牙龈卟啉单胞菌细胞分裂蛋白质FtsZ的GTPase活性的热稳定性

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)细胞分裂蛋白质FtsZ(PgFtsZ)的GTPase活性的热稳定性,阐明PgFtsZ的生物化学特性,为牙周病的治疗提供实验依据。方法:采用Malachite green assay法检测GTPase的活性,活性测定蛋白质为重组野生型PgFtsZ(WtPgFtsZ)和4种重组C末端缺失变异型PgFtsZ,即ZΔC01(C末端缺失73个氨基酸残基)、ZΔC02(C末端缺失128个氨基酸残基)、ZΔC03(C末端缺失177个氨基酸残基)和ZΔC04(C末端缺失233个氨基酸残基),各种PgFtsZ在未经处理时及煮沸加热处理5和10min后检测GTPase的酶活力值。结果:重组ZΔC04GTPase的活性在煮沸加热处理5和10min时均比未加热处理时的酶活性增加(P<0.05),重组WtPgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02和ZΔC03在煮沸加热处理5min时GTPase的活性均较未煮沸加热处理时的活性增加(P<0.05),但进一步煮沸加热处理10min时,其GTPase的活性与未加热处理时相似。结论:Pg FtsZ是一种耐热蛋白质,并且C末端缺失233个氨基酸残基的缺失变异型ZΔC04表现出更强的耐热性能。

二价金属阳离子对牙龈卟啉单胞菌FtsZ的GTPase活性的调控及意义

目的 :探讨二价金属阳离子对牙龈卟啉单胞菌FtsZ的GTPase活性的影响。方法 :将质粒 pEZ1(WtPgFt sZ ,野生型PgFtsZ)、pYW 1(ZΔC0 1,PgFtsZ的C末端缺失 73个氨基酸残基的变异型 )和pYW 2 (ZΔC0 2 ,PgFtsZ的C末端缺失 12 8个氨基酸残基的变异型 ,已去除了PgFtsZ的C末端非保守性的区域 )导入EscherichiacoliBL2 1(DE3)pLysS中表达 ,然后进行分离和纯化这些目的蛋白。使用Malachitegreenassay法 ,检测 10mM /L的各种二价金属阳离子对纯化的WtPgFtsZ、ZΔC0 1和ZΔC0 2的GTPase活性的作用。 结果 :二价金属阳离子对WtPgFtsZ、ZΔC0 1和ZΔC0 2的GTPase的活性作用的特性相似 ,既在 10mM /L的Mg2 + 存在下与没有Mg2 + 的情况下它们的GTPase的活性相似 ;然而 ,在 10mM /L的Ca2 + 、Mn2 + 、CO2 + 和Ni2 + 存在的情况下WtPgFtsZ、ZΔC0 1和ZΔC0 2的GTPase的活性表现出不同程度的减弱 (36 .7%～ 70 .8% )。结论 :10mM /L的Mg2 + 对WtPgFtsZ、ZΔC0 1和ZΔC0 2的GTPase的活性无影响 ,而 10mM /L的Ca2 + 、Mn2 + 、CO2 + 和Ni2 +

牙龈卟啉单胞菌FtsZ的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)丝状温度敏感蛋白质(FtsZ)的C末端和N末端氨基酸残基缺失对其GTPase活性的影响,阐明PgFtsZ GTPase的功能区域,为牙周病的防治提供实验依据。方法:将质粒pEZ1(Wt PgFtsZ,含野生型PgFtsZ的基因)、pYW1(ZΔC01,从PgFtsZ的C末端去除73个氨基酸残基的变异型)、pYW2(ZΔC02,从PgFtsZ的C末端去除128个氨基酸残基的变异型)、pYWN1(ZΔN01,从PgFtsZ的N末端去除43个氨基酸残基的变异型)和pYWN2(ZΔN02,从PgFtsZ的N末端去除205个氨基酸残基的变异型)分别导入E.coli BL21(DE3)pLysS中表达目的蛋白,然后分离和纯化WtPgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02、ZΔN01和ZΔN02,将pET3a载体导入E.coli BL21(DE3)pLysS中作为空白对照。采用Malachite green assay法检测Wt PgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02、ZΔN01和ZΔN02的GTPase活性,沉淀法检测体外聚合功能,光学显微镜下观察Wt PgFtsZ和各种变异型PgFtsZs过表达时E.coli细胞形态变化。结果:除ZΔN01外,ZΔC01、ZΔC02和ZΔN02的GTPase的活性值均较Wt PgFtsZ降低(P<0.05),10mmol·L-1 CaCl2可使Wt PgFtsZ和各种变异型PgFtsZs的活性下降(P<0.05);除ZΔN02以外,10mmol·L-1 CaCl2均可诱导Wt PgFtsZ、ZΔC01、ZΔC02和ZΔN01的体外聚合反应。Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔC02在E.coli细胞中过表达时,细胞呈细长丝状,与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli相比细胞明显变长;ZΔN01和ZΔN02在E.coli中过表达时,E.coli细胞形态与仅含有pET3a载体作为空白对照的E.coli细胞形态相似。结论:PgFtsZ N末端的ZΔN01和ZΔN02之间的162个氨基酸残基及C末端的128个氨基酸残基与PgFtsZ的GTPase活性有关,二价阳离子Ca2+能抑制PgFtsZ的GTPase活性,促进其体外聚合的功能。

Ca^(2+)和Mg^(2+)对野生型和变异型牙龈卟啉单胞菌FtsZs的GTPase活性的影响

目的:探讨Ca2+和Mg2+对野生型和变异型牙龈卟啉单胞菌FtsZs的GTPase活性的影响。方法:将质粒pEZ1(野生型PgFtsZ,Wt PgFtsZ)、pYW1(PgFtsZ的C末端缺失73个氨基酸残基的变异型,ZΔC01)和pYW2(PgFtsZ的N末端缺失43个氨基酸残基的变异型,ZΔN01)导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达,分离和纯化这些目的蛋白。应用Malachite green检测法检测10mmol.L-1的Ca2+、Mg2+对Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase活性的作用。结果:在没有10mmol.L-1Ca2+或Mg2+的条件下,Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase值分别为8.25±0.22、7.43±0.23和8.00±0.18;在10mmol.L-1Mg2+存在的条件下,Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase值分别为8.30±0.15、7.51±0.22和7.85±0.17,同没有离子存在的条件下相比GTPase活性差异均无显著性(P>0.05);在10mmol.L-1Ca2+存在的条件下,Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase值分别为5.84±0.20、5.25±0.18和5.73±0.13,同没有离子存在的条件下比较GTPase活性均有明显降低(P<0.01)。结论:10mmol.L-1的Mg2+对Wt PgFtsZ、ZΔC01和ZΔN01的GTPase活性无影响,10mmol.L-1的Ca2+则对GTPase具有抑制作用。

G15V点突变对水稻OsRacD基因蛋白产物效应的影响

在水稻OsRacD基因编码GTPase结构域处,采用PCR方法引入G15V点突变模拟GTP结合形式的OsRacD.原核表达并纯化了突变前后的OsRacD蛋白,用于蛋白生化活性的分析.结果显示,突变后的OsRacD蛋白在GTP水解活性上有显著的提高,提示OsRacD在激活前后具有不同的蛋白生化特性,而且可能通过不同的胞内互作蛋白,引发不同的信号传递,证实了OsRacD在Rho信号转导通路中“分子开关”的重要作用.

禽类抗病毒蛋白质—Mx蛋白

Mx蛋白是在干扰素(IFN)诱导下产生的具有抗病毒功能的蛋白质,Mx蛋白具有GTPase活性,其C末端的区域是进行亚细胞定位及与病毒直接作用的区域。人类IFN诱导的MxA蛋白能够维持机体的抗病毒状态,抵抗病毒的感染。禽类的Mx蛋白抗病毒活性与GED区单核苷酸多态性有关,其中631位氨基酸N与S的变化可以改变其抗病毒的作用。据此,Mx基因单核苷酸多态性(SNP)标记可指导人类疾病的临床治疗和应用于禽类的抗病育种。

SEPT9与恶性肿瘤的研究进展

Septin是一类广泛分布于除植物外所有真核生物中具有GTPase活性的保守骨架蛋白基因家族，与细胞分裂有关Ⅲ。在人类，其由14个家族成员组成，分别命名为SEPT1-14，其中SEPT9定位于17q25．3，含有17个外显子，编码Septin9蛋白。

Isolation and Characterization of Dynamin from Pollen of Hemerocallis fulva

Dynamin, a 100-kD GTPase first found in animal cells, is essential for vesicle formation in receptor-mediated endocytosis, synaptic vesicle recycling, and possibly vesicle trafficking in and out of the Golgi apparatus. Recently, dynamin-like proteins were also found in some plant cells. We demonstrate here the presence of dynamin with molecular weight of 100 kD in day-lily ( Hemerocallis fulva) pollen based on molecular estimation and Western blotting. The highly purified pollen Dynamin had GTPase activity, which could be stimulated 1.64 fold by calf brain microtubules in vitro. The results from electron microscopic examination showed that the pollen dynamin readily self-assembled into ring-like structures.