GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用

目的探讨GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用。方法选取新生3~7日龄的SD大鼠若干,提取原代脑微血管内皮细胞(BMEC)及星形胶质细胞(AC)。于体外构建BMEC单层培养模型和BMEC+AC共培养模型,分为BMEC单层培养模型组、BMEC+AC共培养组及Blank组(只加培养基);取体外血脑屏障(BBB)共培养模型,分为Control组和脑出血组(ICH组),Control组加入完全培养基处理,ICH组加入40 u/mL凝血酶处理,分别处理12 h模拟体外ICH模型,并通过4 h渗漏试验、荧光素钠通透性试验评价BBB及ICH模型的通透性。另取BBB共培养模型大鼠分成5个组:Control组、ICH组,以及GW0742低、中、高剂量组(1.25、2.50、5.00μmol/L),给药24 h后采用Western blotting检测MMP-9、ZO-1、Occludin蛋白表达。结果4 h渗漏试验结果显示:与Blank组比较,BMEC单层培养组能维持一定的液面差;与BMEC单层培养组比较,BMEC+AC共培养组能维持较好的液面差。荧光素钠通透性试验结果显示各组通透性为:Blank组>BMEC单层培养组>BMEC+AC共培养组。荧光素钠通透性试验结果显示:与Blank组比较,BMEC单层培养组在0.5、1.0、2.0 h时通透性降低(P<0.05);与BMEC单层培养组比较,BMEC+AC共培养组在0.5、1.0、2.0 h时通透性降低(P<0.05)。4 h渗漏试验结果显示:与Control组相比,ICH组液面差降低,通透性增加。荧光素钠通透性试验结果显示:与Control组比较,ICH组在0.5、1.0、2.0 h时通透性增加(P<0.05)。细胞形态学观察结果显示:与Control组比较,ICH组内皮细胞形态明显皱缩、拉长;与ICH组比较,给药组内皮细胞形态未见明显皱缩、拉长,呈剂量依赖。与Control组比较,ICH组MMP-9蛋白相对表达量升高(P<0.05),ZO-1、Occludin蛋白相对表达量降低(P<0.05);与ICH组比较,GW0742高剂量组MMP-9蛋白相对表达量降低(P<0.05),ZO-1、Occludin蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论GW0742对凝血酶诱导的血脑屏障破坏具有保护作用,其保护作用可能与抑制MMP-9的过度表达及促进紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达有关。

过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ激动剂GW0742对硝酸甘油诱导偏头痛大鼠的作用

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptorβ/δ,PPARβ/δ)激动剂GW0742对硝酸甘油诱导偏头痛大鼠的影响。方法 48只(SD大鼠)随机分为模型组、GW0742组和正常对照组。模型组按Tassorelli Cristina法复制大鼠偏头痛模型,GW0742组于造模后30min给药。取三叉神经颈复合体,采用免疫组织化学和Western blot法测定PPARβ/δ及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase 9,MMP-9)的表达。结果模型组三叉神经颈复合体中PPARβ/δ的表达明显高于对照组,差异有统计学意义,同时模型组大鼠IL-6、ICAM-1、MMP-9高于对照组,给予GW0742大鼠IL-6、ICAM-1、MMP-9表达明显下降。结论 PPARβ/δ在偏头痛时高度表达,PPARβ/δ激动剂对偏头痛有保护作用。

GW0742对高糖损伤大鼠胸主动脉内皮的保护作用

目的探讨GW0742对高糖损伤大鼠胸主动脉内皮的作用及可能机制。方法葡萄糖55 mmol·L^(-1)(high glucose,HG)孵育大鼠胸主动脉,以乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)诱导的内皮依赖性舒张作用为内皮功能完整性指标,HE染色观察血管形态结构变化,硝酸还原法测量血管内一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,利用q RT-PCR和Western blot方法检测血管中过氧化物酶增殖物激活受体β(peroxisome proliferator-activated receptorβ,PPARβ)、核转录因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)m RNA和蛋白表达。结果 HG条件下,ACh的内皮依赖性舒张作用明显减弱(P<0.01),内皮功能受损;血管内皮细胞和平滑肌细胞结构完整性也被破坏;同时,PPARβm RNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),而NF-κB p65的表达则升高(P<0.01),e NOS的表达下降(P<0.01),血管内NO含量亦减少(P<0.01);GW0742(0.01、0.1、1μmol·L~(^(-1)))能剂量依赖性地改善高糖损伤的ACh内皮依赖性舒张作用(P<0.01),减轻内皮细胞和平滑肌细胞的损伤,上调PPARβ表达,减少NF-κB p65的表达,增加e NOS表达和NO的浓度(P<0.01)。结论 GW0742对高糖损伤的大鼠胸主动脉内皮有保护作用,该作用可能与其激活PPARβ,下调NF-κB,改善e NOSNO系统有关。

GW0742对全脑缺血再灌注大鼠脑损伤的作用观察

目的初步观察PPARβ激动剂对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的影响。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血/再灌注模型。GW0742(22μg、67μg和200μg)于建模前30min脑室注射给予,Morris水迷宫测定大鼠空间学习记忆能力,HE染色观察海马神经元形态变化,生化法检测大鼠海马SOD活性和MDA含量变化。结果全脑缺血/再灌注大鼠空间学习记忆能力明显下降、海马神经元核固缩,海马SOD活性降低、MDA含量增加;GW0742给予能明显改善全脑缺血再灌注对大鼠空间学习记忆能力的损害和海马神经元损伤,并能明显阻遏全脑缺血再灌注大鼠海马的SOD活性降低、MDA含量增加。结论PPARβ激动剂对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤有明显保护作用,其神经保护作用机制可能与通过PPARβ激动从而抑制氧化应激反应有关。

GW0742对全脑缺血再灌注脑损伤的保护作用研究

目的：研究表明PPARβ在大鼠皮层和海马高表达，PPARβ激动剂对外周炎症损伤有明显保护作用，GW0742为PPARβ激动剂。本研究拟观察GW0742对全脑缺血再灌注脑损伤的保护作用。方法：采用自Wistar大鼠颈静脉内抽取约占35％的血液，并夹闭双侧颈动脉，缺血20分钟，然后将抽出的血液回输的方法，建立全脑缺血／再灌注损伤致脑损伤、神经元退变大鼠模型，GW0742（200ug／Kg、66ug／Kg、22ug／Kg）在造模前30min侧脑室给予。用Morris水迷宫测定大鼠空间识别能力、HE染色观察大鼠皮层和海马神经元形态及数目改变情况。结果：结果发现全脑缺血再灌注导致大鼠空间学习记忆障碍，海马神经元核固缩，细胞数目减少。GW0742给予明显改善缺血再灌注所致的大鼠学习记忆损害和减轻大鼠海马神经细胞损伤。结论：结果提示GW0742对全脑缺血再灌注脑损伤有明显的保护作用，PPA邸激动剂可能成为脑损伤、神经元退变治疗的新药。

PPARβ激动剂在大鼠创伤性脑损伤中的作用及机制

目的观察过氧化物酶体增生物激活受体β(PPARβ)激动剂GW0742对大鼠创伤性脑损伤的影响及作用机制。方法选用健康SD大鼠,随机分为单纯脑损伤组和GW0742治疗组,制备自由落体脑损伤模型,分别于损伤后1d、2d、3d、4d、5d、6d和7d进行运动功能测试和乳酸脱氢酶(LDH)活性检测;于损伤后24h通过干湿重法检测脑水含量,通过ELISA检测TNF-α和NF-κB的表达水平。结果与单纯损伤组相比,GW0742治疗组各时间点的运动功能评分均明显升高(P<0.01),而且LDH含量均明显减少(P<0.05)。损伤后24h,GW0742治疗组的脑水含量(P<0.01)及TNF-α和NF-κB表达水平(P<0.05)明显低于单纯损伤组。结论 PPARβ激动剂GW0742对大鼠创伤性脑损伤有明显的保护作用,抗炎作用可能是GW0742发挥保护作用的机制之一。

PPAR β/δ激动剂减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的:研究PPARβ/δ激动剂GW0742对小鼠心肌缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的影响。方法:将小鼠分成4组,分别为溶剂假手术组[二甲基亚砜(DMSO),sham组],激动剂假手术组(GW0742 sham组),溶剂手术组(DMSO I/R组)和激动剂手术组(GW0742 I/R组)。术后于小鼠腹腔注射DMSO及GW0742。采用ELISA法检测各组血浆中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),免疫印迹法检测各组核因子-κB(NF-κB)p65亚单位及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白的表达量。结果:GW0742 I/R组血浆中的LDH较DMSO I/R组减低(P<0.001)。GW0742 I/R组心肌中的NF-κBp65和ICAM-1蛋白表达量较DMSO I/R组减低(分别为P<0.001和P<0.05)。结论:GW0742可以减轻小鼠心肌I/R损伤。PPARβ/δ是机体抗心肌I/R损伤的重要防御因子之一。

PPAR-β对小鼠脓毒症肝损伤的研究

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体β亚型(PPAR-β)对小鼠脓毒症肝损伤的作用。方法将120只小鼠随机分为假手数组(SHAM)、脓毒症肝损伤组(LPS)、肝损伤+激动剂组(LPS+GW0742)、肝损伤+抑制剂组(LPS+GSK0660),每组各30只。在不同时间段检测ALT、TBIL、AST、IL-1β、IL-18、TNF-α、capase-1、NF-κB水平。结果不同时间点,LPS+GW0742组血清中ALT、AST和TBIL水平均显著降低于LPS组,差异有统计学意义(P=0.000);LPS+GW0742组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-18水平均显著低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS+GW0742组条带面积较LPS组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPAR-β可以通过下调NF-κB分子的表达及炎性因子的产生,从而减轻小鼠脓毒症肝损伤,为脓毒症的治疗提供新的靶点。

PPARβ/δ及其配体在RAW264.7泡沫细胞模型中的作用

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome Proliferators-activated Receptor,PPAR)-β/δ及其激动剂GW0742、抑制剂GSK0660在RAW264.7泡沫细胞模型中的作用。方法本研究选用RAW264.7细胞,共分为6组,分别是对照组、LPS组、ox-LDL组、模型组、激动剂组和抑制剂组。实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR)用来检测PPARβ/δ和单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant protein,MCP)-1 m RNA的水平,蛋白质印迹法(Western Blotting,WB)检测PPARβ/δ和MCP-1蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)测定细胞培养液上清中炎症因子肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白介素(interleukin,IL)-10和MCP-1的水平。结果对照组、LPS组、ox-LDL组、模型组、激动剂组的PPARβ/δ蛋白质和m RNA水平逐渐增加(P<0.01),而抑制剂组PPARβ/δ蛋白质和m RNA水平则明显低于模型组和激动剂组(P<0.01)。MCP-1蛋白质和m RNA的水平在对照组、ox-LDL组、LPS组、模型组逐渐增加(P<0.01),而激动剂组明显降低(P<0.01),抑制剂组又有所增加(P<0.01)。总之,MCP-1的蛋白质和m RNA水平在各组之间差异显著(P<0.01)。细胞培养液中TNF-α、MCP-1的水平LPS组、ox-LDL组、模型组明显升高(P<0.01),而激动剂组明显降低(P<0.01),抑制剂组又有所增加(P<0.01)。而IL-10在激动剂组和抑制剂组则表现出相反的趋势。结论 GW0742可以显著增加PPARβ/δ的表达,降低炎症因子MCP-1、TNF-α的水平,升高IL-10的水平;GSK0660则发挥完全相反的作用。