新型硫化氢供体GYY4137对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察GYY4137对大鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)后的保护作用。方法 45只健康雄性SD大鼠,按随机数字表法分成正常组(A组)、缺血再灌注组(B组)和缺血再灌注+GYY4137组(C组)。B组和C组大鼠建立肾脏缺血再灌注模型,C组在再灌注同时腹腔注射GYY4137(100μmol·kg^(-1))。方法苏木精和伊红(HE)染色观察肾脏组织病理改变;测定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;采用原位缺口末端标记检测肾小管上皮细胞凋亡指数(AI);反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾脏组织中的Bax,Bcl-2和caspase-3的表达情况。结果 B组可见肾小管扩张,肾小管上皮细胞坏死等表现,经GYY4137治疗后明显改善;A组,B组和C组的凋亡指数分别为(4.58±0.43)%、(23.52±1.87)%、(10.86±0.87)%,SOD活性分别为(235.43±5.94)、(115.38±3.79)、(162.39±3.92)U·mg^(-1),MDA含量分别为(1.27±0.28)、(3.64±0.53)、(2.33±0.57)nmol·mg^(-1),Scr分别为(63.26±5.21)、(287.64±10.32)、(106.47±6.29)μmol·L^(-1),BUN分别为(7.46±1.26)、(13.65±1.04)、(9.65±1.35)mmol·L^(-1);与A组比较,B组中Bax、caspase-3 mRNA表达水平明显增高,Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。和B组比较,C组中Bcl-2表达水平增高和Bax、caspase-3表达减低(P<0.05)。结论 GYY4137可减轻氧化应激水平和抑制凋亡,从而在肾脏组织IRI过程中发挥保护作用。

GYY4137通过提高自噬水平和降低氧化应激来保护老年雌性大鼠骨量流失

目的观察GYY4137对老年大鼠骨量影响以及对氧化应激水平和自噬水平的影响。方法10只年轻大鼠和20只老年雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,对照组(Con,10只年轻大鼠)、模型组(Mod,10只老年大鼠)和治疗组(Tre,10只老年大鼠),每组10只。在实验过程中,治疗组接受GYY4137治疗。治疗12周后,检测血清氧化应激指标水平。治疗12周后使用影像学和组织学评估股骨骨量改变以及蛋白印迹(WB)检测自噬信号通路关键蛋白的改变。结果治疗12周后,与Mod组相比,Tre组大鼠血清MDA和ROS水平明显降低,GSH和SOD水平明显升高,组间差异有统计学意义(P<0.05);和Mod组相比,Micro-CT和组织学评估显示治疗组的骨小梁数量较多,具有较高的骨密度(BMD)、骨体积/总体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)及骨小梁数目(Tb.N),和较低的骨小梁分离度(Tb.Sp),差异比较有统计学意义(P均<0.05)。WB检测结果显示H2S治疗后Atg 5,LC3和Beclin1表达明显高于对照组(P<0.05);而p62显著低于对照组(P<0.05)。结论GYY4137可以通过提高老年大鼠自噬水平和降低氧化应激来提高老年大鼠骨量和骨密度。

GYY4137对大鼠精索静脉曲张附睾的影响及其机制

目的:探讨GYY4137对精索静脉曲张(VC)大鼠附睾损伤的影响及其机制。方法:将60只Wistar大鼠随机分为4组:假手术组、假手术+GYY4137组、VC组、VC+GYY4137组。建立大鼠VC模型,取附睾组织HE染色,观察附睾组织病理变化;检测附睾组织内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western Blot法检测IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平;Real-time PCR法检测IL-1β、IL-6及TNF-αmRNA表达水平。结果:与假手术组相比,VC组HE染色显示附睾结构紊乱,管腔直径减小,附睾管内异常脱落的精子聚集成团;MDA水平显著升高,SOD活性显著降低(P<0.05);Western Blot及Real-time PCR示IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白及mRNA水平显著上调(P<0.05)。与VC组相比,GYY4137治疗组HE染色显示附睾损伤明显改善;MDA水平显著降低,SOD活性显著升高(P<0.05);Western Blot及Real-time PCR示IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白及mRNA水平显著下调(P<0.05)。结论:VC大鼠附睾组织损伤、氧化应激及炎症反应水平显著增加,而GYY4137能通过下调MDA水平,增加SOD活性,下调IL-1β、IL-6及TNF-α水平,减轻VC大鼠附睾氧化应激及炎症反应,减轻附睾组织损伤。

GYY4137对大鼠精索静脉曲张生精功能损伤的保护作用

目的观察GYY4137对大鼠精索静脉曲张(VC)生精功能损伤的保护作用。方法选取健康成年雄性SD大鼠32只购自湖北省疾病预防控制中心,随机分为4组:假手术组、假手术+GYY4137组、VC组及VC+GYY4137组。假手术组、假手术+GYY4137组仅分离而不结扎左肾静脉,VC组与VC+GYY4137组结扎左肾静脉制备VC模型,VC+GYY4137组、假手术+GYY4137组术后每日腹腔注射GYY4137(10 mg/kg)。采用苏木精-伊红(HE)染色观察睾丸组织病理改变;测定睾丸组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数;免疫组织化学及蛋白质印迹法(Western blot)检测睾丸组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达。两组间比较采用t检验。结果VC组可见各级生精细胞排列紊乱且广泛脱落,VC+GYY4137组可见生精细胞排列轻度紊乱,少数腔内见脱落的生精细胞。与假手术组[(1.86±0.23)nmol/g蛋白]和假手术+GYY4137组[(1.83±0.22)nmol/g蛋白]比较,VC组[(4.33±0.37)nmol/g蛋白]中MDA含量明显增加(t=9.820、10.059,P<0.05);VC+GYY4137组[(2.38±0.27)nmol/g蛋白]与VC组比较,MDA含量显著下降(t=-7.374,P<0.05)。VC组的SOD活性[(0.23±0.04)U/mg蛋白]与假手术组[(0.81±0.06)U/mg蛋白]和假手术+GYY4137组[(0.82±0.07)U/mg蛋白]比较明显降低(t=-9.757、-9.926,P<0.05);VC组经GYY4137处理后SOD活性增加[(0.62±0.06)U/mg蛋白](t=9.368,P<0.05)。TUNEL结果显示假手术组及假手术+GYY4137组[(3.89±0.45)%、(3.92±0.51)%]可见较少的睾丸生精细胞凋亡,VC组凋亡细胞明显增加[(17.26±0.98)%,P<0.05];与VC组比较,VC+GYY4137组生精细胞凋亡明显减少[(8.24±0.65)%,P<0.05]。免疫组织化学及Western blot结果显示Caspase-3和bax表达水平在VC组(0.41±0.04、0.59±0.06)中的表达明显高于假手术组(0.11±0.02、0.19±0.03,t=9.650、9.097,P<0.05)和假手术+GYY4137组(0.12±0.02、0.20±0.03,t=9.327、8.870,P<0.05);与VC组比较,VC+GYY4137组(0.21±0.03、0.34±0.04)中Caspase-3和bax表达水平下降(t=-6.928、-6.005,P<0.05)。结论GYY4137可减轻氧化应激水平和抑制凋亡,从而对VC睾丸生精功能发挥保护作用。

经腹腔及阴囊途径注射GYY4137对大鼠睾丸缺血再灌注损伤保护作用的比较

目的比较腹腔内与阴囊内注射GYY4137对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的治疗作用.方法选取健康成年雄性SD大鼠40只随机分为4组,每组10只,对照组(A组)、睾丸缺血再灌注损伤组(B组)、睾丸缺血再灌注损伤+GYY4137腹腔给药组(C组)、睾丸缺血再灌注损伤+GYY4137阴囊给药组(D组).A组为假手术组,B、C、D组大鼠建立单侧睾丸扭转复位模型,C组和D组在复位前分别腹腔内和阴囊内注射GYY4137(100μmol/kg).复位4h后取左侧睾丸待测.苏木精-伊红(HE)染色观察睾丸组织病理改变;测定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;以原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生精细胞凋亡指数;采用免疫组织化学检测B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平;蛋白质印迹法(Westem blot)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测睾丸组织中bax、Caspase-3、TNF-α和IL-1β表达水平,应用SPSS20.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示.结果B组可见生精细胞广泛脱落坏死,上皮排列紊乱.与B组比较,C、D组损伤明显改善;B组中MDA含量(5.13±0.26)与A组(1.21±0.20)比较显著上升(t=37.790,P<0.05),SOD含量(0.22±0.04)与A组(0.86±0.05)比较显著下降(t=30.710,P<0.05);与B组比较,C和D组MDA含量(3.26±0.23、2.42±0.24)明显下降(t=17.040、24.220,P<0.05),SDA含量(0.42±0.04、0.58±0.04)显著上升(t=11.450、20.070,P<0.05);B组凋亡指数(33.56±1.45)比A组(6.35±1.12)显著增高(t=46.960,P<0.05),C组和D组凋亡指数(22.58±1.67、17.86±1.65)与B组比较明显下降(t=15.700、22.600,P<0.05);免疫组化结果显示B组中bax和Caspase-3的表达水平较A组显著增加,C组和D组较之明显降低;B组TNF-α(0.774±0.042)和IL-1β(0.674±0.037)的表达水平与A组(0.147±0.022、0.136±0.018)比较明显增高(t=41.820、41.350,P<0.05),C组(0.425±0.029、0.417±0.030)和D组(0.331±0.027、0.308±0.025)较之明显降低(t=21.620、17.060、28.060、25.920,P<0.05);PCR结果显示,与B组(5.35±0.43、3.76±0.31、4.35±0.31、3.86±0.34)比较,C组(3.86±0.32、2.56±0.21、3.08±0.25、2.92±0.28)和D组(3.78±0.36、2.23±0.22、2.96±0.26、2.56±0.25)bax、Caspase-3、TNF-α和IL-1β的表达降低均有所下降(t=8.790、10.130、10.080、6.750、8.850、12.730、10.860、9.740,P<0.05),D组下降程度较显著.结论GYY4137对大鼠睾丸缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,阴囊内给药的疗效与腹腔内给药比较更佳.

GYY4137对精索静脉曲张大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响

目的探讨缓释硫化氢供体GYY4137对精索静脉曲张(varicocele,VC)大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、假手术+GYY4137组、VC组、VC+GYY4137组各15只。VC组与VC+GYY4137组结扎左肾静脉制备VC模型,假手术组、假手术+GYY4137组仅开腹不结扎左肾静脉。VC+GYY4137组、假手术+GYY4137组术后腹腔注射GYY4137(20mg/kg GYY4137溶于1mL生理盐水),1次/d,连续4周,VC组、假手术组腹腔注射等量生理盐水。药物处理4周后处死大鼠,取左侧附睾组织行病理检查,TUNEL法检测4组附睾上皮细胞凋亡指数(apoptotic index,AI),免疫组织化学法检测附睾上皮细胞细胞色素C(cytochrome C,CytC)、caspase-3阳性表达率,Western blot法检测附睾组织CytC、caspase-3蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测附睾组织CytC mRNA、caspase-3mRNA相对表达量。结果药物处理4周,假手术组、假手术+GYY4137组附睾结构正常、上皮细胞排列整齐,VC组附睾组织结构萎缩、附睾管腔结构破坏、间质水肿,VC+GYY4137组附睾结构破坏、间质水肿程度较VC组轻;药物处理4周,VC组、VC+GYY4137组附睾上皮细胞AI[(23.18±2.09)%、(12.73±1.14)%]、CytC阳性表达率[(25.24±1.99)%、(13.88±1.26)%]及caspase-3阳性表达率[(28.20±2.11)%、(17.33±1.28)%]高于假手术组[(5.46±0.46)%、(5.37±0.77)%、(4.52±0.63)%]、假手术+GYY4137组[(5.86±0.55)%、(5.53±0.52)%、(4.93±0.65)%](P<0.05),VC组高于VC+GYY4137组(P<0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P>0.05);VC组、VC+GYY4137组附睾组织CytC蛋白相对表达量(0.38±0.02、0.27±0.01)、CytC mRNA相对表达量(3.64±0.41、1.55±0.14)、caspase-3蛋白相对表达量(0.27±0.02、0.22±0.01)、caspase-3mRNA相对表达量(4.09±0.36、2.27±0.32)均高于假手术组(CytC蛋白:0.11±0.03;CytC mRNA:1.01±0.04;caspase-3蛋白:0.10±0.01;caspase-3mRNA:1.03±0.15)、假手术+GYY4137组(CytC蛋白:0.12±0.01;CytC mRNA:1.00±0.10;caspase-3蛋白:0.09±0.01;caspase-3mRNA:1.09±0.18)(P<0.05),且VC组高于VC+GYY4137组(P<0.05),假手术组与假手术+GYY4137组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GYY4137通过下调VC大鼠附睾组织CytC及caspase-3表达,抑制附睾上皮细胞凋亡,减轻附睾组织损伤。

硫化氢通过缺氧诱导因子1α促进张应力下骨髓间充质细胞的成骨

背景:有研究表明,硫化氢信号能够促进牵张成骨,而具体机制尚不清楚。目的:观察硫化氢气体信号在促进张应力下大鼠骨髓间充质细胞成骨分化过程中与缺氧诱导因子1α的关系。方法:应用四点弯曲细胞加力装置系统,对体外分离培养的大鼠骨髓间充质细胞施加2 000μstrain的单一周期张应力,同时通过使用工具药物改变加力单元中硫化氢及缺氧诱导因子1α的含量水平,加力后检测成骨标志物的变化。结果与结论:(1)细胞成骨:外源性硫化氢信号能够促进张应力下大鼠骨髓间充质细胞成骨,而抑制加力单元缺氧诱导因子1α的表达则会减弱硫化氢信号的促进成骨作用;(2)结果说明:硫化氢信号系统可能通过缺氧诱导因子1α促进张应力下大鼠大鼠骨髓间充质细胞成骨作用。