MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列多态性分析

目的:分析MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列的特征,了解MNS血型基因的多态性。方法:随机选取无偿献血者500人份离体24 h内的抗凝血各8 ml,以血型血清学方法鉴定MN、Ss、Mia血型。从500例样本中随机选取MNS与Mia血型不同组合的5例样本,使用密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞(PBMC)并提取总mRNA,使用逆转录试剂盒制备cDNA,采用巢式PCR(nested PCR)方法扩增目标片段,切胶回收后分别对GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列进行测序,通过Oligo 6.0软件分析碱基序列。结果:血清学检测得到MN、Ss和Mia表现型,不同个体间的红细胞与抗-Mia血清反应存在凝集强度差异。检测了5例不同表现型组合样本的GYPA、GYPB、GYPE基因mRNA全长序列,1例样本的GYPA mRNA中exon-6完整缺失,其他4例样本的GYPA mRNA全长完整;2例样本的GYPB mRNA中exon-2完整缺失,Mia血型阴性;2例样本的GYPB mRNA全长完整,Mia血型阳性;1例样本的GYPB mRNA中exon-5存在碱基替换;5例样本的GYPE mRNA全长完整。结论:MNS血型相关基因具有明显的多态性,mRNA全长序列的检测为GYPA、GYPB、GYPE基因结构的分析与MNS血型抗原表达的深入研究奠定了基础。

贵州地区布依族人群MNS血型基因GYPA和GYPB的群体遗传学研究

目的研究贵州布依族人群MNS血型基因GYPA和GYPB的遗传多态性。方法对随机抽取的138例贵州布依族献血者血样进行MNS血型血清学分型，并通过已建立的基因测序体系对GYPA的第二外显子和GYPB的第三外显子（B4）进行测序。结果贵州布依族人群的M，N，S和S抗原的基因频率分别为53．26％，46．74％，2．54％和97．46％，同时获得了M，N，S和s相关基因GYPA和GYPB的碱基序列。该研究获得了贵州布依族MNS血型的遗传特点，并与中国汉族人群无明显差异。结论该研究填补了贵州少数民族布依族MNS血型的血清学与分子生物学数据的空白，提示贵州少数民族和汉族人群间具有较为明显的民族融合特点，此研究还为临床输血、器官移植以及人类的遗传关系和种族迁移的研究打下了基础。

GPA，GPB分子相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列直接测序方法的建立及应用评价

目的建立人类GPA，GPB分子相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列的DNA直接测序方法，并将此方法应用于RBC血型MNS抗原的分析。方法以整群随机抽样法选择从2011年11月至2012年5月在本中心无偿献血的175例健康成年人的全血样品为研究对象。以血清学方法与序列特异引物聚合酶链反应（PCR—SSP）方法鉴定其MNS血型。根据GenBank提供的NG-007470与NG-007483基因参照序列为依据，自行设计GPA相关基因GYPA全部外显子的7对引物与GPB相关基因GYPB全部外显子的5对引物，探索最佳反应体系与PCR扩增条件，且能同时扩增2个基因全长外显子碱基序列，使用ABl3730XLDNA测序仪进行序列分析，以Oli6installer分析软件分析碱基序列。结果所建立的测序方法可于同一反应体系、相同PCR扩增条件同时检测GPA，GPB相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列，并准确分析本组血液样本的MNS血型的特征。基因测序结果与血清学分析及PCR—SSP鉴定结果完全一致。结论首次建立了稳定、精确、简捷的基因直接测序分型方法，可用于检测MNS血型基因型，并分析GPA，GPB肽链中氨基酸序列的多态性，为MNS血型系统的研究以及人类群体遗传学及分子进化的研究等方面提供广泛的应用价值。

西安地区献血人群MNS血型基因多态性研究

目的了解西安地区人群MNS血型基因的多态性。方法随机选取陕西西安地区献血人群200(人)份血样,以血型血清学鉴定其MN和Ss表现型;同时提取全血中的DNA,对血型糖蛋白相关基因GYPA的内含子(intron)-2、3及外显子(exon)-2与GYPB的exon-3(B4)序列扩增后测序;分析本组人群MNS等位基因的多态性并与不同地区人群的M基因各型的构成比作比较。结果本组人群的MN、Ss血型血清学定型与基因测序分型结果完全一致,其中M、N、S、s基因频率分别为0.467、0.533、0.053和0.947,MG、MT基因频率分别为0.415和0.052;本组人群M基因各型的构成比与北京和深圳人群不同;GYPA intron-2的第59与60位碱基处插入T,发生率为20.5%(41/200)。结论西安地区献血人群MNS血型基因具有多态性,对这种多态性的了解有助于本地区临床科学、合理输血以及开展人类群体遗传学特征及分子生物学的研究。