非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。

微小RNA-329靶向三磷酸鸟苷酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭

目的筛选骨肉瘤相关的微小RNA(miRNA,miR),研究其对骨肉瘤细胞的影响及其机制。方法生物信息学筛选GSE39058中骨肉瘤相关miRNA的表达差异,确定miR-329为研究目标。细胞计数试剂盒(CCK-8)分析miR-329对骨肉瘤143B细胞增殖能力的影响,Transwel比较miR-329对骨肉瘤143B细胞侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验观察miR-329对G3BP1的调控作用。蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-329转染前后G3BP1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达水平。组间比较采用t检验。结果获得差异miRNA 90个,其中miR-329功能富集程度较高。聚合酶链反应(PCR)结果表明miR-329在各骨肉瘤细胞中的表达低于成骨细胞hFOB1.19(P<0.05)。CCK-8结果显示miR-329模拟物组143B细胞增殖率较对照组NC低(0.571±0.019比0.975±0.022,P<0.05),差异有统计学意义。Transwell分析发现转染miR-329模拟物组侵袭细胞数明显少于对照组[(28.83±4.55)个比(58.17±6.25)个,t=6.220,P<0.05],差异有统计学意义。双荧光素酶报告基因分析结果显示共转染G3BP1 mRNA3’端非编码区(3’UTR)wt和miR-329质粒的细胞荧光素酶相对活性较对照组显著降低(0.45±0.06比1.01±0.09,t=1.250,P<0.05),差异有统计学意义。Western blot结果表明转染miR-329 mimic后E-cadherin表达水平高于对照组(0.51±0.11比0.31±0.12,t=2.903,P<0.05),而Vimentin、N-cadherin表达量低于对照组(0.13±0.03比0.25±0.06,t=2.859,P<0.05;0.28±0.11比0.45±0.12,t=2.574,P<0.05),差异有统计学意义。结论miR-329通过靶向抑制G3BP1表达,抑制肿瘤细胞的上皮-间充质转化,从而抑制骨肉瘤143B细胞的体外增殖和侵袭。

G3BP在喉鳞状细胞癌的表达及其临床意义

目的研究GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)在喉鳞癌组织中的表达情况及其与喉鳞癌生物学行为之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测91例喉鳞癌组织中G3BP的表达情况,并探讨他们与喉鳞癌的肿瘤组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后的关系。结果G3BP在喉鳞癌的阳性表达率为84.7%。其表达水平与肿瘤分化程度(P=0.008)、临床分期(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.000)及肿瘤复发转移(P=0.000)均有密切关。G3BP表达水平越高,患者术后生存时间越短(P=0.000)。结论G3BP在喉鳞癌表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移、肿瘤复发转移情况及患者的预后有密切关系。G3BP可作为判断喉鳞癌患者预后的有效参考指标。

G3BP和OPN在喉鳞状细胞癌的表达及其临床意义

目的研究喉鳞癌组织中GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)和骨桥蛋白(OPN)的表达及其与喉鳞癌生物学行为的关系。方法 91例喉鳞癌组织标本,应用免疫组织化学方法检测G3BP和OPN表达水平,分析检测结果与瘤细胞分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后的关系。结果 G3BP阳性率为84.7%,其表达水平与瘤细胞分化程度(P=0.008)、临床分期(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.000)及术后肿瘤复发与转移(P=0.000)均密切相关;G3BP表达水平越高,患者术后生存时间越短(P=0.000)。OPN阳性率为76.5%,其表达水平与临床分期(P=0.035)、淋巴结转移(P=0.005)及术后肿瘤复发与转移(P=0.017)密切相关,而与瘤细胞分化程度(P=0.211)无关;OPN表达水平越高,患者术后生存时间越短(P=0.032)。G3BP与OPN的表达水平之间存在正相关(rs=0.556,P=0.000)。结论 G3BP与OPN表达水平可作为判断喉鳞癌患者预后的有效参考指标。

胃癌组织中miR-200a-3p、G3BP2的表达及意义

目的研究胃癌组织中微小RNA(miRNA)-200a-3p及GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白2(G3BP2)表达及意义。方法应用qRT-PCR法检测97例份胃癌组织及其配对的癌旁正常组织(距离癌组织5 cm)中miR-200a-3p及G3BP2表达,分析miR-200a-3p、G3BP2表达差异及其与临床病理特征和预后的关系。结果与癌旁正常组织相比,胃癌组织中miR-200a-3p表达降低,而G3BP2表达升高(P均<0.05)。胃癌组织中miR-200a-3p表达与G3BP2呈显著负相关(r=-0.610,P=0.008)。胃癌组织中miR-200a-3p、G3BP2表达与肿瘤TNM分期、肿瘤分化有关(P均<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤大小、位置、浸润深度及淋巴结转移无关(P均>0.05)。miR-200a-3p低表达者3年总体生存率(OS)低于miR-200a-3p高表达者(P<0.05);G3BP2高表达者3年OS低于G3BP2低表达者(P<0.05)。结论胃癌组织中miR-200a-3p表达降低,而G3BP2表达升高;二者联合检测有助于患者病情判断及预后评估。

人G3BP1真核表达载体的构建及其在食管癌细胞中的定位分析

目的:构建GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)的真核表达载体p EGFP-C3-G3BP1,并观察其在人食管癌EC109细胞中的表达及定位。方法:采用RT-PCR法从EC109细胞中扩增G3BP1 c DNA全长序列,用限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ双酶切PCR产物后克隆至pEGFP-C3载体,转化大肠杆菌DH5α后,挑取阳性克隆提取质粒,经双酶切及测序鉴定;将重组质粒用脂质体法转染EC109细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测G3BP1的表达,荧光显微镜观察G3BP1的定位。结果:目的基因G3BP1的序列完全正确,并在EC109细胞中获得表达,荧光显微镜观察显示G3BP1定位于细胞质。结论:构建了p EGFP-C3-G3BP1真核表达载体,并在EC109细胞中过表达,G3BP1蛋白定位于细胞质,形成应激颗粒(stress granules,SGs)。为进一步探讨G3BP1在食管癌细胞中的功能及其与SGs的相关性奠定了基础。

食管鳞癌G3BP和骨桥蛋白的表达及其对患者预后的影响

目的研究食管鳞癌组织中GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白（G3BP）和骨桥（OPN）蛋白的表达及其与食管鳞癌生物学行为之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测80例食管鳞癌组织中G3BP和OPN蛋白的表达情况，探讨它们与食管鳞癌的肿瘤大小、组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后的关系。结果（1）G3BP蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率为71．3％，它在淋巴结转移组的阳性表达率高于无淋巴结转移组（z=-2．283，P=0．022）；而与肿瘤大小、组织分化程度、TNM分期无关（P〉O．05）；G3BP蛋白阳性表达组患者的术后生存时间较阴性表达组短，差异有统计学意义（P=0.000）。（2）OPN蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率为100％，OPN蛋白的表达水平与组织分化程度（X^2=10．766，P=0．005）及淋巴结转移（Z=2．289，P=0．022）有关，而与肿瘤大小和TNM分期无关（P〉O．05）；OPN蛋白的表达水平越高，患者术后生存时间越短（P=0.000）。（3）G3BP蛋白和OPN蛋白在食管鳞癌组织中的表达之间存在正相关性（rB=0．376，P=0．001）。结论食管鳞癌组织G3BP和OPN蛋白的表达与淋巴结转移情况及患者的预后有密切关系。

临床喉鳞癌组织标本中G3BP和CD44v6的检测及意义

目的研究RNA结合的Ras-GAP酶激活蛋白SH3结合蛋白(G3BP)、肿瘤干细胞标志物CD44v6蛋白与喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)发生发展的关系,探讨G3BP、CD44v6蛋白与血管新生的相关性。方法收集56例喉鳞癌患者癌组织及对应癌旁组织,采用Western blot法检测喉鳞癌患者癌组织及对应癌旁组织中G3BP、CD44v6蛋白水平,使用免疫组织化学染色法分别检测G3BP、CD44v6、血管内皮生长因子A(VEGF-A)的表达,并分析G3BP、CD44v6表达与喉鳞癌患者临床病理特征的关系及与VEGF-A表达的相关性;采用Ⅷ因子相关抗原(FⅧAg)免疫组织化学染色确定微血管密度(MVD),观察G3BP、CD44v6表达与MVD之间的关系。结果喉鳞癌患者癌组织中G3BP蛋白、CD44v6蛋白水平均明显高于对应癌旁的正常组织。喉鳞癌患者癌组织中的G3BP、CD44v6、VEGF-A表达阳性率分别为58.9%、53.6%、46.4%,均明显高于对应的癌旁正常组织。喉鳞癌患者癌组织中G3BP、CD44v6蛋白表达阳性率与临床分期、复发或转移及淋巴结转移相关,但与年龄和肿瘤大小无关。经Pearson相关性分析,喉鳞癌患者癌组织中G3BP、CD44v6蛋白的表达与VEGF-A表达呈正相关(r=0.741,r=0.756);喉鳞癌患者癌组织中G3BP与CD44v6蛋白阳性表达病例的MVD值均明显高于癌旁正常组织中MVD值;癌组织中G3BP与CD44v6蛋白阴性表达病例MVD值与癌旁正常组织中MVD值比较无明显差异。结论喉鳞癌组织G3BP、CD44v6蛋白高表达,可能通过促进VEGF-A的表达来诱发肿瘤微血管的新生,促进喉鳞癌侵袭、转移。

miR-200a-3p和G3BP2表达与胃癌临床病理特征的关系

目的探究微小RNA-200a-3p(miR-200a-3p)和GTP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)表达水平及其与胃癌临床病理特征的关系。方法选取本院收治的102例胃癌患者为研究对象,取本组所有胃癌患者的胃癌组织标本及癌旁正常组织标本。采用实时荧光定量PCR技术检测患者胃癌组织、癌旁正常组织中miR-200a-3p和G3BP2 mRNA相对表达量,收集分析胃癌患者临床病理特征,Kaplan-Meier对胃癌患者生存情况进行分析,COX回归分析影响胃癌发生的危险因素。结果胃癌组织miR-200a-3p表达水平显著低于癌旁正常组织(P <0. 05),G3BP2表达水平显著高于癌旁正常组织(P <0. 05);Pearson相关性分析表明miR-200a-3p和G3BP2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0. 417,P <0. 05)。免疫组化结果表明胃癌组织G3BP2蛋白表达阳性率显著高于癌旁正常组织(P <0. 05)。miR-200a-3p和G3BP2表达水平与胃癌分化程度和TNM分期有关(P <0. 05)。Kaplan-Meier法分析结果显示miR-200a-3p低表达组3年生存率均显著低于高表达组(P <0. 05),G3BP2高表达组3年生存率均显著高于低表达组(P <0. 05)。COX回归分析结果显示miR-200a-3p、G3BP2表达为影响胃癌发生的独立危险因素。结论胃癌组织miR-200a-3p表达下调,G3BP2表达上调,二者表达与胃癌发生及发展有关,可作为临床评估患者预后的参考指标。

喉鳞癌组织中G3BP及CD44v6蛋白表达与血管新生相关性研究

目的探讨喉鳞癌组织中GAP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)、CD44v6蛋白表达与血管新生的相关性。方法选取自2013年3月至2017年12月收治的喉鳞癌患者79例为研究对象。分别采集所有患者的喉鳞癌组织与癌旁正常组织,以免疫组织化学染色法对不同组织中的G3BP、CD44v6蛋白表达情况进行检测。采用免疫组织化学染色法明确微血管密度(MVD),分析喉鳞癌组织中G3BP、CD44v6蛋白表达情况与MVD的关系。结果喉鳞癌组织中G3BP、CD44v6蛋白阳性率均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P <0. 05)。喉鳞癌G3BP蛋白阳性患者组织中MVD为(59. 32±3. 11),高于G3BP蛋白阴性患者的(36. 06±1. 56),组间比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。喉鳞癌CD44v6蛋白阳性患者组织中MVD为(57. 79±2. 70),高于CD44v6蛋白阴性患者的(33. 98±2. 01),组间比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。Spearman相关性分析显示,喉鳞癌组织中G3BP、CD44v6蛋白表达水平与MVD呈正相关(r值分为0. 626、0. 618,P <0. 05)。结论喉鳞癌组织中G3BP、CD44v6蛋白均存在明显高表达,且与血管新生存在密切相关关系,可能具有促进肿瘤血管新生的作用。

上皮性卵巢组织G3BP和OPN表达及相关性研究

目的卵巢癌是妇科肿瘤中死亡率居首的常见恶性肿瘤,寻找新的生物学标志物以提高卵巢癌诊治的敏感性与特异性至关重要。本研究探讨GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白（Ras-GTPase-activating protein SH3domain binding protein,G3BP）和骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在上皮性卵巢组织中的表达、意义及其表达的相关性,为卵巢肿瘤的临床诊断及治疗提供依据。方法采用免疫组织化学方法检测G3BP和OPN在来源于中国医科大学盛京医院2009-10-01-2015-05-31的11例正常卵巢组织、20例卵巢上皮性良性肿瘤组织、31例卵巢上皮性交界性肿瘤组织及60例卵巢上皮性恶性肿瘤组织中的表达情况;并对二者表达的相关性进行统计分析。结果 G3BP在正常卵巢上皮组织、卵巢上皮性良性肿瘤组织、卵巢上皮性交界性肿瘤组织及卵巢上皮性恶性肿瘤组织中的表达呈递增趋势,其中上皮性良性肿瘤组织与正常卵巢上皮组织比较,χ2=6.38,P〈0.01;上皮性交界性肿瘤组织与上皮性良性肿瘤组织比较,χ2=1.183,P〈0.01;上皮性恶性肿瘤组织与上皮性交界性肿瘤组织比较,χ2=3.342,P〈0.01。OPN在正常卵巢上皮组织、卵巢上皮性良性肿瘤组织、卵巢上皮性交界性肿瘤组织及卵巢上皮性恶性肿瘤组织中的表达呈递增趋势,其中上皮性良性肿瘤组织与正常卵巢上皮组织比较,χ2=0.005,P〈0.01;上皮性交界性肿瘤组织与上皮性良性肿瘤组织比较,χ2=3.844,P〈0.01;上皮性恶性肿瘤组织与上皮性交界性肿瘤组织比较,χ2=3.429,P〈0.01。G3BP与OPN在卵巢上皮性恶性肿瘤组织中的表达具有正相关性,r=0.351,P〈0.01。结论 G3BP和OPN表达升高与上皮性卵巢癌的发生发展有密切关系,且二者可能存在协同作用。

应激颗粒功能的研究进展

应激颗粒（stress granules，SGs）是应激时在细胞浆内形成的RNA颗粒聚集。尽管已经报道了许多类型的应激能够诱导SGs形成，但SGs在人类疾病发展中的作用知之甚少。GTP酶激活蛋白SH3结合蛋白1能够调节信号传导和RNA代谢，在SGs的装配及功能中发挥了关键作用。SGs具有降低钙超载，抑制炎症与氧化应激，抑制凋亡与纤维化的作用。此外，还可能参与房颤的病理生理过程，这为进一步探究房颤机制和治疗靶点提供了新的思路。