信号传导及转录激活蛋白4在卵巢癌中的表达及其与预后的关系

目的探究信号传导及转录激活蛋白4(STAT4)在卵巢癌中的表达及与患者预后的关系。方法组织芯片共包含208例组织,其中卵巢癌组织192例、正常卵巢组织16例。采用免疫组化法检测卵巢癌组织、癌旁组织及正常卵巢组织中STAT4的表达。并利用GEPIA数据库、UALCAN数据库、TCGA PORTAL数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库获取卵巢癌患者的临床病理特征和生存数据,GEPIA数据库提供419例卵巢癌组织样本信息,Kaplan-Meier Plotter数据库提供1656例卵巢癌组织样本信息,分别用于分析卵巢癌组织STAT4表达与肿瘤预后的相关性。结果STAT4蛋白在卵巢癌组织中表达(45.83%)较正常卵巢组织(81.25%)明显降低(P<0.01)。GEPIA数据库显示,STAT4高表达卵巢癌患者的总体生存期曲线(OS)显著高于STAT4低表达患者(log-rank P=0.011),HR=0.73,P=0.012。TCGA Portal数据库的数据显示,STAT4高表达患者的OS高于STAT4低表达患者(Log rank P=0.023)。Kaplan-Meier Plotter数据库结果显示,STAT4高表达患者的OS和无进展生存期(PFS)较STAT4低表达患者更长,差异有统计学意义(P=0.009、0.02)。结论STAT4在卵巢癌组织中呈明显低表达,与患者的生存和预后密切相关,可能是卵巢癌诊断和预后的潜在分子标志物。

Slit—Robo GTPase激活蛋白在坐骨神经切断后脊神经节的表达变化

目的：观察Slit—Robo GTP酶激活蛋白（srGAP）在成年哺乳类动物脊神经节（DRG）的表达及其变化，了解srGAP在神经再生中的作用。方法：应用RT-PCR、免疫印迹法、免疫组织化学方法，检测成年SD大鼠正常和坐骨神经切断后1、3、7d的DRGsrGAP1、2、3mRNA及其蛋白的表达。结果：srGAP1、3mRNA在正常DRG均有弱表达，而srGAP2不表达；坐骨神经切断后3、7d，srGAP1、3mRNA表达增强，以术后7d最高；免疫组织化学显示，srGAP1在神经元胞体、突起均有表达，在DRG内胶质细胞亦有表达，坐骨神经切断后3、7d表达增强。结论：本研究结果说明Slit-Robo信号通路存在于大鼠周围感觉神经元内，周围神经损伤可激活此信号通路。

儿童喉乳头状瘤组织中Toll样受体4及激活蛋白-1表达及相关性研究

目的:研究儿童喉乳头状瘤(juvenile onset laryngeal papilloma,JLP)中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)(通常是c-Jun和c-Fos的异源二聚体)蛋白的表达及其相互关系。方法:应用免疫组化法及RT-PCR检测JLP组织中TLR4和AP-1(c-Jun、c-Fos)的表达情况,分析两者表达的相关性及与JLP复发的相关性。结果:儿童JLP组织中TLR4和AP-1(c-Jun、cFos)蛋白和mRNA均为阳性表达,与无复发组比较,复发组有显著性增高(P<0.01),与正常对照组比较,JLP两组均有显著性增高(P<0.01)。其中TLR4蛋白复发组和无复发组阳性率分别为83.33%和58.33%,cJun、c-Fos蛋白复发组阳性率分别为86.67%和83.33%,无复发组阳性率均为66.67%。TLR4和AP-1(c-Jun、c-Fos)蛋白表达均与JLP的复发有明显相关性(P<0.05或者P<0.01);JLP组织中TLR4和AP-1(c-Jun、c-Fos)表达两者呈正相关(P<0.01)。结论:TLR4及AP-1的高表达可能在JLP的发生发展机制中起着重要作用。

麻黄汤及拆方对哮喘小鼠5-脂质氧合酶激活蛋白、白介素4基因的表达和白三烯C_4的影响

目的:通过对麻黄汤(Herba Ephedrae decoction,HED)各拆方配伍组对哮喘小鼠5-脂质氧合酶激活蛋白(FLAP)、白介素4(IL-4)基因的表达和白三烯C4(LTC4)的影响来探讨其配伍规律。方法:建立小鼠卵蛋白哮喘模型,除正常对照组和模型组外其余各组分别灌胃给予麻黄汤及拆方(以麻黄生药剂量2 500 mg.kg-1)和阳性药地塞米松(2 mg.kg-1),连续用药7 d后用实时荧光定量PCR方法检测肺组织中5-脂质氧合酶激活蛋白、白介素4mRNA表达的变化,用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液中LTC4含量。结果:哮喘小鼠肺组织中FLAP,IL-4基因表达水平、支气管肺泡灌洗液(BALF)中LTC4水平均较正常对照组显著升高。麻黄汤及拆方组可以不同程度抑制小鼠肺组织中FLAP,IL-4基因表达水平,BALF中LTC4水平。结论:麻黄汤具有明显抗过敏哮喘的作用,拆方分析显示麻黄汤全方效果最佳,从分子水平验证了麻黄汤组方的科学性和合理性。

肿瘤坏死因子相关激活蛋白、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-4与儿童细菌性社区获得性肺炎经典炎症标志物的关系研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关激活蛋白(CD40L)、CD4^(+)/CD8^(+)、白细胞介素-4(IL-4)与儿童细菌性社区获得性肺炎(CAP)经典炎症标志物的关系及预测抗菌治疗效果的效能。方法:选取300例儿童细菌性CAP患儿,均给予化痰、止咳、平喘及抗感染治疗,其中43例治疗无效(观察组)及257例治疗有效(对照组),比较2组治疗前白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)及CD40L、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-4,采用Pearson分析CD40L、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-4与经典炎症标志物的关系及CD40L、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-4之间的关系,采用logistic回归方程分析CD40L、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-4与治疗无效的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)及ROC下面积(AUC)分析CD40L、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-4预测抗菌治疗效果的效能。结果:观察组WBC、CRP、PCT、CD40L、IL-4水平均高于对照组(P<0.01),CD4^(+)/CD8^(+)低于对照组(P<0.01);CD40L与WBC、CRP、PCT均呈正相关(r=0.720、0.433、0.832,P<0.01),CD4^(+)/CD8^(+)与WBC、CRP、PCT呈负相关(r=-0.709、-0.449、-0.698,P<0.01),IL-4与WBC、CRP、PCT呈正相关(r=0.889、0.760、0.723,P<0.01);CD40L、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-4均与治疗无效的相关性具有统计学意义(P<0.01);CD40L与CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关(r=-0.776,P<0.01),与IL-4呈正相关(r=0.554,P<0.01);CD4^(+)/CD8^(+)与IL-4呈负相关(r=-0.538,P<0.01);单一指标中IL-4预测抗菌治疗效果的AUC最大为0.805,各指标联合预测抗菌治疗效果的AUC为0.867,敏感度达79.07%,大于任一单一指标(P<0.01)。结论:CD40L、IL-4、CD4^(+)/CD8^(+)与经典炎症标志物存在一定相关性,可在一定程度上反映细菌性CAP患儿病情程度,治疗期间进行动态监测可及早预测疗效,为细菌性CAP患儿后续治疗提供参考依据。

砒石对哮喘小鼠5-脂氧合酶激活蛋白基因表达及白三烯C_4的影响

目的 探讨 5 脂氧合酶激活蛋白 (FLAP)基因表达、小鼠白三烯C4(LTC4)水平在小鼠哮喘发病中的作用 ,以及砒石对哮喘的治疗作用与FLAP基因表达及LTC4水平的关系。方法 建立小鼠卵蛋白哮喘模型 ,灌胃给予砒石等药 ,用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织中FLAPmRNA表达的变化 ;用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中LTC4含量。结果 哮喘小鼠肺组织FLAP基因表达水平、BALF中LTC4水平均较正常对照组显著升高。 1 2 5、2 5 0及 5 0 0mg/kg剂量的砒石可下调哮喘小鼠FLAPmRNA表达的量 ,抑制哮喘小鼠BALF中LTC4的水平。结论 气道中FLAP基因表达上调和LTC4水平增高在OVA致敏小鼠哮喘发病中起着重要作用。砒石可显著抑制哮喘小鼠肺组织中FLAP基因的表达 ,降低哮喘小鼠BALF中LTC4水平 ,具有抗哮喘活性。

光动力作用对人结肠癌细胞转录因子激活蛋白-4表达的影响

目的观察不同浓度光敏剂酞菁锌对结肠癌细胞株SW480的生长抑制作用及其对转录因子激活蛋白-4(AP-4)表达的影响。方法应用CCK-8方法评估光动力作用后SW480细胞的存活率,通过流式细胞技术、RT-PCR技术、Western blot技术检测光敏剂酞菁锌光动力作用后对SW480细胞凋亡和AP-4基因表达等生物学行为的影响。结果酞菁锌光动力治疗对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和光照剂量依赖性;流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随酞菁锌浓度增加逐步上升。2.0μg/mL酞菁锌光动力作用SW480细胞48 h后其AP-4 mRNA水平下降了81%,培养液上清液AP-4蛋白浓度下降了75.6%(P<0.01)。结论应用光敏剂酞菁锌光动力作用能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为结肠癌治疗提供了新的思路和手段。

支气管肺发育不良早产儿外周血清5-脂氧合酶激活蛋白、白三烯C4合成酶及半胱氨酰白三烯受体1的表达研究

目的:探讨新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome,NRDS)及支气管肺发育不良(bronchopul-monary dysplasia,BPD)患儿血清中5-脂氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase activating protein,FLAP)、白三烯C4合成酶(leukotriene C4 synthase,LTC4S)及半胱氨酰白三烯受体1(cysteinyl leukotriene receptor 1,CysLTR1)水平变化的意义,旨在寻找BPD早期敏感的生物学指标。方法:收集2015年8月—2017年12月在南京医科大学第一附属医院儿科收治入院的胎龄<37周、出生体重<2 500 g的新生儿病例。待其出院后根据患儿完整住院信息将病例整理为无肺部疾病的早产儿65例(对照组),不合并BPD的NRDS早产儿60例(NRDS组),BPD早产儿49例(BPD组)。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测新生儿生后3、7、14 d血清中FLAP、LTC4S、CysLTR1水平。比较3组各时间点各指标的浓度水平,采用方差分析、t检验及卡方检验等进行统计学分析。结果:生后3 d BPD组血清FLAP、CysLTR1水平均高于对照组和NRDS组(P均<0.05)。生后7 d BPD组血清FLAP、LTC4S、CysLTR1水平均高于对照组(P均<0.05),BPD组血清FLAP和CysLTR1水平分别高于NRDS组(P <0.05)。生后14 d BPD组仅血清LTC4S水平高于对照组(P <0.05)。结论:生后3 d血清PLAP、CysLTR1水平,生后7 d血清FLAP、LTC4S和CysLTR1水平,生后14 d血清LTC4S水平可作为BPD早期诊断的生物学指标。

丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4在动脉粥样硬化易损斑块形成中的调节作用

目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(Map4k4)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的动脉粥样硬化(AS)易损斑块形成中的调节作用。方法 ApoE^(-/-)小鼠随机分为4组(每组8只):Control组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+shMap4k4组和Ang Ⅱ+Map4k4组。采用油红O染色(脂质)、Masson染色(胶原)、α-肌动蛋白免疫荧光染色(平滑肌细胞)和F4/80染色(巨噬细胞)检测主动脉窦斑块稳定性。通过免疫荧光和Western blot分析Map4k4表达。体外构建Map4k4敲低或过表达巨噬细胞,用于确认Map4k4在Ang Ⅱ诱导的细胞凋亡中的作用。结果 Ang Ⅱ促进了ApoE^(-/-)小鼠AS斑块易损性和巨噬细胞凋亡(P <0.05),伴随着Map4k4表达的上调(P <0.05)。与Ang Ⅱ组小鼠相比,Ang Ⅱ+shMap4k4组小鼠的AS斑块易损性[(1.22±0.06)vs.(0.49±0.04)]和巨噬细胞凋亡[(8.42±0.40)vs.(3.49±0.31)]明显减弱(P <0.05),而Ang Ⅱ+Map4k4组小鼠上述指标明显增强[(1.22±0.06)vs.(1.45±0.05),(8.42±0.40)vs.(14.11±0.78),P <0.05]。体外实验显示,Map4k4敲低有效减弱了Ang Ⅱ诱导的c-Caspase3、Bax蛋白表达增加(P <0.05),并增加了Bcl-2蛋白表达(P <0.05)。而Map4k4过表达进一步增强了Ang Ⅱ的诱导作用(P <0.05)。结论Ang Ⅱ通过上调Map4k4表达促进巨噬细胞凋亡,并进一步参与AS中易损斑块的形成。

5-脂氧合酶激活蛋白及磷酸二酯酶4D基因多态性与脑梗死易患性的分子流行病学研究

目的:分析5-脂氧合酶激活蛋白(ALOX5AP)及磷酸二酯酶4D(PDE4D)基因多态性与脑梗死(CI)易患性的分子流行病学特征。方法:收集CI患者396例作为病例组,另选取300名健康体检者作为对照组,运用PCR检测技术和基质辅助激光解析分析2组受检者ALOX5AP基因中SG13S89、SG13S114和PDE4D基因中SNP83的多态性,分析ALOX5AP及PDE4D基因多态性与CI的关系。结果:病例组SG13S89中AG基因型、A等位基因频率均高于对照组(P<0.05)。多元logistic逐步回归分析显示,调整年龄、高血压及糖尿病等因素的影响后,SG13S89中AG基因型是增加CI发生的危险性因素(P<0.05);AT型及SAD型CI患者SG13S89基因中的基因型及基因频率差异均无统计学意义(P>0.05);年龄分层后分析发现,女性是增加SG13S89基因中的AG基因型发生脑卒中的危险因素(P<0.05)。结论:SG13S89中的AG基因型和A等位基因使得CI的频率高于其他等位基因,可能的机制是通过介导的血管炎性反应实现,而未发现SG13S114及SNP83基因的多态性与CI有关。

上皮性卵巢癌血清人附睾分泌蛋白4和第二线粒体caspase激活蛋白检测的临床意义

目的探究上皮性卵巢癌的血清人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)、第二线粒体caspase激活蛋白(second mitochondrial activator of caspase,Smac)表达及临床鉴定价值。方法选取2018年4月至2019年8月湖南省常德市第一人民医院手术切除或活检确诊为上皮性卵巢癌患者46例以及良性卵巢肿瘤患者40例分别作为恶性组与良性组,另选取同期来院体检的健康女性40例作为对照组,检测全部研究对象的HE4、Smac表达情况并计算表达阳性率,比较分析HE4、Smac表达对上皮性卵巢癌的诊断价值。结果Smac水平对照组高于良性组和恶性组,良性组高于恶性组,差异有显著性(P<0.05);HE4水平对照组低于良性组和恶性组,良性组低于恶性组,差异有显著性(P<0.05);Smac、HE4阳性率对照组低于良性组和恶性组,良性组低于恶性组,差异有显著性(P<0.05)。病理分级Ⅰ级患者Smac水平高于Ⅱ级和Ⅲ级,Ⅱ级高于Ⅲ级,差异有显著性(P<0.05);Ⅰ级患者HE4水平低于Ⅱ级和Ⅲ级,Ⅱ级低于Ⅲ级,差异有显著性(P<0.05)。HE4、Smac联合诊断的特异度、阴性预测值均高于单一指标,差异有显著性(P<0.05),但灵敏度、阳性预测值比较,差异无显著性(P>0.05)。术后1周,恶性组的Smac水平低于良性组,HE4水平高于良性组,差异有显著性(P<0.05)。结论Smac、HE4对于上皮性卵巢癌诊断均具有一定的诊断价值,联合诊断价值更高,而且能够监测围术期病情变化,具有较高的应用价值。

信号转导及转录激活蛋白4对脂多糖所致小鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨信号转导及转录激活蛋白4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)在细菌表面分子脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)中的作用及可能机制。方法:建立STAT4基因敲除小鼠模型,采用LPS诱导小鼠肺损伤并观察肺组织病理变化及血气分析变化,流式细胞仪分析外周血骨髓源性抑制细胞(MDSC)和调节性CD4^+CD25^+Treg细胞的变化情况,瑞氏染色观察肺部炎症细胞浸润情况。结果:在LPS诱导的肺损伤模型中,STAT4基因敲除小鼠肺组织损害较野生型小鼠肺损伤减轻,动脉血氧合指数(PaO_2/FiO_2)高,病理评分降低,肺湿/干重比降低,外周血MDSC和CD4^+CD25^+Treg升高,肺部炎性细胞总数增加,中性粒细胞浸润增加(P<0.05)。结论:STAT4可加重LPS诱导的肺损伤,可能与MDSC及CD4^+CD25^+Treg细胞在外周血的比例升高有关。

MAP4K4在肺腺癌中的表达及与临床病理特征、放化疗疗效、预后的关系

目的 检测丝裂原激活蛋白激酶4(MAP4K4)在肺腺癌组织中的表达,探讨其与临床病理特征、放化疗疗效及预后的关系。方法 选择2018年5月至2020年7月空军军医大学第二附属医院收治的121例经肺穿刺组织活检或支气管镜活检确诊的非手术肺腺癌患者癌组织标本;另选取同期接受手术治疗获得的20例肺腺癌患者癌旁正常组织标本作为对照。采用免疫组化法检测不同组织中MAP4K4表达水平,并分析MAP4K4表达与肺腺癌临床病理特征、放化疗疗效及预后的关系。结果 肺腺癌组织中MAP4K4阳性表达率高于癌旁正常组织(45.5%vs. 0.0%,P<0.05)。MAP4K4表达与分化程度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关(P<0.05)。MAP4K4阳性患者客观有效率明显低于阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05);MAP4K4表达与放化疗疗效呈负相关(r=-0.309,P<0.05)。MAP4K4阳性者中位无进展生存期及总生存期短于阴性者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 肺腺癌组织中MAP4K4高表达,且与临床病理特征及放化疗疗效密切相关,阳性表达患者预后较差。MAP4K4有望作为评估肺腺癌放化疗疗效及预后的有效分子标志物。

艾塞那肽通过SDF-1/CXCR-4/Rho GTPase通路增强脂肪来源间充质干细胞的趋化性迁移

目的探究艾塞那肽对脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)迁移的影响,并证实Rho GTPase为SDF-1/CXCR-4迁移通路的下游效应蛋白。方法分离并培养大鼠来源ADSCs并通过流式细胞术及体外诱导分化鉴定。应用RTCA x CELLigence系统检测艾塞那肽对ADSCs增殖能力的影响。Transwell观察不同浓度艾塞那肽,AMD3100(CXCR-4阻断剂),CCG-1423(Rho GTPase阻断剂)处理对ADSCs趋化性迁移能力的影响。流式细胞术及Western blot技术分别检测不同艾塞那肽浓度处理组细胞CXCR-4蛋白表达水平。活化的Rho蛋白pull-down检测试剂盒检测艾塞那肽处理组和AMD3100阻断组Rho GTPase表达情况。激光共聚焦显微镜观察不同处理组细胞应力纤维形成情况。结果 RTCA x CELLigence系统提示艾塞那肽处理24h内对ADSCs的增殖能力无明显影响。艾塞那肽呈浓度依赖性的增加ADSCs的趋化性迁移能力,AMD3100及CCG-1423可阻断这种效应(P<0.05)。流式细胞术及Western blotting结果都表明CXCR-4蛋白随艾塞那肽处理浓度升高而表达上调。此外,Western blot实验证实Rho GTPase的表达受SDF-1/CXCR-4通路影响。共聚焦显微镜观察到应力纤维的形成与SDF-1/CXCR-4/Rho GTPase通路相关。结论艾塞那肽能增强ADSCs的趋化性迁移能力,Rho GTPase为SDF-1/CXCR-4经典归巢通路的下游效应蛋白。

胃癌组织中ARHGAP4、FBLN5的表达及与病人预后的关系

目的探讨扣针蛋白5(FBLN5)、Rho GTPase激活蛋白4(ARHGAP4)在胃癌组织中的表达及与病人预后的关系。方法2013年12月~2018年12月我院收治的胃癌病人100例,收集距肿瘤边缘>1 cm处的胃癌组织以及距肿瘤边缘>5 cm的癌旁组织。分析FBLN5与ARHGAP4表达情况与胃癌临床病理学指标的关系,以及其对生存状况的影响,对病人的临床资料进行单因素和多因素Cox回归分析。采用免疫组织化学染色法检测FBLN5和ARHGAP4的表达情况。利用Kaplan-Meier法分析不同ARHGAP4、FBLN5表达水平与病人生存时间的关系。结果胃癌组织ARHGAP4阳性表达率低于癌旁组织,FBLN5的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);ARHGAP4表达与肿瘤部位、Lauren分型、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、CEA、CA19-9、CA125、免疫评分有关(P<0.05);FBLN5表达与Lauren分型、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、CE、CA19-9、CA125、免疫评分有关(P<0.05);FBLN5高表达组病人3年累积生存率低于低表达组(P=0.044);ARHGAP4高表达病人3年累积生存率高于低表达病人(P=0.021);Cox分析结果显示,ARHGAP4高表达为影响生存的保护因素(P<0.05)。结论FBLN5高表达组病人预后较低表达病人差,ARHGAP4低表达病人预后较高表达病人好。FBLN5高表达为影响生存的危险因素,二者与胃癌病人病情发展和预后密切相关。

孟鲁司特对哮喘中白三烯B4代谢的影响

目的·观察孟鲁司特在哮喘治疗中对白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)代谢途径关键分子表达的影响,探讨哮喘的潜在干预靶点。方法·卵清蛋白(ovalbumin,OVA)+Al(OH)3致敏激发小鼠,建立以过敏性气道疾病(allergic airway disease,AAD)为特点的小鼠急性、亚急性和慢性哮喘模型并予孟鲁司特灌胃干预,然后再予OVA激发慢性哮喘模型。无约束全身体积描记仪测定小鼠肺功能,探究气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR)的变化规律。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肺组织嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)浸润及杯状细胞(goblet cell,GCL)增生情况,观察气道过敏性炎症的病理学特点。ELISA和液相芯片多因子检测试剂盒检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和血清的免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)和白细胞介素(interleukin,IL)表达水平,观察2型辅助性T细胞(helper T cell type 2,Th2)炎症情况。RT-qPCR、Western blotting及免疫组织化学检测小鼠LTB4合成限速酶5-脂氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase activating protein,ALOX5AP)和白三烯A4水解酶(leukotriene A4 hydrolase,LTA4H)及LTB4受体1(leukotriene B4 receptor 1,BLT1)基因及蛋白表达,探究LTB4的代谢与哮喘的关系。结果·OVA+Al(OH)_(3)可建立以AAD为特征的小鼠哮喘模型,表现为以增强呼气间歇(enhanced pause,Penh)值升高为肺功能特点的AHR,以气道EOS浸润和GCL增生为病理学特点的嗜酸性炎症和黏液高分泌状态,及以BALF和血清中IgE、IL-4和IL-13升高且IFN-γ、IL-2和IL-12降低为免疫学特点的Th2型炎症反应;孟鲁司特可有效缓解AAD。ALOX5AP、LTA4H和BLT1基因及蛋白在哮喘中表达增强,孟鲁司特始终抑制ALOX5AP表达,但可促进LTA4H和BLT1在慢性期的表达。OVA再次激发后,孟鲁司特可使LTA4H和BLT1表达增强。结论·孟鲁司特具有缓解哮喘小鼠过敏性炎症的效应,但可刺激LTB4的生成和堆积并以慢性期显著;再次予OVA激发孟鲁司特持续干预的哮喘小鼠可使LTB4与BLT1的表达增强;孟鲁司特可能存在激活LTB4及其受体BLT1进而加重哮喘发作的风险,LTB4代谢限速酶LTA4H及受体BLT1可能是哮喘治疗的潜在靶点。

穴位注射通过Toll样受体4/激活蛋白-1信号通路纠正Th1/Th2细胞因子失衡改善变应性鼻炎大鼠炎性反应

目的:观察穴位注射对变应性鼻炎(AR)大鼠血清辅助性T细胞(Th)1/Th2相关细胞因子及鼻黏膜Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、激活蛋白-1(AP-1)表达水平的影响,探讨穴位注射治疗AR的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、非经非穴组、穴位注射组,每组8只。用卵清蛋白致敏法建立AR大鼠模型。穴位注射组给予地塞米松和利多卡因混合液注射双侧“迎香”和“印堂”,非经非穴组给予地塞米松和利多卡因混合液注射非经非穴处,两组均每4日治疗1次,共4次。对各组大鼠症状积分进行评定;HE染色法观察鼻黏膜组织病理形态学变化;ELISA法检测血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ含量;免疫荧光染色法检测鼻黏膜组织TLR4、MyD88的表达;Western blot法检测鼻黏膜组织AP-1的表达。结果:与正常组比较,模型组症状积分显著升高(P<0.01),血清IgE、IL-4含量及鼻黏膜TLR4、MyD88、AP-1表达均显著升高(P<0.01),血清IFN-γ含量显著降低(P<0.01)。与模型组和非经非穴组比较,穴位注射组症状积分显著降低(P<0.01),血清IgE、IL-4含量及鼻黏膜TLR4、MyD88、AP-1表达均显著降低(P<0.01,P<0.05),血清IFN-γ含量显著升高(P<0.01)。模型组和非经非穴组可见鼻黏膜上皮大部分脱落,固有层血管扩张,腺体增生,伴有嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润;穴位注射组上皮病变、腺体增生和炎性反应明显减轻。结论:穴位注射可有效改善AR大鼠鼻部过敏性炎性反应,其机制可能与抑制炎性信号通路TLR4/AP-1的异常激活,进而调节Th1/Th2细胞平衡有关。

弥漫大B细胞淋巴瘤患者病理组织中IQGAP2和CDC42表达及临床价值研究

目的 研究弥漫大B细胞淋巴瘤(iffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者病理组织中含有IQ基序GTPase激活蛋白2(IQ motif containing GTPase activating protein 2,IQGAP2)和细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,CDC42)的表达及临床意义。方法 选取2017年2月~2019年2月期间湖南省直中医医院诊治的83例初诊DLBCL患者为研究对象,以同期诊治的50例反应性淋巴结增生(reactive lymph node hyperplasia,RHL)患者为RLH组。应用免疫组织化学法及免疫印迹法检测组织中IQGAP2和CDC42的表达。比较不同临床病理特征患者DLBCL组织中IQGAP2和CDC42的表达差异。Kaplan-Meier生存分析IQGAP2和CDC42表达对DLBCL患者生存预后的影响。单因素和多因素COX回归分析影响DLBCL患者预后的因素。结果 DLBCL组中IQGAP2(83.13%),CDC42(85.54%)蛋白阳性率高于RLH组(8.00%,12.00%),差异均有统计学意义(χ^(2)=57.016,69.230,均P <0.05)。DLBCL组织中IQGAP2(1.21±0.23),CDC42(1.34±0.25)蛋白相对表达量高于RLH组织(0.61±0.18,0.75±0.21),差异具有统计学意义(t=15.759,14.377,均P<0.05)。Hans分型非GCB型,Ann Arbor临床分期Ⅲ~Ⅳ期组织中IQGAP2(90.00%vs 69.70%,91.67%vs 71.43%),CDC42(92.00%vs 75.76%,93.75%vs 74.29%)蛋白阳性率大于GCB型,Ⅰ~Ⅱ期,差异具有统计学意义(t=4.241~6.200,均P <0.05)。IQGAP2阳性组(50.72%vs 85.71%),CDC42阳性组(50.70%vs 91.67%)完全缓解率分别低于IQGAP2阴性组,CDC42阴性组,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.801,7.013,均P<0.05)。IQGAP2阳性组(56.52%vs 85.71%),CDC42阳性组(56.34%vs 91.67%)三年总体生存率分别低于IQGAP2阴性组和CDC42阴性组患者,差异均有统计学意义(χ^(2)=4.318,4.963,均P<0.05)。Ann Arbor分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=1.618,95%CI:1.019~2.569),IQGAP2阳性(OR=2.036,95%CI:1.174~3.532),CDC42阳性(OR=1.763,95%CI:1.114~2.789)是影响DLBCL患者生存预后的独立危险因素。结论 DLBCL组织中IQGAP2,CDC42表达升高,是影响DLBCL患者不良预后的独立因素,是新的DLBCL肿瘤标志物。

JAK/STAT通路介导免疫缺陷大鼠CD4^(+)T细胞分化的研究

目的基于酪氨酸激酶/信号传导及转录激活蛋白(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)信号通路与免疫缺陷性疾病中CD4^(+)T细胞占比减少的相关性,探讨免疫缺陷大鼠CD4^(+)T淋巴细胞分化的机制。方法将SPF级SD大鼠48只,随机分为正常大鼠(24只)和模型大鼠(24只),采用环孢素制备免疫缺陷模型。每组随机选6只验证造模效果,将剩余36只大鼠分为正常组、低鲁组、高鲁组、模型组、模型低鲁组、模型高鲁组,每组6只。低鲁组和模型低鲁组分别注射1.75 mg·kg^(-1)鲁索利替尼,高鲁组和模型高鲁组分别注射3.5 mg·kg^(-1)鲁索利替尼,正常组和模型组注射1.75 mg·kg^(-1)生理盐水,隔日1次,共注射6次。采用流式细胞术检测CD4^(+)T和CD8^(+)T淋巴细胞百分比,计算大鼠脾脏和胸腺指数,HE染色法观察脾脏和胸腺病理改变,ELISA检测白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)细胞因子表达量,Western blot检测脾脏组织中酪氨酸激酶2(Janus kinase 2,JAK2)、T盒家族转录因子表达蛋白(T-box family transcription factor expression protein,T-bet)、信号传导及转录激活蛋白4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)、信号传导及转录激活蛋白6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)和GATA结合蛋白-3(GATA-binding protein-3,GATA3)蛋白表达量。结果模型组大鼠CD4^(+)T淋巴细胞百分比、胸腺指数较正常组明显下降(P<0.05)。与正常组比较,模型组CD4^(+)T淋巴细胞百分比减少(P<0.05),IL-2、IFN-γ和IL-12表达量下降(P<0.01),IL-10表达量升高(P<0.05);与模型组相比,模型高鲁组CD4^(+)T淋巴细胞百分比、胸腺和脾脏指数、IL-2、IFN-γ显著下降(P<0.05),而GATA3、STAT6蛋白表达量升高(P<0.05),IL-6、IL-10表达量明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论免疫缺陷疾病以CD4^(+)T淋巴细胞减少为主要特征,CD4^(+)T细胞亚群失调与JAK/STAT信号通路表达失衡有关,其机制可能与IL-12/STAT4通路表达下调和IL-4/STAT6通路表达上调有关,CD4^(+)T淋巴细胞分化由辅助性T细胞1(helper T cell 1,Th1)向辅助性T细胞2(helper T cell 2,Th2)漂移,造成Th1/Th2失衡,引发免疫缺陷。

胰腺癌组织中miR-939-5p、ARHGAP4基因表达变化及意义

目的探讨胰腺癌组织中微小RNA-939-5p(miR-939-5p)与Rho GTPase激活蛋白4(ARHGAP4)的表达变化及临床意义。方法用荧光定量PCR技术检测98例胰腺癌组织及癌旁正常组织中miR-939-5p、ARHGAP4 mRNA的相对表达量,并分析二者表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系,用Pearson线性相关法分析miR-939-5p、ARHGAP4 mRNA的关系。结果与癌旁正常组织比较,胰腺癌组织中miR-939-5p相对表达量高,ARHGAP4 mRNA相对表达量低(P均<0.001)。胰腺癌组织中miR-939-5p、ARHGAP4 mRNA表达与肿瘤TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者年龄、性别及肿瘤直径无关(P均>0.05)。胰腺癌组织中miR-939-5p表达与ARHGAP4 mRNA表达呈负相关(r=-0.574,P<0.05)。结论胰腺癌组织中miR-939-5p呈高表达,ARHGAP4 mRNA呈低表达,二者可能协同参与肿瘤的发生发展。