ARHGAP15在乳腺癌中的表达及临床相关性分析

目的:探究Rho-GTPase激活蛋白15(Rho-GTPase activating protein 15,ARHGAP15)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:利用TCGA数据库检测ARHGAP15在乳腺癌中的表达,采用Kaplan-Meier、Logistics回归分析和单因素/多因素COX回归分析检测ARHGAP15与临床预后相关性。同时收集我院61例乳腺癌患者病理切片,检测ARHGAP15在乳腺癌中的表达并分析其与临床相关性。体外实验检测ARHGAP15对MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡的影响。结果:TCGA数据库中ARHGAP15与T、N、M分期、预后、病理分级和年龄相关。本研究临床样本显示,ARHGAP15在乳腺癌中低表达,且与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移和分子分型相关。COX单因素分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、分子类型为三阴性、肿瘤直径≥3 cm与ARHGAP15低表达是影响乳腺癌患者预后的危险因素;多因素分析结果显示:肿瘤直径≥3 cm与ARHGAP15低表达是影响乳腺癌预后的危险因素。CCK-8和克隆实验发现过表达ARHGAP15抑制乳腺癌细胞增殖。细胞凋亡实验发现,ARHGAP15过表达组凋亡率较高。结论:ARHGAP15基因影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡,且ARHGAP15低表达与乳腺癌的不良预后结局相关。

srGAP3 promotes neurite outgrowth of dorsal root ganglion neurons by inactivating RAC1

Objective:To explore effect of srGAP3 promotes neurite outgrowth of dorsal root ganglion neurons.Methods:In this study,expression of Slit1 was observed predominantly in the glia.while expression of Robo2 and srCAP3 was detected in sensory neurons of postnatal rat cultured dorsal root ganglion(DRG).Furthermore,upregulation of srGAP3 following sciatic nerve transection was detected by immunohistochemistry and Western blotting.Results:It was observed that inhibition of nenrite outgrowth in cultured adult DRG neurons following treatment with anti-srGAP3 or anti-Robo2 was more effectively(1.5-fold higher) than that following treatment with an anti-BDNF positive control antibody.It demonstrated that srGAP3 interacted with Robo2 and Slit1 protein to decrease Rac1-CTP activity in cultured adult rat DRG neurons and the opposite effect on Rac1-GTP activity was detected by co-immunoprecipitation and immunoblotting analyses following treatment with anti-Robo2 or anti-srGAP3.These data demonstrated a role for srGAP3 in nenrite outgrowth ol DRG sensory neurons.Conclusions:Our observations suggest that srGAP3 promotes neurile outgrowth and filopodial growth cones by interacting with Robo2 to inactivate Rac1 in mammalian DRG neurons.

罗非鱼无乳链球菌gap基因的原核表达及免疫原性研究

试验旨在探究罗非鱼无乳链球菌(GBS)膜蛋白gap的免疫原性。试验提取GBS的DNA,利用PCR扩增出gap基因,并与表达载体pET-28a-SUMO构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21;经IPTG诱导、SDS-PAGE分析和Western blot检测确定其表达效果。采用纯化的gap蛋白与弗氏佐剂乳化腹腔注射免疫罗非鱼,以间接ELISA法检测血清效价并使用GBS进行攻毒试验。结果显示,PCR扩增出1011 bp大小的单条带gap基因,与预期一致;重组载体pET-28a-gap在23℃、0.4 mmol/L IPTG、12 h条件下成功表达49.8 ku的可溶性蛋白;ELISA检测显示,重组蛋白gap能够产生较高的血清抗体效价水平,对GBS攻毒后的罗非鱼相对保护率为64.1%。研究表明,重组蛋白gap具有较好的免疫原性,为鱼类的链球菌病的预防提供新的理论依据。

ARHGAP21通过失活WNT信号通路抑制非小细胞肺癌中的上皮间质转化

目的探究Rho GTPase激活蛋白21(ARHGAP21)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、转移的影响并探讨其作用机制。方法通过TCGA、CPTAC数据库和临床资料确定ARHGAP21在NSCLC中的表达与患者预后的关系;通过免疫印迹(Western blot)和免疫组化验证ARHGAP21在NSCLC的基础表达;通过慢病毒稳转构建敲低ARHGAP21的NSCLC细胞系;通过Transwell实验和划痕愈合实验检测敲低ARHGAP21对肺癌细胞体外迁移能力的影响;通过裸鼠肺转移肿瘤模型的构建检测敲低ARHGAP21对肿瘤细胞体内转移能力的影响;通过生物信息学分析预测ARHGAP21的可能作用机制;通过Western blot实验验证其相关机制。结果ARHGAP21的低表达与不良预后相关(P<0.05);与正常组织相比,ARHGAP21在肺癌组织中表达下调(P<0.001);Transwell和划痕愈合实验结果显示敲低ARHGAP21促进了肺癌细胞迁移能力(P<0.001)。裸鼠尾静脉肺转移模型结果显示与阴性对照组相比,敲低ARHGAP21组肺部肿瘤转移结节数量更多(P<0.05)且具有更高表达水平的N-钙粘蛋白和波形蛋白。生物信息学分析表明,APC、GSK3β、Axin和ARHGAP21之间存在高度相关性(P<0.001)。Western blot结果显示敲低ARHGAP21能够降低β-catenin的泛素化,上调N-钙黏蛋白并激活WNT信号通路。结论ARHGAP21的下调能够显著促进NSCLC的迁移、转移能力,这可能与ARHGAP21基因下调后激活WNT信号通路,影响APC、GSK3β、Axin的表达从而降低β-catenin的泛素化有关。

弥漫大B细胞淋巴瘤患者病理组织中IQGAP2和CDC42表达及临床价值研究

目的 研究弥漫大B细胞淋巴瘤(iffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者病理组织中含有IQ基序GTPase激活蛋白2(IQ motif containing GTPase activating protein 2,IQGAP2)和细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDC42)的表达及临床意义。方法 选取2017年2月~2019年2月期间湖南省直中医医院诊治的83例初诊DLBCL患者为研究对象,以同期诊治的50例反应性淋巴结增生(reactive lymph node hyperplasia,RHL)患者为RLH组。应用免疫组织化学法及免疫印迹法检测组织中IQGAP2和CDC42的表达。比较不同临床病理特征患者DLBCL组织中IQGAP2和CDC42的表达差异。Kaplan-Meier生存分析IQGAP2和CDC42表达对DLBCL患者生存预后的影响。单因素和多因素COX回归分析影响DLBCL患者预后的因素。结果 DLBCL组中IQGAP2(83.13%),CDC42(85.54%)蛋白阳性率高于RLH组(8.00%,12.00%),差异均有统计学意义(χ^(2)=57.016,69.230,均P <0.05)。DLBCL组织中IQGAP2(1.21±0.23),CDC42(1.34±0.25)蛋白相对表达量高于RLH组织(0.61±0.18,0.75±0.21),差异具有统计学意义(t=15.759,14.377,均P<0.05)。Hans分型非GCB型,Ann Arbor临床分期Ⅲ~Ⅳ期组织中IQGAP2(90.00%vs 69.70%,91.67%vs 71.43%),CDC42(92.00%vs 75.76%,93.75%vs 74.29%)蛋白阳性率大于GCB型,Ⅰ~Ⅱ期,差异具有统计学意义(t=4.241~6.200,均P <0.05)。IQGAP2阳性组(50.72%vs 85.71%),CDC42阳性组(50.70%vs 91.67%)完全缓解率分别低于IQGAP2阴性组,CDC42阴性组,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.801,7.013,均P<0.05)。IQGAP2阳性组(56.52%vs 85.71%),CDC42阳性组(56.34%vs 91.67%)三年总体生存率分别低于IQGAP2阴性组和CDC42阴性组患者,差异均有统计学意义(χ^(2)=4.318,4.963,均P<0.05)。Ann Arbor分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=1.618,95%CI:1.019~2.569),IQGAP2阳性(OR=2.036,95%CI:1.174~3.532),CDC42阳性(OR=1.763,95%CI:1.114~2.789)是影响DLBCL患者生存预后的独立危险因素。结论 DLBCL组织中IQGAP2,CDC42表达升高,是影响DLBCL患者不良预后的独立因素,是新的DLBCL肿瘤标志物。

ARHGAP10基因在肺腺癌中的表达及其机制

目的:基于生物信息学技术探讨Rho GTPase活化蛋白10(ARHGAP10)在肺腺癌发生发展中的潜在分子机制,为后续深入研究提供生物信息学证据。方法:通过利用TCGA数据库,获取肺腺癌患者RNA高通量序列及相关患者的临床资料,其中包括514例肺腺癌患者的癌组织以及59例相关的癌旁组织;GSE115002肺腺癌基因芯片数据从GEO下载,芯片包含52例肺腺癌患者的癌组织和匹配的癌旁正常组织。通过R语言技术比较ARHGAP10在TCGA和GSE115002中肺腺癌组织和癌旁正常组织之间表达差异,并进一步分析ARHGAP10表达与肺癌患者临床预后的相关性;挖掘两个数据库中ARHGAP10重叠基因,对重叠基因进行GO和KEGG富集分析,采用STRING数据库获取ARHGAP10的相关基因互作蛋白网络,TIMER数据库分析ARHGAP10与免疫浸润的相关性。结果:与癌旁正常组织相比较,肺腺癌组织中ARHGAP10呈现低表达状态(P<0.01)。与ARHGAP10低表达组相比较,ARHGAP10高表达患者拥有更长的总生存期和无进展生存期(P<0.05)。TCGA和GSE115002肺腺癌数据库中ARHGAP10的共同相关基因共133个,与MAPK、PI3K-AKT等信号通路以及细胞外基质受体结合、肌动蛋白细胞骨架、肿瘤信号通路等生物学进程相关。本研究发现PRELP、LIMS2、PPAP2B、MRPL42、SRP9、TSNAX等蛋白在ARHGAP10相互作用网络中发挥重要作用,ARHGAP10与DC细胞、中性粒细胞浸润正相关,与PD-L1表达呈正相关。结论:ARHGAP10在肺腺癌中起抑癌作用,与肺腺癌的生存预后正相关,可作为肺腺癌患者潜在的临床预后标志物。

胃癌组织中ARHGAP4、FBLN5的表达及与病人预后的关系

目的探讨扣针蛋白5(FBLN5)、Rho GTPase激活蛋白4(ARHGAP4)在胃癌组织中的表达及与病人预后的关系。方法2013年12月~2018年12月我院收治的胃癌病人100例,收集距肿瘤边缘>1 cm处的胃癌组织以及距肿瘤边缘>5 cm的癌旁组织。分析FBLN5与ARHGAP4表达情况与胃癌临床病理学指标的关系,以及其对生存状况的影响,对病人的临床资料进行单因素和多因素Cox回归分析。采用免疫组织化学染色法检测FBLN5和ARHGAP4的表达情况。利用Kaplan-Meier法分析不同ARHGAP4、FBLN5表达水平与病人生存时间的关系。结果胃癌组织ARHGAP4阳性表达率低于癌旁组织,FBLN5的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);ARHGAP4表达与肿瘤部位、Lauren分型、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、CEA、CA19-9、CA125、免疫评分有关(P<0.05);FBLN5表达与Lauren分型、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、CE、CA19-9、CA125、免疫评分有关(P<0.05);FBLN5高表达组病人3年累积生存率低于低表达组(P=0.044);ARHGAP4高表达病人3年累积生存率高于低表达病人(P=0.021);Cox分析结果显示,ARHGAP4高表达为影响生存的保护因素(P<0.05)。结论FBLN5高表达组病人预后较低表达病人差,ARHGAP4低表达病人预后较高表达病人好。FBLN5高表达为影响生存的危险因素,二者与胃癌病人病情发展和预后密切相关。

GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1在非小细胞肺癌中的表达及其与放疗疗效的关系

【目的】探讨GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织中的表达及其与放疗疗效的关系。【方法】检测133例NSCLC患者组织中G3BP1蛋白表达水平,并分析其与NSCLC临床病理参数及放疗疗效的关系。【结果】NSCLC患者组织中G3BP1蛋白水平在不同肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移患者中比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。有效组NSCLC组织中G3BP1蛋白水平低于无效组,差异有统计学意义(P<0.05)。G3BP1评价疗效的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、最佳截断值、敏感度和特异度分别为0.802、2.33、86.54%和61.73%。Logistic多因素回归分析结果显示:肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、急性放射性肺炎及G3BP1水平是影响NSCLC放疗疗效的独立危险因素(P<0.05)。【结论】G3BP1与NSCLC肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移有关,其水平可为评价患者的放疗疗效提供参考。

法舒地尔对心力衰竭大鼠心室重塑干预与Rho GTPases活性的作用

目的:以升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠为研究对象,观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对心室重塑和心肌组织Rho家族的小分子鸟苷酸三磷酸酶(Rho GTPases)活性的影响,并探讨两者之间的关系。方法:将雌性心力衰竭Wistar大鼠随机分2组(n=10),法舒地尔(5 mg·kg^(-1))组和模型组,同时制备假手术组;模型组、假手术组用等量生理盐水每日2次腹腔注射。测定治疗4 wk后组织Rho GTPases活性。结果:法舒地尔组左室重量-体重比明显下降(P<0.01),心室重构减轻,心肌组织Rho GTPases活性降低(P<0.01)。结论:Rho激酶抑制剂法舒地尔抑制左室重塑与心肌组织Rho GTPases活性有关。

小麦ArfGAP基因的克隆、半定量RT-PCR分析及原核表达

为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121bp。生物信息学分析表明,TaArfGAP蛋白氨基端方向存在一个典型的ArfGAP蛋白结构域,在亲缘关系上与山羊草、乌拉尔图小麦和短柄草较近,而与甘蓝等作物关系较远。半定量RT-PCR分析表明,TaArfGAP基因在干旱、PEG和NaCl胁迫下显著上调表达,但在高温条件下则显著下调表达。SDS-PAGE检测结果表明,IPTG终浓度为0.8~1.0mmol·L-1、诱导温度为24℃及诱导时间为10h时,在分子量大小为81kD左右可以得到较大的可溶性表达蛋白量,且与预期结果一致,说明TaArfGAP基因在原核表达体系中成功表达。

Slit—Robo GTPase激活蛋白在坐骨神经切断后脊神经节的表达变化

目的：观察Slit—Robo GTP酶激活蛋白（srGAP）在成年哺乳类动物脊神经节（DRG）的表达及其变化，了解srGAP在神经再生中的作用。方法：应用RT-PCR、免疫印迹法、免疫组织化学方法，检测成年SD大鼠正常和坐骨神经切断后1、3、7d的DRGsrGAP1、2、3mRNA及其蛋白的表达。结果：srGAP1、3mRNA在正常DRG均有弱表达，而srGAP2不表达；坐骨神经切断后3、7d，srGAP1、3mRNA表达增强，以术后7d最高；免疫组织化学显示，srGAP1在神经元胞体、突起均有表达，在DRG内胶质细胞亦有表达，坐骨神经切断后3、7d表达增强。结论：本研究结果说明Slit-Robo信号通路存在于大鼠周围感觉神经元内，周围神经损伤可激活此信号通路。

Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定

目的构建携带绿色荧光蛋白的Rac1-GTPase显性负效突变体(Rac1N17)和组成型活性突变体(Rac1L61)的慢病毒。方法构建Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒,并以酶切和测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统包装制备Rac1-GTPase突变体慢病毒上清,用其感染大鼠前皮质神经元,分别进行Rac1生物学活性检测、细胞转染效率鉴定与神经元形态学观察。结果构建的Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒经酶切与测序鉴定正确,包装的慢病毒滴度为1×106TU/ml。用制备的慢病毒上清感染原代培养的前皮质神经元,Rac1生物学活性检测结果显示Rac1N17慢病毒显著抑制表皮生长因子诱导的Rac1活性的升高,而Rac1L61慢病毒感染神经元Rac1活性显著升高。感染效率鉴定显示病毒上清可感染80%以上的前皮质神经元。形态学观察显示经慢病毒感染后的神经元其胞体与树突分支清晰可见。结论成功制备了Rac1N17和Rac1L61慢病毒,并成功实现了慢病毒感染前皮质神经元,为进一步研究Rho蛋白家族信号通路提供了一个重要工具。

支架蛋白IQGAP1在乳腺浸润性导管癌中的表达及对肿瘤细胞迁移的影响

目的探讨支架蛋白IQGAP1在乳腺浸润性导管癌中的表达及沉默IQGAP1表达对肿瘤细胞迁移能力的影响。方法利用免疫组织化学染色和Western blotting技术检测IQGAP1蛋白在乳腺浸润性导管癌组织、癌旁组织以及良性乳腺病变组织中的表达;分析IQGAP1蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达与临床病理参数的关系。构建载有shRNA-IQGAP1的慢病毒表达载体,将其稳定转染高转移乳腺癌MDA-MB-435细胞,获得稳定抑制IQGAP1蛋白表达的细胞株(IQGAP1-shRNA组)及相应的空载细胞株(Vector组)、空白对照细胞株(Blank组);运用基于Transwell系统的体外迁移实验观察沉默IQGAP1的表达对MDA-MB-435细胞迁移能力的影响。结果 IQGAP1蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率为83.44%(136/163),与良性乳腺病变组织(32.14%,9/28)比较,差异具有统计学意义(P<0.01);IQGAP1蛋白在癌旁组织中的阳性表达率(77.78%,63/81)与乳腺浸润性导管癌组织比较,差异无统计学意义(P>0.05)。163例乳腺浸润性导管癌中WHO分级为3级者IQGAP1蛋白表达为阴性、胞质阳性和胞膜阳性的例数分别为1、3和22,2级者分别为21、40和61;1级者分别为5、9和1,差异具有统计学意义(P<0.01);IQGAP1蛋白的表达与肿瘤的大小有关(P<0.01),与淋巴结是否转移无关(P>0.05)。Blank组、Vector组和IQGAP1-shRNA组中穿过Transwell小室的平均细胞数分别为(294.3±16.3)、(287.7±16.9)和(93.5±7.6)个,IQGAP1-shRNA组显著低于其他两组(P<0.01)。结论 IQGAP1蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达明显高于良性乳腺病变组织;IQGAP1蛋白表达部位与肿瘤分化程度有关;IQGAP1蛋白在乳腺癌转移过程中起促进作用。

脑胶质瘤组织Rap1GAP的水平及其临床意义

目的探讨Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1GAP)在脑胶质瘤组织中的表达及其与临床病理特征和预后关系。方法收集本院2011年1月至2016年12月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤组织79例和正常脑组织33例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测以上组织中的Rap1GAP mRNA水平,分析脑胶质瘤组织和正常脑组织中的Rap1GAP mRNA水平;分析脑胶质瘤不同临床病理特征(年龄、性别、病理类型、分化程度、病理分级、瘤周水肿和浸润深度)的Rap1GAP mRNA水平和分布情况,根据随访资料分析Rap1GAP mRNA水平与预后的关系。结果脑胶质瘤组织的Rap1GAP mRNA水平为0. 172±0. 019,低于正常脑组织的1. 068±0. 069,差异有统计学意义(P<0. 05)。Rap1GAP mRNA水平和分布与年龄、性别、瘤周水肿和浸润深度无关,但与病理类型、分化程度和病理分级有关(P<0. 05),在胶质母细胞瘤、低分化和Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤组织的Rap1GAP mRNA水平和高表达率均较低,依次为0. 104±0. 006和27. 0%(10/37)、0. 099±0. 006和16. 1%(5/31)及0. 127±0. 007和39. 3%(22/56)。Rap1GAP低表达组的中位总生存期(OS)为14. 5个月,低于高表达组的21. 4个月(P<0. 05);胶质母细胞瘤、低分化和Ⅲ、Ⅳ级脑胶质瘤组织中,低表达组的中位OS分别为8. 8、11. 2和11. 5个月,均低于高表达组的18. 2、19. 8和19. 8个月(P<0. 05)。结论脑胶质瘤组织中Rap1GAP低表达参与了该肿瘤的发生发展,Rap1GAP低表达者的预后较差,提示Rap1GAP发挥类似抑癌基因的作用,可作为脑胶质瘤的治疗的候选基因。

IQGAP1在人骨髓瘤细胞中过表达且与ERK相互作用

目的:探讨含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)在骨髓瘤细胞中的过表达及其机制。方法:RT-PCR和Western blotting检测RPMI8226和U266细胞IQGAP1表达;使用不同的寡核苷酸序列构建沉默人IQGAP1的shRNA质粒(clone 1、clone 2、clone 3和clone 4)、转染RPMI8226细胞,RT-PCR和Western blotting检测其IQGAP1表达;Western blotting检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)、RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、Akt、p-AKT、STAT3和p-STAT3水平,免疫共沉淀确定IQGAP1和ERK的关系。结果:IQGAP1在RPMI8226和U266骨髓瘤细胞株中过表达,使用shRNA表达质粒沉默RPMI8226细胞IQGAP1后,IQGAP1表达减少,在有或无血管内皮生长因子(VEGF)/白细胞介素6(IL-6)作用下检测RPMI8226-shIQGAP1组(clone 1)细胞增殖明显下降。进一步检测3组细胞p-ERK1/2、ERK1/2、AKT、p-AKT、STAT3和p-STAT3蛋白水平,与RPMI8226-shRNA阴性对照组和RPMI8226未转染组相比,RPMI8226-shIQGAP1组ERK1/2磷酸化水平下降70.2%,免疫共沉淀法明确在RPMI8226细胞中IQGAP1和ERK存在相互作用。结论:IQGAP1在骨髓瘤细胞中的过表达可能与MAPK途径的ERK相互作用有关。

牙龈卟啉单胞菌细胞分裂蛋白质FtsZ的GTPase活性的热稳定性

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)细胞分裂蛋白质FtsZ(PgFtsZ)的GTPase活性的热稳定性,阐明PgFtsZ的生物化学特性,为牙周病的治疗提供实验依据。方法:采用Malachite green assay法检测GTPase的活性,活性测定蛋白质为重组野生型PgFtsZ(WtPgFtsZ)和4种重组C末端缺失变异型PgFtsZ,即ZΔC01(C末端缺失73个氨基酸残基)、ZΔC02(C末端缺失128个氨基酸残基)、ZΔC03(C末端缺失177个氨基酸残基)和ZΔC04(C末端缺失233个氨基酸残基),各种PgFtsZ在未经处理时及煮沸加热处理5和10min后检测GTPase的酶活力值。结果:重组ZΔC04GTPase的活性在煮沸加热处理5和10min时均比未加热处理时的酶活性增加(P<0.05),重组WtPgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02和ZΔC03在煮沸加热处理5min时GTPase的活性均较未煮沸加热处理时的活性增加(P<0.05),但进一步煮沸加热处理10min时,其GTPase的活性与未加热处理时相似。结论:Pg FtsZ是一种耐热蛋白质,并且C末端缺失233个氨基酸残基的缺失变异型ZΔC04表现出更强的耐热性能。

胰腺癌组织中miR-939-5p、ARHGAP4基因表达变化及意义

目的探讨胰腺癌组织中微小RNA-939-5p(miR-939-5p)与Rho GTPase激活蛋白4(ARHGAP4)的表达变化及临床意义。方法用荧光定量PCR技术检测98例胰腺癌组织及癌旁正常组织中miR-939-5p、ARHGAP4 mRNA的相对表达量,并分析二者表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系,用Pearson线性相关法分析miR-939-5p、ARHGAP4 mRNA的关系。结果与癌旁正常组织比较,胰腺癌组织中miR-939-5p相对表达量高,ARHGAP4 mRNA相对表达量低(P均<0.001)。胰腺癌组织中miR-939-5p、ARHGAP4 mRNA表达与肿瘤TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者年龄、性别及肿瘤直径无关(P均>0.05)。胰腺癌组织中miR-939-5p表达与ARHGAP4 mRNA表达呈负相关(r=-0.574,P<0.05)。结论胰腺癌组织中miR-939-5p呈高表达,ARHGAP4 mRNA呈低表达,二者可能协同参与肿瘤的发生发展。

Ras GTPase激活蛋白在肿瘤发生中的作用

肿瘤的发生、发展是多因素、多步骤参与的复杂过程,其中Ras信号通路及其相关因子又扮演着关键角色。Ras基因及其相关通路的异常在多种人类肿瘤中均可检测到。Ras-GTPase激活蛋白(Ras-GAPs)可视为一种肿瘤抑制基因的产物,它能够激活GTP酶,使活化的Ras蛋白转为非活化状态,终止信号转导,从而抑制肿瘤的发生。本文总结了关于Ras-GAPs在肿瘤中作用的研究新进展。

高糖环境下IQGAP1在足细胞中的表达及其对足细胞骨架重排的调节作用

目的观察高糖环境下IQ结构域GTP酶活化蛋白1(IQGAP1)在足细胞中的表达情况,并探讨IQGAP1在调节高糖诱导的足细胞骨架重排中的作用及其可能的机制。方法 (1)体外培养永生化的小鼠足细胞。取一部分足细胞加入不同浓度葡萄糖(5 mmol/L、10 mmol/L、15 mmol/L、20 mmol/L、25 mmol/L、30 mmol/L)刺激48 h,另取一部分细胞加入高浓度葡萄糖(30 mmol/L)刺激不同时间(0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h),检测各组足细胞IQGAP1蛋白的表达情况。(2)将足细胞分为正常糖浓度组(5 mmol/L葡萄糖,NG组)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组)、高渗对照组(5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇,HO组)、HG+IQGAP1质粒转染组、HG+空质粒转染组、NG+IQGAP1质粒转染组、NG+空质粒转染组。给予相应干预后,比较NG组、HG组、HO组足细胞的IQGAP1蛋白表达情况及纤维状肌动蛋白(F-actin)骨架分布,比较NG组、HG组、HG+IQGAP1质粒转染组、HG+空质粒转染组足细胞的F-actin骨架分布,比较6组足细胞的IQGAP1蛋白及细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)表达情况、IQGAP1和Cdc42蛋白的结合情况。结果 (1) 30 mmol/L葡萄糖刺激后足细胞的IQGAP1蛋白表达水平低于5 mmol/L葡萄糖刺激后的水平(P<0.05),高糖刺激48 h后的足细胞IQGAP1蛋白表达水平低于高糖刺激0 h后的水平(P<0.05)。(2) HG组足细胞的F-actin排列紊乱,F-actin形成核外周环,F-actin外周环评分(CFS)高于NG组(P<0.05)。(3) HG+IQGAP1质粒转染组的足细胞骨架重排部分逆转,CSF低于HG组(P<0.05)。(4) HG+IQGAP1质粒转染组的IQGAP1蛋白及Cdc42表达水平、两者结合水平均高于HG组(均P<0.05)。结论高糖刺激可减少IQGAP1及Cdc42蛋白表达以及两者结合,并诱导足细胞骨架重排,而IQGAP1可能通过与Cdc42结合调节细胞骨架重排。

IQGAP1通过C末端促进肿瘤细胞增殖的初步研究

目的探讨含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQGAP1)对肺癌、乳腺癌和结肠癌细胞增殖的影响。方法转染编码IQGAP1和IQGAP1-C末端的腺病毒载体并检测细胞中IQGAP1和IQGAP1-C的表达水平;转染靶向IQGAP1的小干扰RNA(siRNA),检测内源性IQGAP1的表达水平;用MTT和BrdU掺入法检测IQGAP1对肿瘤细胞增殖的影响;用western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素E的表达。结果转染腺病毒Ad-IQGAP1或Ad-IQGAP1-C使A549、MCF7和SW480细胞高表达IQGAP1或IQGAP1-C,其增殖能力较Ad-LacZ组均提高(t分别为19.418和25.643、29.283和16.261、23.138和56.739,P均<0.05);A549细胞转染Ad-IQGAP1-C组的促增殖效果明显优于Ad-IQGAP1组(t=25.643,P<0.05);用siRNA沉默内源性IQGAP1的表达后,与对照siRNA组相比,A549、MCF-7和SW480细胞增殖活性受到显著抑制(t分别为18.324、18.931、19.609,P均<0.05)。BrdU掺入法结果显示,增加IQGAP1和IQGAP1-C表达均可明显提高A549、MCF7和SW480的细胞DNA合成率(t分别为14.224和12.079、13.035和15.677、11.291和16.675,P均<0.05),在MCF7和SW480细胞中IQGAP1-C组促DNA合成效果明显优于IQGAP1组(t分别为15.677、16.675,P均<0.05);抑制IQGAP1的表达可显著降低DNA的合成(t分别为8.043、11.381、5.966,P均<0.05);western blot结果显示,在高表达IQGAP1或IQGAP1-C的A549、MCF7和SW480细胞中,PCNA和细胞周期素E表达明显增加(t PCNA分别为6.541和7.460、17.769和13.048、10.261和6.544,P均<0.05;t细胞周期素E分别为17.243和12.258、10.109和14.216、12.011和12.058,P均<0.05);而干扰IQGAP1表达的细胞,与对照siRNA组比较,两者的表达明显降低(t分别为4.475和6.058,7.476和8.404,12.559和14.792,P均<0.05)。结论IQGAP1和IQGAP1-C促进肺癌、乳腺癌和结肠癌细胞增殖,且IQGAP1可能主要通过C末端影响细胞增殖。