GTPBP4在头颈部鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 通过在线数据库分析鸟苷三磷酸结合蛋白4(GTP binding protein 4, GTPBP4)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)患者组织中的表达及临床意义。方法 利用UALCAN、Human Protein Atlas等肿瘤基因数据库分析HNSCC患者中GTPBP4的表达水平及其与肿瘤的临床分期、病理分级、淋巴结转移、HPV感染及TP53突变之间的关系。利用UCSC Xena对HNSCC患者组织中GTPBP4表达与总生存率的相关性进行分析。结果 GTPBP4在HNSCC患者组织中的表达明显升高,GTPBP4高表达与HNSCC患者肿瘤病理分级及较差预后相关,与肿瘤临床分期无显著相关性,且GTPBP4高表达与患者HPV感染及TP53突变密切相关。结论 GTPBP4可能在HNSCC的发生发展发挥促进作用,有望成为HNSCC治疗及预后的潜在靶点及新的生物标志物。

LncRNA SNHG12通过miR-129-5p/GTPBP4对肝细胞癌进展的促进作用

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核仁小RNA宿主基因12(small nucleolar RNA host gene 12, SNHG12)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)发展的调控机制。方法通过RT-qPCR检测长链非编码RNA(long noncoding RNA, LncRNA) SNHG12在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达水平;分析肝癌组织中LncRNA SNHG12的表达水平与HCC患者临床病理参数的关系;运用MTT实验、细胞集落形成实验、Transwell实验、划痕愈合实验、裸鼠成瘤实验检测LncRNA SNHG12、miR-129-5p、GTPBP4在肝癌细胞活性、增殖、迁移、侵袭中的作用;采用荧光素酶报告基因、RT-qPCR、Western blot实验来评估LncRNA SNHG12、miR-129-5p、GTPBP4之间的互相作用。结果 LncRNA SNHG12在肝癌组织和肝癌细胞系中表达上调(P<0.05);LncRNA SNHG12表达水平较高的HCC患者相比其表达水平较低的患者预后更差(P<0.05);LncRNA SNHG12表达水平与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移存在正相关的关系;LncRNA SNHG12可促进HCC的细胞活性、增殖、迁移及侵袭(P<0.05);miR-129-5p在肝癌组织中表达下调,其可抑制肝癌细胞活性、增殖、迁移及侵袭(P<0.05);LncRNA SNHG12可通过与miR-129-5p进行竞争性结合,从而促进GTPBP4的表达(P<0.05);GTPBP4在HCC组织中表达上调,其可促进肝癌细胞活性、增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。结论 LncRNA SNHG12可通过调控miR-129-5p/GTPBP4轴从而促进HCC的进展。

LncRNA FGD5-AS1通过miR-873-5p/GTPBP4轴促进肝细胞癌发展的研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1对肝细胞癌(HCC)发展的调控机制。方法通过RT-qPCR检测FGD5-AS1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达水平。采用CCK-8、EdU、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验检测FGD5-AS1对HCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭中的作用。运用双荧光素酶报告和RNA下拉实验探明FGD5-AS1、miR-873-5p和GTPBP4之间的相互作用。结果FGD5-AS1在肝癌组织和细胞中表达上调。FGD5-AS1表达下调可抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。FGD5-AS1直接与miR-873-5p结合,并竞争性抑制其表达,以提高HCC细胞中促癌基因GTPBP4的表达水平。FGD5-AS1的作用是由miR-873-5p/GTPBP4轴介导的。结论FGD5-AS1可通过调控miR-873-5p/GTPBP4轴从而促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。

长链非编码 RNA FGD5-AS1通过miR-542-3p/GTPBP4对肝癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对肝癌细胞放射敏感性的影响及其分子机制.方法:运用qRT-PCR检测FGD5-AS1、miR-542-3p和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况;采用克隆形成实验和流式细胞仪分析FGD5-AS1和GTPBP4表达变化对肝癌细胞系放射敏感性的影响.利用基因沉默、qRT-PCR和Western blot检测FGD5-AS1对miR-542-3p及其靶基因GTPBP4表达的影响,并运用荧光素酶报告实验分析lncRNA FGD5-AS1对miR-542-3p/GTPBP4表达的调控作用.结果:FGD5-AS1和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中表达上调,miR-542-3p在肝癌组织和肝癌细胞系中表达下调.沉默FGD5-AS1可增强肝癌细胞Huh7和PLC5的放射敏感性.沉默GTPBP4可以抑制Huh7和PLC5细胞的克隆形成,促进Huh7和PLC5细胞的凋亡,增强Huh7和PLC5细胞的放射敏感性.GTPBP4是miR-542-3p的下游靶基因,miR-542-3p可以负向调控GTPBP4的表达水平;而FGD5-AS1可负向调控miR-542-3p的表达,并正向调控GTPBP4的表达水平;FGD5-AS1对HCC细胞放射敏感性的影响又依赖于miR-542-3p.结论:FGD5-AS1作为miR-542-3p的“分子海绵”竞争性上调GTPBP4的表达进而影响肝癌细胞的放射敏感性.

沉默GTPBP4基因对结肠癌细胞生物学行为的影响及机制

目的探讨沉默GTPBP4基因对结肠癌细胞(HT29)生物学行为的影响及机制。方法将培养好的HT29细胞随机分为转染组与阴性对照组,转染组加入适量GTPBP4-RNAi慢病毒,阴性对照组转染含有非特异性干扰序列的阴性病毒。采用CCK8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期,AnnexinⅤ-APC单染法检测细胞凋亡率,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成情况,Western blotting检测细胞内p53、Survivin蛋白表达,细胞免疫荧光法检测细胞内蛋白p53、Survivin定位。结果与阴性对照组比较,转染组细胞增殖能力低(P <0. 05),迁移距离短(P <0. 05),穿膜细胞数少(P <0. 05),G1期细胞比例高(P均<0. 05)、S期细胞比例低(P <0. 05),凋亡率高(P <0. 05),细胞克隆形成的细胞集落数目少(P <0. 05),p53蛋白相对表达量高(P <0. 05),Survivin蛋白相对表达量低(P <0. 05)。两组p53、Survivin蛋白均主要表达于细胞核,未发生表达位置改变。结论沉默GTPBP4基因可抑制结肠癌细胞HT29的恶性生物学行为,该作用可能与调节p53、Survivin蛋白表达有关。

GTPBP4基因对结肠癌HCT116细胞生物学行为及裸鼠成瘤能力的影响及机制

目的探讨短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)稳定下调GTPBP4基因对HCT116细胞增殖及体外克隆形成能力、体内成瘤能力的影响,并分析其可能的分子机制。方法将HCT116细胞随机分为实验组及阴性对照,实验组(shGTPBP4)稳定转染LV-GTPBP4-RNAi慢病毒,阴性对照组(shControl)稳定转染含CON007阴性对照序列慢病毒。嘌呤霉素法筛选稳定细胞株后,利用CCK-8法检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞体外克隆形成能力;裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内增殖能力;Western blot法检测细胞及免疫组化法检测瘤组织中相关蛋白c-Jun、Cyclin D1、BCL-2、Bax的表达。结果与阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力及平板克隆形成能力减弱(P<0.05),裸鼠皮下成瘤能力减弱(P<0.01),同时经Western blot及免疫组化法检测两组中c-Jun、Cyclin D1、BCL-2蛋白表达,实验组表达降低,而Bax蛋白表达升高。结论沉默GTPBP4基因后,结肠癌HCT116细胞体外增殖能力及裸鼠成瘤能力明显受到抑制,可能是通过调控原癌基因c-Jun相关通路影响结肠癌的发生、发展。

RNAi沉默GTPBP4基因对结肠癌RKO细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨GTPBP4基因沉默后,RKO细胞增殖和凋亡等生物学行为的改变。方法将慢病毒GTPBP4-siRNA及CON053阴性病毒转染结肠癌RKO细胞株,以Real-time PCR和Western blot检测敲减效率。Cellomics细胞计数检测细胞生长,MTT法检测细胞增殖,FACS法进行细胞周期检测,并进行细胞克隆形成实验,AnnexinⅤ-APC单染法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果慢病毒成功感染RKO细胞,m RNA和蛋白检测均显示GTPBP4基因敲减成功。GTPBP4基因敲减后,RKO细胞增殖速率受到显著抑制,MTT值比值(即增殖倍数)减小,G_(0/1)、G_2/M期细胞显著增多,S期明显减少,细胞克隆集落数目减少,凋亡峰值明显高于对照组,且峰值出现时间早于对照组。结论 GTPBP4基因可能通过促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡而影响结肠癌的发生发展。

GTPBP4对肝细胞癌生物学行为影响及其机制的研究

目的探讨肝癌细胞株SMMC-7721中GTD连接蛋白(GTPBP)4基因的表达下调对细胞体内外生物学行为的影响及其作用机制。方法采用免疫组织化学方法比较肝癌组织和癌旁组织GTPBP4的表达水平差异。运用实时荧光定量PCR技术检测4种人肝癌细胞株(SMMC-7721、HEPG2、HUH-7、HEP3B)中GTPBP4mRNA的表达。利用RNA干扰技术下调肝癌细胞株SMMC-7721中GTPBP4的表达水平,并观察细胞的生物学行为变化。结果在肝癌组织芯片中,GTPBP4蛋白在肝癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织。GTPBP4在4种肝癌细胞株中均明显上调。下调GTPBP4的表达后,肝癌细胞增殖能力减弱;细胞凋亡增多;处于S期、G1期的细胞无明显变化,处于G2期的细胞增多;细胞体外克隆形成能力减弱;裸鼠体内成瘤能力减弱。表达谱基因芯片结果显示GTPBP4敲减后SMMC-7721细胞内基因发生改变的有333个,其中上调的有134个,下调的有199个。通路富集分析找到富集的差异基因所在的10条信号通路。Western blot显示GTPBP4表达下调后与细胞周期调控相关的基因CCND1、CCND2、CDK6、MDM2的表达水平发生明显变化。结论 GTPBP4作为一促肝癌基因,其可能通过调控细胞周期关键基因的表达从而影响肝细胞癌的生物学行为。

干扰GTPBP4基因对食管癌EC9706细胞放射敏感性影响

目的探讨沉默GTPBP4基因对人食管癌EC9706细胞系放射敏感性影响。方法通过GEO数据库分析食管癌患者组织中GTPBP4的表达情况。利用重组质粒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术转染食管癌EC9706细胞系,使细胞中GTPBP4基因沉默,观察GTPBP4基因沉默对EC9706细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响。通过qRT-PCR和蛋白质印迹法评估基因沉默效果及检测凋亡相关蛋白表达。应用MTT法检测转染后细胞的增殖变化。采用流式细胞术检测干扰GTPBP4基因表达后细胞凋亡变化。应用克隆形成实验检测细胞照射后放射敏感性变化。结果GEO数据库分析表明GTPBP4基因在人食管癌组织中的表达明显高于正常邻近食管组织(P<0.001)。与空白对照组和阴性对照组相比,干扰组EC9706细胞的GTPBP4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(均P<0.001),表明质粒成功转染EC9706细胞。MTT检测结果显示干扰组EC9706细胞增殖率受到显著抑制(P<0.001)。流式细胞术结果显示干扰组EC9706细胞凋亡率明显升高(P<0.001),细胞凋亡明显增加(P<0.001);凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3、Bax)表达明显升高,抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达下降(P<0.001、P=0.001、P=0.0014、P=0.005)。克隆形成实验结果显示干扰组EC9706细胞放射增敏比1.716。结论GTPBP4基因在人食管癌组织中高表达,RNAi技术可有效抑制EC9706细胞GTPBP4基因表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强细胞对放射线的敏感性。

沉默GTPBP4基因表达对食管癌细胞增殖、侵袭和化疗敏感性影响

目的:探讨沉默GTPBP4基因表达对人食管癌EC109细胞生长、侵袭及化疗药物敏感性的影响.方法:通过GEO数据库,分析食管癌患者组织中GTPBP4 mRNA的表达水平;利用慢病毒(LV-GTPBP4-siRNA组)及阴性病毒(LV-NC组)转染食管癌EC109细胞后,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测GTPBP4基因表达沉默效果,然后采用CCK8法、流式细胞法、Transwell小室实验分别检测GTPBP4基因表达沉默后EC109细胞增殖、周期分布、侵袭能力及化疗敏感性变化.结果:GEO数据库分析表明GTPBP4 mRNA在人食管癌组织中的表达明显高于正常邻近食管组织(P<0.001).EC9706、EC109和KYSE-150细胞GTPBP4 mRNA相对表达水平分别为2.66±0.32、4.62±0.06、3.38±0.17,明显高于HEEC细胞(均P<0.001);EC9706、EC109和KYSE-150细胞GTPBP4蛋白相对表达水平分别为2.46±0.56、3.95±0.36、3.18±0.10,明显高于HEEC细胞(P<0.01,P<0.001,P<0.001).LV-GTPBP4-siRNA病毒转染后EC109细胞中GT-PBP4 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.001).GTPBP4基因表达沉默后,EC109细胞的生长受到明显抑制(P<0.001),且加入不同浓度顺铂和5-氟尿嘧啶处理细胞后,细胞的存活率和药物半数抑制浓度(50%in-hibiting concentration,IC50)均降低(均P<0.05);同时G0/G1期细胞所占比例明显升高,S期细胞所占比例降低(均P<0.001);并且GTPBP4基因表达沉默及联合化疗药物顺铂处理使EC109细胞的穿膜细胞数量明显减少,侵袭能力降低(P<0.001,P=0.001).结论:人食管癌组织中GTPBP4 mRNA的表达明显高于正常邻近食管组织.LV-GTPBP4-siRNA慢病毒载体可有效抑制食管癌EC109细胞中GTPBP4基因的表达,从而抑制细胞增殖及侵袭能力,增强人食管鳞癌细胞对化疗药物的敏感性.

GTP结合蛋白4在肝癌中的表达及作用的初步研究

目的:探讨GTP结合蛋白4(GTP binding protein 4,GTPBP4)在肝癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)组织中的表达及沉默GTPBP4对人肝癌Hep G2细胞增殖和周期影响。方法:收集南昌大学第二附属医院2014年3月至2015年2月24例新鲜临床HCC组织及配对癌旁组织标本,采用Western blot检测GTPBP4在组织中的表达差异;在Hep G2细胞中用慢病毒介导的RNAi干扰技术沉默该基因,运用荧光显微镜观察感染效率,Western blot、RT-q PCR检测沉默效果;CCK-8实验、流式细胞仪观察细胞增殖、细胞周期变化。结果:1)Western blot结果显示GTPBP4在21例(87.5%)HCC组织标本中明显高表达(P<0.000 1);2)用荧光显微镜观察显示慢病毒成功感染Hep G2细胞后,发现90%细胞表达GFP;LV-GTPBP4-RNAi组GTPBP4在RNA水平、蛋白水平较对照组分别下降约70%和67%;3)GTPBP4基因沉默96 h后,LV-GTPBP4-RNAi组增殖能力抑制,抑制率约54.51%;LV-GTPBP4-RNAi组G0/G1期增多,S期减少,细胞周期发生停滞。结论:GTPBP4在HCC组织中高表达,利用RNAi干扰GTPBP4基因表达后,人肝癌Hep G2细胞增殖能力明显下降,细胞周期停滞于G0/G1期,但是具体分子机制不明。

GTP连接蛋白4在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的分析肝癌组织中GTP连接蛋白(GTPBP) 4的mRNA及蛋白表达水平及其与肝癌患者临床病理特征参数的关系。方法运用实时荧光定量PCR技术检测新鲜肝癌组织中GTPBP4 mRNA的表达水平,采用免疫组织化学方法检测肝癌组织芯片GTPBP4蛋白的表达水平,比较肝癌组织和癌旁组织GTPBP4的表达水平,分析肝癌组织中GTPBP4的表达水平与肝癌患者临床病理参数的关系。结果与癌旁组织相比,新鲜标本中肝癌组织GTPBP4 mRNA的表达水平明显增高(P<0. 05)。在肝癌组织芯片中,GTPBP4在肝癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0. 05); GTPBP4的表达水平与肝癌患者性别、年龄、肿瘤大小及TNM分期无明显相关性(P>0. 05),而与肝细胞癌的病理分级呈正相关,与生存率呈负相关(P<0. 05)。结论在肝癌组织中GTPBP4呈高表达状态,其可能在肝细胞癌的发生发展过程中发挥作用。

GTP结合蛋白4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的:为了建立GTPBP4基因沉默的人结肠癌细胞株,研究GTPBP4基因对人结肠癌细胞株RKO细胞增殖和凋亡的影响,构建并鉴定GTPBP4基因RNA干扰慢病毒载体。方法:针对GTPBP4 mRNA设计siRNA,构建pGCSIL-GFPGTPBP4慢病毒载体,感染293T细胞,包装产生慢病毒,并进行滴度测定。将慢病毒转染人结肠癌细胞株RKO,通过Realtime PCR和Western Blot分析GTPBP4基因敲减效率。结果:结果显示,插入DNA序列与目的基因序列一致,提示插入人GTPBP4基因序列正确。293T细胞中病毒滴度的测定结果 2×108 TU/m L。经siRNA慢病毒感染后,实验组RKO GTPBP4基因mRNA水平表达量受到显著抑制,Western Blot结果显示敲减效率达到72.9%。结论:GTPBP4基因RNAi慢病毒载体构建成功,可用于结肠癌生物行为等各方面的研究。