T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1和Rac GTP酶激活蛋白1在人乳腺癌组织芯片中的表达及意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)在人乳腺癌组织芯片中的表达及意义。方法:采用组织芯片和免疫组织化学法检测65例乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织中Tiaml和Rac1的表达,并探讨其表达与乳腺癌临床病理特征的关系,以及两分子标志物之间的相互关系。结果:Tiaml、Rac1在乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中阳性表达率分别为73.8%、41.5%和70.8%、32.3%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。Tiaml与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、ER、PR、Ki-67表达密切相关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤大小、CerbB-2、p53、E-cadherin表达均无关(P>0.05),Rac1与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移、TNM分期、Ki-67表达密切相关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤大小、ER、PR、CerbB-2、p53、E-cadherin表达均无关(P>0.05)。Tiaml和Rac1的表达呈正相关关系(r=0.541,P=0.000)。结论:Tiaml和Rac1在乳腺癌增殖、侵袭和转移中起促进作用,联合检测Tiam1及Rac1的表达有望成为乳腺癌预后和个体化治疗的有效指标。

GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1表达下调对人肺癌细胞A549体外迁移的抑制作用

目的研究GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1〔GTPase activating protein(Src homology domain 3)binding protein 1,G3BP1〕是否在人非小细胞肺癌细胞系A549体外迁移中起作用,以判断该蛋白质是否可以作为抗肿瘤药物靶点。方法人非小细胞肺癌细胞系A549及乳腺癌细胞系MDA-MB-231培养于10%(V/V)的RPMI1640培养基中。以G3BP1过表达的乳腺癌细胞系MDA-MB-231作为阳性对照,采用Western印迹法检测A549细胞内G3BP1的表达情况;向A549细胞内转染以G3BP1的mRNA为靶标的小干扰RNA(siRNA)以抑制G3BP1的表达;分别检测G3BP1表达抑制后A549细胞穿过8μm聚碳酸酯膜细胞数、定向运动距离及穿过人工基底膜细胞数。结果 Western印迹法显示G3BP1在非小细胞肺癌细胞系A549中过表达;转染siRNA后72 h内提取A549细胞蛋白质,Western印迹法检测显示G3BP1表达被完全抑制;G3BP1表达抑制后A549细胞穿过8μm聚碳酸酯膜细胞数、定向运动距离及穿过人工基底膜细胞数均显著减少(P<0.05)。结论下调G3BP1表达抑制人肺癌细胞A549的体外迁移。

荒漠昆虫小胸鳖甲Ras GTP酶激活蛋白基因MpRasGAP的克隆及低温表达分析

【目的】丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)级联是细胞的重要信息传递系统之一,Ras GTP酶激活蛋白(Ras GTPase-activating protein,Ras GAP)基因Ras GAP和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun Nterminal kinase,JNK)基因JNK分别是MAPK信号转导途径的上、下游基因。本研究旨在确定荒漠昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis Ras GAP及JNK基因对低温的响应情况。【方法】从荒漠甲虫小胸鳖甲中克隆获得Ras GAP基因的c DNA序列,利用生物信息学分析软件分析其氨基酸序列并构建进化树,利用实时荧光定量PCR检测低温胁迫条件下Ras GAP和JNK基因的表达情况。【结果】小胸鳖甲Ras GAP c DNA的开放阅读框2 523 bp,命名为MpRas GAP(Gen Bank登录号:KM677930),编码840个氨基酸,分子量96.594 k Da,编码蛋白MpRas GAP属于Ras GAP超家族。MpRas GAP与赤拟谷盗Tribolium castaneum Ras GAP的氨基酸序列一致性达89%。小胸鳖甲在4℃和-4℃低温胁迫1 h后,MpRas GAP的mRNA水平都显著高于室温对照(25℃)。小胸鳖甲在4℃处理3 h或-4℃处理1 h后,Mp JNK的mRNA水平也显著升高。【结论】本研究结果表明小胸鳖甲MpRas GAP和Mp JNK的mRNA水平受低温诱导。研究结果有助于深入研究荒漠昆虫在低温下MAPK信号转导途径的作用机制。

IQ结构域GTP酶激活蛋白1在胰腺癌中表达及与预后的相关性研究

目的检测胰腺癌组织中IQ结构域GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)的表达与临床病理特征及与预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测66例胰腺癌组织和49例癌旁组织中IQGAP1的表达情况,分析IQGAP1与胰腺癌临床病理特征及其与预后的相关性。结果胰腺癌组织和癌旁组织中IQGAP1的阳性表达率分别为63.636%和12.245%,胰腺癌组织高于癌旁组织(P<0.05);IQGAP1的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、神经浸润及临床分期差异无统计学意义(P>0.05)。IQGAP1阳性患者的总生存期短于IQGAP1阴性患者(P=0.002),Cox多因素分析显示IQGAP1阳性表达是独立预后危险因素(^HR=2.128,95%CI=1.127,4.019,P=0.020)。结论胰腺癌组织中高表达的IQGAP1可能参与胰腺癌的发生、发展及转移过程,并可作为判断胰腺癌预后的重要指标。

全血IQ结构域GTP酶激活蛋白3 mRNA表达对肝细胞癌的诊断价值

目的:探讨全血IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQGAP3)mRNA表达对肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法:以30例健康人为对照组,41例HCC患者为HCC组,比较2组全血IQGAP3 mRNA表达的差异。分析HCC组患者全血IQGAP3 mRNA表达与临床资料、血清甲胎蛋白(AFP)的相关性,ROC曲线分析IQGAP3 mRNA、AFP及两者联合对HCC的诊断效能。结果:HCC组全血IQGAP3 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。HCC患者全血中IQGAP3 mRNA表达在不同TNM分期间存在差异(P<0.05),在年龄(P=0.645)、性别(P=0.702)、是否携带HBV表面抗原组间(P=0.147)无显著差异,与血清AFP呈正相关(r=0.713,P<0.01),IQGAP3 mRNA联合AFP的ROC曲线下面积为0.855(95%可信区间0.770~0.940),高于单独使用AFP的0.813(95%可信区间0.712~0.913)。结论:全血IQGAP3 mRNA表达对HCC有诊断价值。

百脉根小GTPase激活蛋白的鉴定及突变体分离

以豆科植物百脉根为材料,利用蛋白质相互作用技术、基因表达分析和突变体表型观察研究了小GTPase激活蛋白RacGAP1和RacGAP3在侧根及根瘤发育中的功能。结果表明:百脉根小GTPase激活蛋白RacGAP1和RacGAP3能与ROP6^(CA)相互作用,RacGAP1和RacGAP3基因主要在根微管组织中表达,在接种根瘤菌后呈下调表达趋势。RacGAP1在侧根及根瘤原基中无表达;RacGAP3则能在侧根及根瘤基部表达。RacGAP1和RacGAP3的LORE1插入突变体表型观察显示,纯合突变体与Gifu野生型共生表型无明显差异,但RacGAP1突变体植株开花后,花朵枯萎掉落不结荚,而杂合体与野生型无差异,表明RacGAP1可能参与调控花粉发育过程,而RacGAP3在早期共生过程中可能起负调控作用。

NADH对化学损伤PC12细胞转谷酰胺酶Ⅱ、Cyclin和G蛋白表达的调控

为探讨NADH对PC12细胞化学药物损伤后的修复作用 ,采用细胞实验检测NADH对顺铂、阿霉素、鱼藤酮对肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞系细胞毒性作用的影响 ,并运用流式细胞仪对细胞周期蛋白、G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ含量进行分析。结果发现 ,NADH能够明显抑制化学药物顺铂、阿霉素、鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用 ,上调细胞损伤后周期蛋白A和B1表达及下调周期蛋白D1表达 ;上调G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ表达。提示NADH抑制和修复化学药物对PC12细胞的损伤与细胞周期蛋白。

NADH对Aβ蛋白损伤PC12细胞转谷酰胺酶Ⅱ、Cyclin和G蛋白表达的调控

目的 探讨NADH对PC1 2细胞Aβ2 5 - 35 损伤后的修复作用。方法 采用细胞实验检测NADH对Aβ2 5 - 35 对鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC1 2细胞系细胞毒性作用的影响,并运用流式细胞仪对细胞周期蛋白、G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ含量进行分析。结果 NADH能够明显抑制Aβ2 5 - 35 对PC1 2细胞的毒性作用,上调细胞损伤后周期蛋白A和B1的表达及下调周期蛋白D1表达;上调G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ表达。结论 NADH抑制和修复Aβ2 5 - 35 对PC1 2的损伤与细胞周期蛋白、G蛋白和转谷酰胺酶Ⅱ调节有关。

早期宫颈癌组织GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1的表达与宫颈癌临床病理特征和根治术后复发的相关性

目的探讨早期宫颈癌组织GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)的表达与根治术后复发的相关性。方法选取2015年2月—2018年2月丽水市人民医院收治的拟行根治性手术治疗的早期宫颈癌患者372例,均于手术时保留宫颈癌组织与癌旁组织,采用免疫组织化学法检测宫颈癌组织与癌旁组织中G3BP1表达情况,并分析宫颈癌组织中G3BP1蛋白表达与患者临床病理特征的关系。另术后随访3年,根据患者复发情况将其分为复发组与未复发组,对比复发组、未复发组宫颈癌组织中G3BP1蛋白表达情况,采用多因素logistic回归性分析法分析宫颈癌组织中G3BP1蛋白表达与宫颈癌患者根治性术后复发的关系,并采用受试者工作曲线(ROC)分析癌组织中G3BP1蛋白表达对宫颈癌患者根治性术后复发的预测效能。结果宫颈癌组织中G3BP1蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);G3BP1蛋白在不同病理类型、有无子宫旁侵犯患者中的阳性表达率无显著性差异(P>0.05),年龄>40岁、最大肿瘤直径≥4 cm、临床分期为ⅡA1~ⅡA2、低/未分化、出现淋巴结转移、有肌层浸润、有阴道浸润的宫颈癌患者G3BP1蛋白阳性表达率均分别高于年龄≤40岁、最大肿瘤直径<4 cm、临床分期为ⅠA1~ⅠA2、ⅠB 1~ⅠB 2、高/中分化、无淋巴结转移、无肌层浸润及无阴道浸润的患者(P<0.05);早期宫颈癌患者根治术后3年复发率为6.45%,复发组宫颈癌组织中G3BP1蛋白阳性表达率高于未复发组(P<0.05);阴道切缘阳性、G3BP1蛋白阳性表达均是宫颈癌患者根治术后复发的独立危险因素(P<0.05)。宫颈癌组织中G3BP1蛋白阳性表达预测宫颈癌患者根治性术后复发的灵敏度、特异度、AUC及95%CI分别为91.75%(22/24)、86.50%(301/348)、0.938及0.908~0.960(P<0.001)。结论早期宫颈癌组织中G3BP1蛋白呈现高表达,其在不同的年龄、肿瘤大小、临床分期、分化程度、淋巴结转移、肌层浸润及阴道浸润等病理特征患者中呈显著差异性表达,且在根治术后复发的患者中阳性表达率更高,是早期宫颈癌患者根治术后复发的危险因素,对术后复发具有一定的预测价值。

ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1、肌动蛋白束蛋白1在胃癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的探讨ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1(ASAP1)、肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)在胃癌中的表达、预后相关性。方法运用UALCAN、Kaplan-Meier数据库分析ASAP1、FSCN1在胃癌组织与正常胃黏膜组织中的表达与患者预后的关系,并采用qRT-PCR、免疫组化验证ASAP1、FSCN1在胃癌与癌旁的表达差异。结果与正常胃黏膜组织相比,ASAP1、FSCN1在胃癌组织中表达升高(P<0.01),且ASAP1、FSCN1高表达组患者的总生存率下降(P<0.05)。qRT-PCR显示胃癌中ASAP1、FSCN1 mRNA的表达水平高于癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。免疫组化结果显示,胃癌ASAP1、FSCN1阳性表达率高于癌旁正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。ASAP1 mRNA和FSCN1 mRNA的表达成正相关(r=0.558,P=0.000)。ASAP1、FSCN1的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,ASAP1、FSCN1阴性表达总体生存率高于阳性表达(P<0.05)。结论ASAP1、FSCN1在胃癌组织中均高表达,2者可能协同促进胃癌的发生和发展,且在胃癌的浸润、转移中发挥了重要作用。

IQ结构域GTP酶激活蛋白3表达对宫颈癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨宫颈癌组织及细胞系中IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQGAP3)的表达及其对宫颈癌细胞增殖、凋亡和转移的影响。方法应用免疫组化和定量PCR检测IQGAP3在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达,利用siRNA敲低IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa中的表达,通过MTT法和流式细胞术分别检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,通过Transwell检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞迁移的影响,从而探讨IQGAP3在宫颈癌细胞的增殖、凋亡及迁移过程中的作用。结果 IQGAP3在宫颈癌组织及细胞中高表达,高表达IQGAP3的患者预后较差(χ~2=6. 15,P=0. 01);敲降IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa的表达后,宫颈癌细胞的增殖受到抑制,凋亡增加,细胞迁移减少,E-cadherin表达增加,N-cadherin表达下调(P均<0. 001)。结论 IQGAP3在宫颈癌组织中表达上调,在宫颈癌细胞增殖和转移过程中发挥重要作用; IQGAP3通过诱导上皮细胞-间充质转变(EMT),促进宫颈癌细胞的转移。

IQ结构域GTP酶激活蛋白3对HepG2细胞顺铂耐药的影响

目的探讨IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ domain GTPase-activating protein 3, IQGAP3)对人肝癌HepG2细胞顺铂耐药的影响及作用机制。方法冻存HepG2细胞株,其中对照组细胞正常培养,IQGAP3组细胞转染IQGAP3,shIQGAP3组细胞转染shIQGAP3,采用Western blot法检测3组IQGAP3蛋白相对表达量。3组细胞均加入顺铂进行培养,采用MTT法检测培养第1-5天细胞存活率,采用实时荧光定量PCR法检测细胞Nanog mRNA、Oct4 mRNA、Bmi1 mRNA、c-Myc mRNA、cyclinD1 mRNA相对表达量,基因集合富集分析GO、KEGG数据库肝细胞癌样本数据中IQGAP3表达与Wnt/β-catenin通路的关系,采用Top/Fop双荧光素酶报告基因实验检测细胞β-catenin激活程度(Top/Fop比值),采用Western blot法检测细胞β-catenin核浆比例。shIQGAP3组细胞再分为shIQGAP3-氯化锂(lithium chloride, LiCl)组和shIQGAP3对照组,其中shIQGAP3对照组加入顺铂进行培养,shIQGAP3-LiCl组加入顺铂+LiCl进行培养,采用MTT法检测2组培养第1-5天细胞存活率,采用Top/Fop双荧光素酶报告基因实验检测细胞β-catenin激活程度(Top/Fop比值)。结果 IQGAP3组细胞IQGAP3蛋白相对表达量(9.13±0.42)均高于对照组(1.08±0.25)和shIQGAP3组(0.42±0.07)(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05)。培养第3-5天,IQGAP3组细胞存活率均高于对照组和shIQGAP3组(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05);培养第1-5天,IQGAP3组、shIQGAP3组、对照组细胞存活率均依次降低(P<0.05)。IQGAP3组细胞Nanog mRNA、Oct4 mRNA、Bmi1 mRNA、c-Myc mRNA、cyclinD1 mRNA相对表达量均高于对照组和shIQGAP3组(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05)。GO、KEGG数据库肝细胞癌样本数据分析结果显示,活化的Wnt/β-catenin信号通路在IQGAP3表达上调的样本中富集(富集分数=0.497,P<0.001;富集分数=0.527,P<0.001);IQGAP3组细胞β-catenin核浆比例(3.61±0.24)和Top/Fop比值(2.61±0.29)均高于对照组(0.98±0.14、1.13±0.08)和shIQGAP3组(0.25±0.03、0.57±0.13)(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05)。shIQGAP3-LiCl组细胞Top/Fop比值(3.18±0.33)高于shIQGAP3对照组(1.02±0.06)(P<0.05);培养第4-5天,shIQGAP3-LiCl组细胞存活率高于shIQGAP3对照组(P<0.05);培养第0-5天,shIQGAP3-LiCl组、shIQGAP3对照组细胞存活率均依次降低(P<0.05)。结论 IQGAP3可能通过激活Wnt/β-catenin通路增加肿瘤干性基因表达,促进HepG2细胞对顺铂耐药。

环状RNA ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移机制

目的探讨环状RNA(circRNA)ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白(ASAP1)调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖及迁移机制。方法提取RA及关节外伤患者SFs行后续实验。分别用Lipofectamine 3000将si-NC、si-circASAP1、miR-NC、miR-144-3p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-circASAP1、抗miR-NC与si-circASAP1、抗miR-144-3p与si-circASAP1分别转染RA-SFs(记为si-NC组、si-circASAP1组、miR-NC组、miR-144-3p组、pcDNA-NC组、pcDNA-circASAP1组、抗miR-NC+si-circASAP1组、抗miR-144-3p+si-circASAP1组)。未转染RA-SFs记为对照组(NC组)。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测circASAP1和微小核糖核酸144-3p(miR-144-3p)表达;蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;Transwell检测细胞迁移;双荧光素酶报告基因实验检测circASAP1靶向调控miR-144-3p表达。两组间比较采用t检验;多组间比较用单因素方差分析(两组间比较用SNK-q检验)。结果RA患者滑膜组织及SFs中circASAP1表达高于关节外伤患者滑膜组织及SFs(滑膜组织2.46±0.28比1.00±0.12,SFs中3.16±0.15比1.00±0.11),miR-144-3p低于关节外伤患者滑膜组织及SFs(滑膜组织0.43±0.11比1.00±0.15,SFs中0.38±0.03比1.00±0.08),差异有统计学意义(t=40.949、26.182,P<0.05)。si-circASAP1组RA-SFs的circASAP1、MMP-2、MMP-9表达、细胞活力和细胞迁移数均低于NC组和si-NC组(0.47±0.03比1.00±0.07、1.02±0.10,0.41±0.03比0.83±0.07、0.81±0.06,0.35±0.03比0.77±0.06、0.75±0.06,0.57±0.05比1.12±0.07、1.11±0.09,97.00±7.23比194.00±13.25、203.00±11.54),差异有统计学意义(F=166.272、161.234、187.111、194.126、258.352,P<0.05)。miR-144-3p组RA-SFs的miR-144-3p表达高于miR-NC组(2.09±0.15比1.00±0.09),MMP-2、MMP-9表达、细胞活力和细胞迁移数均低于miR-NC组(0.37±0.02比0.83±0.07、0.31±0.02比0.74±0.06、0.62±0.05比1.21±0.07、115.00±7.36比197.00±12.51),差异有统计学意义(t=18.693、18.956、20.397、20.541、16.949,P<0.05)。抗miR-144-3p+si-circASAP1组RA-SFs中miR-144-3p表达量低于抗miR-NC+si-circASAP1组(0.49±0.05比1.00±0.07),MMP-2、MMP-9蛋白表达、细胞活力及细胞迁移数高于抗miR-NC+si-circASAP1组(0.89±0.06比0.40±0.03、0.72±0.07比0.34±0.02、1.02±0.08比0.57±0.04、188.00±10.67比95.00±6.13),差异有统计学意义(t=17.786、21.913、15.659、15.194、22.673,P<0.05)。结论RA患者circASAP1表达增高而miR-144-3p表达降低,抑制circASAP1通过上调miR-144-3p可降低SFs增殖和迁移能力。

ARHGAP12在小鼠戊四氮癫痫模型中的表达

目的观察Rho GTP酶激活蛋白12(Rho GTPase-activating protein 12,ARHGAP12)在戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)致癫小鼠模型中的表达情况。方法25只C57BL/6小鼠随机分为癫痫组和对照组。分别应用Westernblot和免疫组织化学染色检测ARHGAP12的表达情况;应用免疫荧光染色对ARHGAP12进行定位。结果ARHGAP12定位于神经元的细胞膜;在癫痫模型中,ARHGAP12的表达水平较对照组明显增高(*P<0.05,**P<0.01)。结论ARHGAP12定位于海马神经元的细胞膜;在小鼠PTZ癫痫模型中,ARHGAP12高表达,提示其可能参与癫痫的形成。

IQ结构域的GTP酶激活蛋白1基因短发卡RNA重组质粒的构建及表达

目的构建特异性针对人IQ结构域的GTP酶激活蛋白1(IQ-domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)基因短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的重组质粒,检测其在人食管癌KYSE150细胞中的表达。方法以人IQGAP1 mRNA序列为靶向设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体GV102中,构建重组质粒IQGAP1-shRNA,转化DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆测序鉴定。用脂质体2000介导IQGAP1-shRNA转染KYSE150细胞作为IQGAP1-shRNA干扰组,同时设转染载体GV102为对照组,RT-PCR及Western blot法检测IQGAP1基因的干扰效果。结果经测序鉴定,重组质粒IQGAP1-shRNA构建正确。IQGAP1-shRNA干扰组及对照组转染KYSE150细胞均可见绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),两组转染效率分别为(76±5. 780)%和(83±3. 851)%。IQGAP1-shRNA干扰组IQGAP1 mRNA转录水平和蛋白表达水平与对照组比较差异均有统计学意义(P <0. 001),表达抑制率分别为(82±2. 424)%及(77±2. 791)%。结论成功构建了IQGAP1-shRNA真核表达质粒,能特异性降低食管癌KYSE150细胞中IQGAP1基因的表达,为进一步研究IQGAP1基因在食管癌中的功能及靶向治疗作用奠定了基础。

Rap1GTP酶激活蛋白甲基化状态与结肠癌关系的研究

目的 探讨结肠癌中抑癌基因Rap1GTP酶激活蛋白（Rap1GAP）启动子甲基化情况,为结肠癌的早期诊断、早期治疗、靶向治疗及改善预后等提供理论依据及研究方向.方法 回顾性分析山西省忻州市人民医院病理科2010年1月至2014年9月病理诊断为结肠腺癌的患者33例,其中男性19例,女性14例,年龄41~72岁,取手术切除石蜡包埋标本.选取同期16例结肠腺瘤患者的石蜡包埋标本,包括男性9例,女性7例,年龄34~58岁.选取肿瘤远端（距肿瘤〉15 cm）切缘正常组织13例.使用定量甲基化特异性聚合酶链反应（q-MSP）技术检测Rap1GAP基因启动子区甲基化水平.比较3种组织间及临床病理因素亚组间Rap1GAP基因启动子区甲基化水平的差异.结果 Rap1GAP启动子甲基化率[中位数（四分位数间距）]在结肠癌、结肠腺瘤和癌旁正常组织中分别为65.43%（50.35%）、21.37%（8.39%）、17.43%（15.71%）,结肠癌组高于结肠腺瘤组及癌旁正常组织组,差异有统计学意义（P〈0.05）.结肠癌组男性、女性Rap1GAP启动子甲基化率分别为42.74%（70.44%）、21.98%（80.00%）;≤60岁与〉60岁分别为36.26%（62.62%）、26.23%（76.42%）;高分化癌、中低分化癌分别为21.98%（40.32%）、42.74%（74.20%）;TNMⅠ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期分别为25.31%（48.27%）、36.26%（75.55%）.结肠癌中Rap1GAP甲基化率与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、TNM分期均无关（均P〉0.05）.结论 Rap1GAP启动子甲基化可能与结肠癌的发生、发展有关,可能作为结肠癌早期诊断的靶标.

Rap1 GTP酶激活蛋白1、基质金属蛋白酶2与基质金属蛋白酶9在结直肠癌中的表达及其意义

目的 探讨Rap1 GTP酶激活蛋白1（Rap1GAP）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）与基质金属蛋白酶9（MMP-9）在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学法检测Rap1GAP、MMP-2与MMP-9在结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤及正常结直肠组织中的表达，分析各组间表达的差异及与临床病理参数的关系。结果 Rap1GAP在结直肠癌、绒毛状腺瘤、管状腺瘤和正常结直肠组织中的阳性率分别为30.4 %（14／46）、77.8 %（14／18）、69.6 %（16／23）、95.2 %（20／21），各组间表达差异有统计学意义（χ^2＝30.659，P＝0.000）；MMP-2的阳性率分别为71.7 %（33／46）、55.6 %（10／18）、52.2 %（12／16）、9.5 %（2／21），各组间表达差异有统计学意义（χ^2＝22.459，P＝0.000）；MMP-9的阳性率分别为76.1 %（35／46）、61.1 %（11／18）、56.5 %（13／23）、14.3 %（3／21），各组间表达差异有统计学意义（χ^2＝22.643，P＝0.000）。在结直肠癌中，Rap1GAP阳性率与肿瘤分化程度有关（χ^2＝5.275，P＝0.022），与患者性别、年龄及淋巴结转移无关（均P＞0.05）；MMP-2、MMP-9阳性率与淋巴结转移有关（χ^2＝6.661，P＝0.010；χ^2＝8.475，P＝0.040），与患者性别、年龄、分化程度均无关（均P＞0.05）。在结直肠癌中，Rap1GAP的表达与MMP-2及MMP-9呈负相关（r＝-0.424，P＝0.003；r＝-0.294，P＝0.048）；MMP-2和MMP-9的表达无相关性（r＝0.101，P＝0.505）。结论 Rap1GAP、MMP-2与MMP-9在结直肠癌的恶性生物学行为中起重要作用。在结直肠癌中，Rap1GAP与MMP-2和MMP-9的表达呈负相关，三者相互作用影响着结直肠癌的发生、发展。

稻瘟菌Cdc42若干推测互作蛋白的结构和表达特点

目的已有研究表明稻瘟菌Cdc42(MgCdc42)与酵母Cdc42(ScCdc42)高度同源,参与调控其形态分化和侵染过程,通过分析可能的MgCdc42互作蛋白,以明确这些蛋白结构和功能。方法用ScCdc42互作蛋白经BLAST搜索获得了稻瘟菌基因组中的相应同源物,分析了这些同源物的结构,并通过半定量RT-PCR分析MgCdc42不同突变情况下这些可能的调控蛋白及效应蛋白的表达情况。结果MgCdc42正显性突变后,导致所有推测互作蛋白表达量均有所提高;MgCdc42负显性突变,除MgBem1、Chm1、MgGic1表达量未见明显变化外,其余表达量均有所降低;当MgCdc42失活后,所有可能的MgCdc42调控蛋白及效应蛋白之表达量均有所降低。结论稻瘟菌可能存在酵母Cdc42相似的信号途径,MgCdc42在其中起着重要的调控作用。

Tiam1和Rac1在食管鳞癌组织中蛋白表达的相关性及临床病理意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)的表达与食管鳞癌发生发展、浸润转移的关系.方法:62例食管癌手术切除标本于2006-02-26/03-16取自食管癌高发区河南省安阳市肿瘤医院.应用免疫组织化学SP法检测62例食管鳞癌组织、20例癌旁不典型增生组织及20例正常食管黏膜组织中Tiam1及Rac1蛋白表达.结果:食管鳞癌组织中Tiam1蛋白表达与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.779,7.680,4.502,4.987;均P<0.05);在食管鳞癌癌变过程中Tiam1蛋白表达在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为5.0%(3/20)、55.0%(11/20)、72.6%(45/62),组间比较有明显差异(χ2=20.643,P<0.05);Rac1蛋白表达也与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.652,6.884,8.276,6.371;均P<0.05);Rac1蛋白在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为25.0%(5/20)、70.0%(14/20)、70.0%(44/62),组间比较有明显差异(χ2=14.245,P<0.05).Tiam1及Rac1的表达呈正相关关系(γp=0.642,P<0.05).结论:Tiam1及Rac1可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的辅助指标.

microRNA-124高表达对甲状腺乳头状癌细胞系K1侵袭、迁移的影响及其机制

目的观察微小RNA 124(microRNA-124)高表达对甲状腺乳头状癌(TPC)细胞系K1侵袭、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期K1细胞,分为三组,观察组用促进microRNA-124表达的microRNA-124mimics转染,对照组转染microRNA无关序列,空白组不做任何处理。培养24 h,Transwell试验观测三组侵袭数,采用细胞划痕试验观测三组迁移细胞数,采用Real-time PCR法检测细胞含IQ基元GTP酶激活蛋白1(IQGAP1)mRNA及蛋白、microRNA-124,采用荧光素酶报告基因试验检测三组细胞中含有IQGAP1基因3'非翻译区(UTR)报告质粒的荧光素酶活性。结果培养24 h时观察组、对照组、空白组细胞侵袭数分别为(104.32±11.21)、(304.27±20.83)、(299.38±18.32)个,观察组细胞侵袭数低于对照组和空白组(P均<0.05)。培养24 h后,观察组、对照组、空白组细胞迁移数分别为(62.16±3.21)、(104.27±6.83)、(99.38±5.32),观察组划痕愈合百分比低于对照组和空白组(P均<0.05)。观察组细胞IQGAP1 mRNA及蛋白相对表达量均低于对照组、空白组(P均<0.05);观察组microRNA-124相对表达量均高于对照组、空白组(P均<0.05)。培养48 h观察组、对照组、空白组基因质粒的相对荧光素酶活性分别为0.24±0.06、1.06±0.15、1.10±0.17,观察组相对荧光素酶活性低于对照组和空白组(P均<0.05)。结论 microRNA-124高表达可抑制K1细胞的侵袭、迁移,其机制可能为microRNA-124下调IQGAP1表达。