GVHD患者外周血Th17/Treg细胞相关的细胞因子检测与临床意义

本研究旨在探讨急性移植物抗宿主病(aGVHD)、慢性GVHD(cGVHD)患者外周血中Th17/Treg细胞相关的细胞因子的水平与临床意义。外周血样品采集自造血干细胞移植术后患者和健康人,其中aGVHD组10例、cGVHD组13例、无GVHD组16例,健康人20名。采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测各组外周血血浆中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、TGF-β1、IL-17、IL-23的表达水平。结果表明:a/cGVHD组IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-17及IL-23水平显著高于无GVHD组和健康人(p<0.05),而IL-10、TGF-β1水平显著低于无GVHD组和健康人(p<0.05)。aGVHD和cGVHD组患者治疗有效后,外周血中IL-6、IL-17及IL-23水平较治疗前明显降低;IL-10、TGF-β1水平明显升高,而IFN-γ、IL-4无明显变化。各组患者血浆中TGF-β1与IL-6、TGF-β1与IL-17、TGF-β1与IL-23水平呈负相关(r分别等于-0.36、-0.51和-0.44,p均<0.05),IL-6与IL-17、IL-6与IL-23、IL-17与IL-23水平呈正相关(r分别等于0.62、0.71和0.93,p均<0.05)。结论:Th17/Treg细胞相关的细胞因子可能在aGVHD和cGVHD的发生、发展中具有重要作用,对它们的研究有助于寻找治疗a/cGVHD的新靶点。

肝细胞生长因子对ALL小鼠骨髓移植后GVHD和血清Th1/Th2相关细胞因子的影响

为了观察肝细胞生长因子 (HGF)对急性淋巴细胞白血病 (ALL)小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)后GVHD和血清Th1 Th2相关细胞因子的影响 ,BALB c小鼠ALL模型建立后 ,接受 11Gy全身照射 ,将昆明小鼠骨髓移植给该ALL模型小鼠。随机将BALB c小鼠分A、B两组 ,A组移植后 0天至 7天皮下注射HGF ,B组皮下注射PBS。移植后观察A、B两组的GVHD症状和肝、小肠、皮肤的病理学变化 ;移植后第 8天取血检测IFN γ和IL 4水平。结果表明 :A组的GVHD症状积分低于B组 (P <0 .0 5 ) ;A、B两组的IFN γ均高于正常组 (P值分别 <0 0 5和0 0 0 1) ,但A组低于B组 (P <0 .0 1) ;A、B两组的IL 4均低于正常组 (P <0 .0 5 ) ,而A组的IL 4高于B组 (P <0 .0 5 )。结论 :HGF可减轻GVHD的严重程度 ,与HGF有调节Th1 Th2相关细胞因子趋于平衡的作用有关。

HLA-DRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析

1998年6月至2003年7月,广州脐血库向国内21家移植中心提供非亲缘异基因脐血移植54例。本研究采用PCR产物直接测序法对HLA-DRB1进行高分辨分型(PCR-sequencing based typing PCR-SBT),并结合HLA-SSP低分辨分型结果,探讨非亲缘性脐血移植供/受者HLA-DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系。利用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA,采用HLA-SBT方法分别对HLA-DRB1等位基因进行高分辨分型,并与HLA-SSP(HLA-sequencing specific primers)低分辨结果进行比较分析。结果表明:采用双盲法对48例非亲缘性脐血移植供/受者样本HLA-DRB1进行高分辨分型,结果HLA-DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD发生率(25%)显著低于不完全相合病例的GVHD发生率(65.6%)(P=0.008)。结论:对HLA-DRB1采用高分辨分型方法在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有重要的临床应用价值。

脐血间充质干细胞治疗GVHD的效果(附5例异基因造血干细胞移植术后GVHD的治疗)

目的探讨脐血间充质干细胞在异基因移植术后移植物抗宿主病(GVHD)的临床应用。方法回顾性分析了5例髓细胞白血病异基因造血干细胞移植患者移植后GVHD治疗情况,经常规抗GVHD药物治疗无效后,均行脐带血间充质干细胞(UCMSCs)治疗,观察GVHD相关症状的恢复、再发及生存等指标。结果其中2例经UCMSCs治疗疗效良好,生存至今,无再发GVHD;2例治疗后好转,但数月后复发,再次UCMSCs治疗后好转;1例无效,再次输注UCMSCs,无效死亡。结论输注UCMSCs对GVHD治疗有效。

不同供受体T细胞比例对异基因造血干细胞移植后GVHD严重程度影响的实验研究

背景与目的:异基因造血干细胞移植研究近年来获重大进展,为恶性血液病的治愈提供了可能。移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease,GVHD)是异基因造血干细胞移植后的主要并发症,死亡率超过30%。临床发现植入是否成功及GVHD的严重程度与预处理后供受体T细胞比例有关。本研究建立大鼠异基因骨髓移植模型,探讨供受体的不同T细胞比例对GVHD严重程度的影响。方法:受体SD大鼠接受大剂量全身照射(totalbodyirradiation,TBI)加环磷酰胺(cyclophosphamideCTX)预处理,分别按1∶1、2∶1、4∶1的移植物与受体T细胞比例回输供体Wistar大鼠骨髓细胞,观察受体生存期、临床及病理GVHD评分。结果:实验组大鼠按移植物与受体T细胞比例为1∶1、2∶1和4∶1移植时,小鼠的存活时间分别为(16.7±1.3)天、(16.8±1.5)天和(15.0±1.7)天;临床GVHD评分分别为(2.4±0.6)分、(3.3±1.2)分和(5.3±1.4)分。移植物与受体T细胞比例为1∶1、2∶1移植时小鼠的存活时间、临床及病理GVHD评分与4∶1时比较有显著性差异(P<0.05)。结论:移植物内T细胞和经预处理后受体残存T细胞比例为1∶1、2∶1时,GVHD程度较轻;4∶1时,GVHD明显加重。

CT增强扫描鉴别异基因骨髓移植术后腹部GVHD和机遇性感染（英文）

目的:比较骨髓移植术后腹腔移植物抗宿主病(GVHD)和机遇性感染的CT表现以确定有助于鉴别诊断的CT特点。方法:纳入25例腹腔GVHD和15例腹腔机遇性感染患者,机遇性感染包括巨细胞病毒性感染(n=4)、真菌性感染(n=6)及细菌性感染(n=5)。对所有病人进行CT扫描。CT征象包括肠壁增厚、异常黏膜增强、肠管扩张、大量积液、胆管扩张、腹水以及邻近肠系膜条状征。分析病变的位置和范围。对两组病人的CT征象进行对照分析。结果:在胃肠道不连续性多发分布多见于GVHD;而连续性分布多见于机遇性感染(P<0.05)。胆管扩张是GVHD最常见的肠道外病变,然而非常少见于机遇性感染(P<0.05)。皮肤斑丘疹见于60%的GVHD,但是不见于机遇性感染(P<0.05)。对没有皮肤病变的病人,肠管病变的不连续分布和胆管扩张更多见于GVHD。结论:GVHD和机遇性感染的CT征象有较大重叠,尽管如此,一些临床和CT征象,例如皮肤斑丘疹、胆管扩张和肠管病变的不连续多发分布有利于诊断GVHD。

供者自然杀伤细胞减轻GVHD并提高移植成活率的实验研究

本研究观察激活的供、受者NK细胞能否减轻骨髓移植后GVHD和增加移植成活率。以C57BL/6小鼠作为供者,将接受6.5Gy60COγ射线全身照射的BALB/c受鼠随机分为4组,对照1组(无任何处理)、对照2组(骨髓移植)、实验1组(骨髓移植同时输注激活的受者NK细胞)和实验2组(骨髓移植同时输注激活的供者NK细胞),观察每组小鼠的活存期、嵌合率、GVHD临床和病理改变。结果表明:对照1组全部活存,实验1组比对照2组活存期短(P<0.05),实验2组比对照2组活存期延长(P<0.01)。实验1组GVHD临床及病理评分高于对照2组(P<0.05),实验2组GVHD临床及病理评分明显低于对照2组(P<0.01)。实验1组和实验2组嵌合率均较对照2组高(P<0.05),实验2组的嵌合率比实验1组明显增加(P<0.01)。结论:激活的供者NK细胞能延长实验小鼠的活存期,降低GVHD严重程度,增加移植成活率;而激活的受者NK细胞却缩短实验小鼠的活存期,加重GVHD严重程度。受者NK细胞也增加移植成活率,但比供者NK细胞作用小。

造血干细胞移植供者TNF-α基因多态性在GVHD中的频率分析

探讨供者肿瘤坏死因子α(TNF α)基因多态性在重度急性移植物抗宿主病 (aGVHD)和广泛型慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)中的作用。本研究应用变性高效液相色谱结合DNA测序检测了TNF α 30 8和TNF α 2 38基因在重度aGVHD和广泛型cGVHD的分布。结果表明 ,2 1例Ⅲ度 /Ⅳ度aGVHD病人中有 8例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,而2 8例 0度 /Ⅰ度aGVHD病人中仅 1例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,提示TNF α 30 8(G/A)在Ⅲ度 /Ⅳ度aGVHD中的频率明显高于 0度 /Ⅰ度aGVHD的病人 (P <0 .0 1)。在 2 3例广泛性cGVHD病人中有 7例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,而17例未发生cGVHD的病人中仅 1例呈现TNF α 30 8(G/A)阳性 ,提示TNF α 30 8(G/A)在广泛性cGVHD中的频率高于未发生cGVHD的病人 (P <0 .0 5 )。在 2 1例Ⅲ度 /Ⅳ度aGVHD和 2 8例 0度 /Ⅰ度aGVHD及 2 3例广泛性cGVHD及17例未发生cGVHD的病人中均有 1例呈现TNF α 2 38(G/A)阳性 ,提示TNF α 2 38(G/A)在上述各组病人间的频率无明显差异。结论 :TNF α 30 8(G/A)阳性与Ⅲ度

内皮细胞及组织因子在GVHD中作用机制的初步研究

本研究检测人内皮细胞组织因子(TF)和IL-2的表达水平,以探讨使用免疫抑制剂后内皮细胞TF及IL-2表达水平的变化及内皮细胞损伤和TF异常表达在GVHD中的意义。体外混合人内皮细胞与异体人淋巴细胞及加入不同浓度的CsA共培养4-6小时后,用流式细胞术和RT-PCR检测内皮细胞中TF的表达水平,应用ELISA法检测上清中IL-2的水平。结果表明:体外混合人内皮细胞与异体人淋巴细胞共培养后,与未混合培养的相比内皮细胞表达TF增加(p<0.01),并且在培养液中IL-2水平也相应增高(p<0.01),在加入不同浓度的CsA之后,TFmRNA表达下降,相应的培养液中IL-2浓度也下降(p<0.01)。结论:内皮细胞损伤与TF异常表达在骨髓移植后的GVHD中起关键的作用,其中受体的内皮细胞受到供体淋巴细胞刺激后高表达TF可能是GVHD发生、发展过程中的关键步骤。

一例输血相关性GVHD

报告1例12岁女性,患急性淋巴细胞性白血病第一次复发,在诱导化疗期全血细胞减少,输全血和颗粒细胞引起腹泻、皮疹,皮肤病理符合急性移植物抗宿主病改变。为此作者复习文献,对输血相关性GVHD的临床特点及防治措施作了介绍。

CD4^+CD25^+调节性T细胞及其与GVHD的关联性

CD4+CD25+调节性T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群,具有免疫无能和免疫抑制两大特性,通过细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子发挥对CD4+CD25-T细胞的抑制作用。GVHD是异基因造血干细胞移植最严重的并发症之一,近来有关CD4+CD25+调节性T细胞与GVHD关联性的研究得出了两种截然相反的结论,即该类细胞可有效防治GVHD的发生及该类细胞与GVHD的发生率成正比。这一研究结果的明确将为GVHD的临床治疗提供新的思路。本文就CD4+CD25+调节性T细胞及其免疫表型、特性、免疫调节作用机制及CD4+CD25+T细胞与GVHD的关联性的一些新的研究进展作一综述。

供体淋巴细胞在GVHD模型小鼠组织器官中迁移和分布的动态观察

本研究应用小鼠GVHD模型探讨异基因T淋巴细胞在移植受体体内的迁移和分布。将C57BL/6的骨髓细胞和转基因荧光C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞输入经8Gy全身照射的BALB/c小鼠,建立eGFP标记供体淋巴细胞的GVHD小鼠模型;应用荧光显微镜和流式细胞术观测GVHD模型中eGFP+细胞的分布;ELISA法检测GVHD靶组织中趋化因子MIP-1α水平的改变。结果表明:①输入脾细胞和骨髓细胞第8天后出现GVHD临床及病理表现;②GVHD模型中,受体鼠肝、皮肤、肠、脾、肺、舌有eGFP+细胞浸润;③GVHD小鼠肝、脾eGFP+细胞中CD4+、CD8+细胞比例均逐渐升高;④GVHD鼠脾、肝组织中MIP-1α水平升高,脾中MIP-1α水平高峰出现于移植后第3天,肝中MIP-1α水平高峰出现于移植后第7天。结论:除肝、肠、皮肤外,肺、舌可能也是GVHD靶器官。肝、脾组织中供体淋巴细胞浸润伴随MIP-1α水平的升高。

脐血移植后GVHD的研究进展

脐血移植后ＧＶＨＤ的研究进展６１００４１华西医科大学免疫学研究室王霞汪成孝自１９８９年第１例脐血造血干细胞移植（ｃｏｒｄｂｌｏｏｄｓｔｅｍｃｅｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＣＢＳＣＴ）成功应用于临床以来［１］，迄今已有逾百例的临床报道［２］。与同...

利用供受体HLA三维结构差异快速预测GVHD

目的 对不完全相合造血干细胞移植中GVHD发生的可能性大小进行预测。方法 从诱导免疫排斥的HLA出发,分析供受体HLA三维结构差异大小与移植后排斥反应程度的关系。结果 供受体HLA三维结构差异的大小与移植后GVHD程度成正相关,发生Ⅰ～Ⅱ度GVHD时供受体HLA三维结构差异远小于发生Ⅲ～Ⅳ度GVHD的供受体。结论 该预测GVHD的方法具有简洁、快速、特异等优点,对不完全相合造血干细胞移植的移植前预处理方案与移植后免疫抑制剂的选用有一定意义。

普米克令舒用于造血干细胞移植后慢性GVHD口腔溃疡的效果观察

[目的]探讨普米克令舒对于造血干细胞移植后慢性GVHD口腔溃疡的治疗作用。[方法]将60例造血干细胞移植后慢性GVHD口腔溃疡的病人分为治疗组及对照组,两组均采用常规治疗加免疫抑制剂联合抗生素抗感染和营养支持治疗,对照组单给予四氢叶酸钙漱口,治疗组加用普米克令舒外涂患处,之后参照WHO标准进行分级评定。[结果]治疗后治疗组有效率明显高于对照组(P<0.05)。[结论]普米克令舒对造血干细胞移植后慢性GVHD相关的口腔溃疡,效果显著。

供受体的不同T细胞比例对GVHD影响的研究

目的 :建立大鼠异基因骨髓移植模型 ,探讨供受体的不同T细胞比例对GVHD严重程度的影响。方法 :受体SD大鼠接受TBI+CTX预处理 ,分别按 1∶1、2∶1、4∶1的移植物与受体T细胞比例回输供体WISTAR大鼠骨髓细胞 ,观察受体生存期、临床及病理GVHD评分。结果 :实验组大鼠按移植物与受体T细胞比例为 1∶1和 2∶1移植时生存期、临床及病理GVHD评分与 4 :1时差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 :当移植时移植物内T细胞和经预处理后受体残存T细胞比例为 1∶1和2∶1时GVHD程度较轻 ,而 4∶1时GVHD明显加重。

小鼠同种异体骨髓移植GVHD模型的建立

目的选择C57BL／6（H-2^b）→BALB／c（H-2^d）、C57BL／6（H-2^b）→CB6F1（H-2^d/b）分别作为完全异基因移植和半相合基因移植的供、受者；建立小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型。结果此GVHD模型动物于移植后1周体重进行性下降，前3天平均每天下降2g左右，此后体重下降趋势有所减缓。第8-12d体重略有回升，第12d后体重再度开始下降。并伴有皱毛、弓背、脱毛、腹泻及肛门红肿，皮肤增厚等症象。移植后12d开始有小鼠死亡，至移植后3周小鼠全部死亡，死亡时平均体重下降10g左右。病理学检查结果显示，肝脏汇管区大量分叶核细胞和淋巴细胞浸润，肝血窦内也有淋巴细胞浸润；肝血窦和中央静脉扩张瘀血。肠粘膜下层有大量淋巴细胞及分叶核细胞浸润，肠粘膜上皮坏死脱落。皮肤真皮层毛细血管扩张，有淋巴细胞和分叶核细胞浸润，符合GVHD症象及病理诊断。结论本实验动物模型是可靠的，可用于GVHD防治的实验性研究。

异基因造血干细胞移植中供体CD4^+CD25^+T细胞与aGVHD的相关性研究

目的 探讨供体CD4 + CD2 5 + 免疫调控T细胞的表达水平与受者急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的相关性。方法 13例异基因造血干细胞移植中 ,采用流式细胞仪检测供体CD4 + CD2 5 + 免疫调控T细胞的表达水平 ,并随访患者移植后aGVHD的发生情况及严重程度。结果 13例患者均获造血重建 ,Ⅰ aGVHD 5例 ,Ⅱ aGVHD 2例 ,Ⅳ aGVHD 1例。发生aGVHD组供体CD4 + CD2 5 + 免疫调控T细胞水平为 (1.5 2± 1.2 5 ) % ,未发生aGVHD组为 (2 .70± 2 .0 8) % ,两组免疫调控T细胞水平差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 供体CD4 + CD2 5 + 免疫调控T细胞的表达水平与受者aGVHD的发生有相关性 ,提高供体免疫调控T细胞水平有望减低移植后aGVHD发生率。