranswellTM法检测ASAP1敲低细胞的迁移能力。结果与对照组细胞相比,ASAP1敲低的RAW264.7细胞感染H37Ra后胞内细菌载量增多,且细胞迁移能力降低。结论敲低ASAP1降低RAW264.7细胞的迁移能力。

风湿性心脏病合并持续性心房颤动患者左心房内径增大对心房肌组织Ang Ⅱ/Rac1/STAT3途径表达的影响

目的探讨风湿性心脏病合并持续性心房颤动(房颤)患者左心房内径增大对心房肌组织纤维化程度以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号途径表达水平的影响。方法选取2011年3～12月30例在我院行人工瓣膜置换术的风湿性心脏病患者,其中男16例、女14例,年龄42～70(56.9±6.8)岁。将10例窦性心律患者为作对照组(A组);合并持续性房颤20例患者为病例组,按左心房内径(LAD)分为两组,B组LAD 50～65 mm(n=10),C组LAD>65 mm (n=10)。术中建立体外循环后获取右心耳组织标本,采用HE及Masson染色,并辅以显微图像分析软件计算组织纤维化程度。酶联免疫吸附试验检测心房肌组织的AngⅡ浓度和蛋白印迹法检测心房肌组织Rac1、STAT3蛋白的表达。结果房颤患者左心房内径与对照组比较明显增大。随着左房内径增加,HE染色显示心肌细胞体积增大、数量减少,同时心肌细胞排列紊乱加重及细胞核大小不均一。此外Masson染色显示心房肌细胞周围胶原纤维沉积明显增加并分割包绕。心房肌组织中AngⅡ浓度、Rac1与STAT3蛋白表达水平随左心房内径增大表达水平增强,并与左心房内径呈正相关。结论风湿性心脏病合并持续性房颤患者,心房肌组织纤维化程度以及AngⅡ/Rac1/STAT3信号途径表达水平随左心房内径增大明显增强。