二烯丙基二硫通过磷酸化Chk1负调控Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路阻滞白血病K562细胞G_(2)/M期

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其分子机制。方法:采用CCK-8、细胞计数及流式细胞术观察DADS对K562细胞增殖与周期阻滞效应。Western Blot检测DADS对K562细胞PCNA、Chk1/2以及下游分子Cdc25C、CyclinB1与CDK1表达的影响。结果:CCK-8检测显示,15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L DADS处理后,呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖,抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%、81.05%(P<0.05)。对照组与Tween80组无抑制作用(P>0.05)。细胞计数结果显示,30μmol/L、60μmol/L与120μmol/L DADS处理K562细胞后,群体倍增时间分别为22.71±0.29、36.69±0.93与73.02±0.87呈浓度依赖性增加(P<0.05),而Tween80组与对照组无明显差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L与120μmol/L DADS作用K562细胞24 h与48 h后,G_(2)/M期百分率分别增加到17.6%与28.5%和18.6%与34.4%,较对照组有显著性差异(P<0.05)。60μmol/L DADS作用K562细胞1 h、2 h、4 h、8 h和24 h后,PCNA表达呈时间依赖性表达下调(P<0.05)。p-Chk1表达呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1、Chk2与p-Chk2表达无明显差异(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但是,14-3-3蛋白无明显改变(P>0.05)。结论:DADS可磷酸化Chk1通过Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路抑制K562细胞增殖与阻滞G_(2)/M期。

中药黄芪饮片中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的UPLC-MS/MS分析测定

目的:通过超高效液相色谱-串联质谱法建立对中药黄芪饮片中黄曲霉毒素的含量的测定,了解中药黄芪饮片的质量安全状况。方法:样品经乙腈-水(体积比70:30)提取、离心后得到的上清液用磷酸盐缓冲溶液稀释后通过免疫亲和柱净化和富集,洗脱液过滤后,经优化流动相后反相色谱分离,串联质谱检测,内标法定量。结果:采用5mmoL/L甲酸铵溶液(含0.1%甲酸)和乙腈:甲醇=1:1(含0.1%甲酸)作流动相时,黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的标准曲线相关系数R^(2)分别是0.9986、0.9996、0.9984、0.9970;其加标回收率分别为105%、95.4%、107%、98.8%;RSD在2.46%~4.90%;其方法检出限为0.06ug/kg,定量限为0.20ug/kg。结论:超高效液相色谱-串联质谱法简单快速,灵敏度高,精密度高,可满足大批量中药黄芪饮片中黄曲霉毒素含量测定的需要以及对其它中药材的检测参考方法;利用此法对50份中药黄芪饮片中黄曲霉毒素B、B_(2)、G_(1)、G_(2)进行抽检,其B_(1)、B_(2)检出率分别为4%、4%,G_(1)、G_(2)未检出。

棕矢车菊素诱导人宫颈癌Hela细胞G_(2)/M期停滞的机制研究

目的:研究棕矢车菊素对宫颈癌(cervical carcinoma,CC)细胞Hela的增殖抑制和周期阻滞能力,探索棕矢车菊素是否具有宫颈癌治疗药物的潜力。方法:MTT比色法检测细胞活力;羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl amino ester,CFSE)法检测细胞增殖水平变化;碘化丙啶(propidium,PI)单染检测细胞周期;免疫印迹法(western blot,WB)检测细胞蛋白表达水平。采用裸鼠成瘤检测棕矢车菊素体外抑制肿瘤效果。结果:棕矢车菊素可以显著抑制Hela细胞活力水平,且具有时间和浓度依赖性;棕矢车菊素抑制Hela细胞增殖,且100μmol/L棕矢车菊素可显著诱导细胞发生G_(2)/M周期阻滞。分子机制上,研究证明了棕矢车菊素可以通过促进细胞周期检验点激酶(checkpoint kinase 2,CHK2)激活,抑制细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin 25 homolog C,CDC25C)活力,从而提高无活性的pCDC2水平。棕矢车菊素同时降低了Cyclin B1表达。因此,棕矢车菊素通过抑制G_(2)/M期调控蛋白Cyclin B1/CDC2复合物活性来诱导细胞发生G_(2)/M期阻滞。同时,体外裸鼠成瘤,棕矢车菊素灌胃4周后,小鼠肿瘤体积显著减小。结论:在Hela细胞上,棕矢车菊素具有抑制细胞增殖和诱导G_(2)/M期阻滞的作用,证明了棕矢车菊素具有抗宫颈癌细胞的治疗潜力。

葫芦素B诱导G_2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡研究

目的探讨葫芦素B对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞,MTT法检测不同浓度葫芦素B对DU145细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;Hoechst 33258核染色观察细胞核的形态变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测葫芦素B对DU145细胞周期调节蛋白Cyclin B1表达的影响。结果葫芦素B对DU145细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;葫芦素B使DU145细胞发生G_2/M期阻滞;可见细胞核染色质浓缩、核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导DU145细胞凋亡,呈剂量依赖性;葫芦素B使DU145细胞Cyclin B1蛋白表达降低。结论葫芦素B通过诱导G_2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡。

黄连素通过诱导G_(0)/G_(1)或G_(2)/M期阻滞抑制前列腺癌细胞株PC-3的增殖作用分析

目的观察黄连素在体外对前列腺癌细胞株PC-3的抑制及凋亡的诱导,并进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度黄连素对前列腺癌细胞株PC-3的增殖抑制作用,采用流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡,通过PI染色法结合流式细胞仪检测黄连素对前列腺癌细胞株PC-3细胞周期的影响;蛋白免疫印迹(WB)方法检测黄连素作用于前列腺癌细胞株PC-3后细胞中脂肪酸合成酶(FAS)蛋白的表达。结果黄连素组前列腺癌PC-3细胞株增殖抑制率及凋亡率均高于未加入黄连素组,且随着黄连素浓度的上升,前列腺癌PC-3细胞株增殖抑制率及凋亡率均逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。黄连素孵育24 h组、黄连素孵育48 h组、黄连素孵育72 h组的前列腺癌PC-3细胞株在G_(0)/G_(1)期比例高于对照组,在S期与G_(2)/M期比例低于对照组,且随黄连素孵育时间增加,前列腺癌PC-3细胞株在G_(0)/G_(1)期比例明显增加,在S期与G_(2)/M期比例逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。黄连素不同孵育时间及不同浓度均对前列腺癌PC-3细胞株中FAS蛋白存在影响,且随着孵育时间的延长与浓度的增加,FAS蛋白含量均逐渐减少。结论黄连素可通过诱导细胞G_(2)/M期阻滞和抑制前列腺癌PC-3细胞株中FAS蛋白表达对前列腺癌细胞株PC-3的增殖生长及凋亡起到抑制与促进作用,且与时间、浓度呈依赖性。

跨膜Ca^（2＋）梯差通过调节膜脂流动性影响G_s激活腺苷酸环化酶

将牛脑皮层激活型Ｇ－蛋白（Ｇｓ）和腺苷酸环化酶（ＡＣ）重建于大豆磷脂脂质体，形成具有或不具有１０００倍跨膜Ｃａ２＋梯差的四种脂酶体，研究了跨膜Ｃａ２＋梯差对Ｇｓ功能的影响及其与膜脂物理状态的关系。结果表明，在具有与生理条件相似的正向跨膜Ｃａ２＋梯差的脂酶体Ａ中，ＡＣ的基础活力和Ｇｓ对ＡＣ的激活活力均最大；而跨膜Ｃａ２＋梯差与生理条件相反时（脂酶体Ｄ），ＡＣ的基础活力和Ｇｓ对ＡＣ的激活作用最小。外加Ｃａ２＋载体Ａ２３１８７消除脂酶体两侧的Ｃａ２＋梯差可导致前者（脂酶体Ａ）Ｇｓ功能降低和后者（脂酶体Ｄ）Ｇｓ功能增强，使两者Ｇｓ功能恢复到无跨膜Ｃａ２＋梯差的脂酶体水平。用荧光探针ＤＰＨ标记上述四种大豆磷脂制备的磷酶体，以时间分辨纳秒荧光技术研究在不同跨膜Ｃａ２＋梯差条件下膜脂物理状态变化。四种脂酶体的荧光各向异性测量结果表明，具有正向跨膜Ｃａ２＋梯差的脂酶体Ａ的序参数（Ｓ＝０．３２８），微粘度（η＝０．６１ｐ）和旋转相关时间（τｒ＝２．４ｎｓｅｃ）均较具有反向Ｃａ２＋梯差的脂酶体Ｄ者（Ｓ＝０．３５２，η＝０．６４ｐτｒ＝２．５ｎｓｅｃ）小，即前者的膜脂流动性较后者增加。这可能提示，一个相似于生理条件的跨膜Ｃａ２＋?

G_2/M期阻滞与细胞放射敏感性关系的研究进展

在肿瘤的临床治疗中,放射治疗的适应证宽泛,选择性大,故其在肿瘤治疗中的作用和地位日益突出。电离辐射可以引起肿瘤细胞的DNA损伤,之后通过多种机制杀灭肿瘤细胞。其中,影响肿瘤细胞的周期调控,即通过降低肿瘤细胞的G_2/M期阻滞,从而影响肿瘤细胞受损DNA的修复,引起肿瘤细胞死亡就是其治疗肿瘤的主要机制之一。

莱菔硫烷诱导急性髓系白血病KG1a和KG1细胞G_(2)/M期阻滞的作用和相关机制

目的:研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对急性髓系白血病细胞G_(2)/M期阻滞的作用和相关机制。方法:不同浓度的SFN作用KG1a和KG1细胞48 h后,流式细胞术检测细胞周期的变化,利用高通量转录组测序技术检测SFN对KG1a细胞周期相关基因表达情况的影响;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测P53、P21、CDC2、CyclinB1的mRNA表达。采用Western blot检测P53、CDC2、P-CDC2和CyclinB1的蛋白表达。结果:经SFN作用48 h后,KG1a和KG1细胞的G_(2)/M期细胞明显增多,当SFN浓度为8μmol/L时,KG1a细胞在G_(2)/M期从11.9%上升至54.0%,KG1细胞从18.5%上升至83.3%(P <0.001)。SFN作用KG1a细胞后,KEGG通路分析结果显示,差异表达基因显著富集P53信号通路。热图结果显示,P53和P21基因表达上调,CDC2基因表达下调。KG1a和KG1细胞经SFN作用后,p53和P21的mRNA水平均出现上调(P <0.05或P <0.01)。随着SFN剂量的上升,CDC2的mRNA水平呈下调趋势,当SFN为8μmol/L时,CDC2的mRNA表达水平显著低于对照组(P <0.05)。经SFN作用KG1a和KG1后,p53的蛋白水平出现上调,SFN 8和12μmol/L浓度组均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。两组细胞经SFN作用后CDC2的蛋白水平均明显下降,且呈浓度依赖趋势(r=0.9482和r=0.8977),SFN8和12μmol/L浓度组CDC2蛋白水平均明显低于对照组(P <0.05或P <0.01),P-CDC2蛋白表达水平上调。CyclinB1的蛋白和mRNA表达水平一致,变化不明显。结论:SFN可能通过激活P53信号通路,进一步抑制CDC2表达和CDC2/CyclinB1复合物的活性,诱导急性髓系白血病KG1a和KG1细胞阻滞在G_(2)/M期。

HPLC-MS/MS法测定化妆品中黄曲霉毒素G_(2)、G_(1)、B_(2)、B_(1)

建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定化妆品中黄曲霉毒素G_(2)、G_(1)、B_(2)、B_(1)的方法。化妆品经70%甲醇提取并经免疫亲和柱净化,采用C_(18)柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相体系为2.0 mmol/L乙酸铵甲醇溶液(含0.1%甲酸)和2.0 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸),流速为0.3 mL/min进行梯度洗脱,扫描方式为正离子多反应监测模式(MRM)。黄曲霉毒素G_(2)、G_(1)、B_(2)、B_(1)在一定浓度范围内线性关系均良好,相关系数不低于0.998。检出限范围为0.028~0.078 ng/g。精密度及稳定性均良好,回收率85.0%~96.2%。该方法准确、高效,为化妆品中黄曲霉毒素的测定提供了技术支持。

HPLC法测定小儿扶脾颗粒中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2含量

目的:建立高效液相色谱法测定小儿扶脾颗粒中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2的含量,并通过对31批样品检测结果的分析初步研究小儿扶脾颗粒在黄曲霉毒素污染方面的安全性,以提示企业选择安全的原料药材投料。方法:采用柱后光化学衍生HPLC法测定小儿扶脾颗粒中黄曲霉毒素的含量。采用Ecosil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(30∶10∶60),荧光检测器,激发波长为360 nm,发射波长为450 nm,流速为0.8 ml·min^(-1),柱温为30℃进样量为20μl。结果:黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2分别在9.65~48.25 pg(r=0.999 1)、2.45~12.25 pg(r=0.999 8)、10.5~52.5 pg(r=0.995 6)、2.55~12.75 pg(r=0.996 6)范围内线性关系良好;加样回收率在83.3%~95.6%之间。有14批样品检出黄曲霉毒素,其总含量为0.21×10^(-3)~0.54×10^(-3)μg·g^(-1)。结论:该方法操作简便,结果稳定可靠,可用于小儿扶脾颗粒的质量控制。

高压下G_(2)ZT晶体结构、电子结构和光学性质的第一性原理研究

基于密度泛函理论的第一性原理研究了高压下富氮含能材料(双3,4,5-三氨基-1,2,4-三唑)-5,5′-偶氮四唑(G_(2)ZT)的几何结构、电子结构和光学性质。结果表明,在考虑范德瓦尔斯色散修正和密度泛函色散修正的情况下,分子晶体结构数据与实验结果的相对误差均在3%以内。Hirshfeld表面分析结果表明,随着压强增大,分子间氢键的相互作用减弱。G_(2)ZT晶体在零压下的能带带隙为2.03 eV,是一种p型半导体。随着压强增大,带隙变窄,吸收系数可达到3.0×10^(6)cm^(−1)。研究结果为进一步分析高压下G_(2)ZT晶体的特征提供了理论参考。

启脾丸中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)含量测定及安全性评价

目的建立高效液相色谱法测定启脾丸中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的含量,并评价启脾丸中黄曲霉毒素安全性。方法样品提取后通过免疫亲和柱处理,采用HPLC-柱后衍生-FLD法对全国10个生产企业的64批启脾丸进行测定。结果启脾丸中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的平均回收率为84.09%、84.38%、83.11%、86.33%,RSD为2.5%、2.0%、2.8%、1.9%,64批启脾丸中52批检出黄曲霉毒素,检出率为81.2%,不合格率为9.4%,部分样品存在黄曲霉毒素污染的问题。结论该方法操作简便,结果稳定可靠,可为该制剂的质量安全控制提供依据。

UPLC-MS/MS测定健脾丸中的黄曲霉毒素G_(2)、G_(1)、B_(2)和B_(1)

建立了超高效液相色谱串联四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)测定健脾丸(大蜜丸和小蜜丸)中黄曲霉毒素G_(2)、G_(1)、B_(2)和B_(1)的含量的方法。样品经75%的甲醇提取和免疫亲和柱净化后,以超高效液相色谱串联四级杆质谱进行分析测定。黄曲霉毒素G_(2)、G_(1)、B_(2)和B_(1)分别在0.0304~3.040 ng/mL(r=0.9998)、0.0848~8.480(r=0.9996)、0.0344~3.440(r=0.9996)、0.0816~8.160(r=0.9996)范围内线性关系良好;加样回收率在86.6%~91.7%之间。12批样品检出黄曲霉毒素。该法灵敏、快速、准确,专属性强,可用于测定健脾丸(大蜜丸和小蜜丸)中黄曲霉毒素。

CLINICAL SIGNIFICANCE OF DETECTING SERUM ANTIBODIES TO NUCLEOPROTEIN AND GLYCOPROTEIN G_2 OF HANTAAN VIRUS IN PATIENTS WITH HEMORRHAGIC FEVER WITH RENAL SYNDROME

Antibody blocking enzyme linked immunosorbent assays, respectively detecting antibodies to Hantaan virus nucleoprotein (NPAb) and glycoprotein GZ (G,Ab), were developed using monoclonal antibody L133, L13r3, LV48A and LVZB28B NPAb and GZAb in 291 serum samples from 65 patientswith kemorrkagic fever with renal syudrome (HFRS) were detfrmlned by these methods. The positive rates or NPAb were 90N on day 2-3 and 100 % on day 8-9 arter onset of disease, respectively.NPAb titers Increased during fever period and reached Peak levels during kypotensive and oliguric periods of HFRS. It was suggested that NPAb might be an important component Involved in the immunopathogenlc lin'alrmeut of HFRS and the detection of NPAb might be useful for the early diagnosis or HFRS. The I,osltlve rates and titers of GZAh were very low during the rirst three periods,namely rever, hypoteuslve and ollgurlc periods, and reached high levels during the convalescent period. GRAb titers were negatively related to the I,rotelnurla levels during the course of HFRS. It wasIndicated that GZAb might be the main component or neutralizing autlhodles to Hantaan virus Infection and the efrlclent production or GZAb was a good marker ror predicting the recovery and betterprognosis of HFRS.

G_β,G_(βγ)与腺苷酸环化酶Ⅱ在酵母双杂交和三杂交系统中的相互作用

目的 探讨 G蛋白β和γ亚基在 G_(βγ)与效应器相互作用中的地位 ,特别是γ亚基在此相互关系中的作用。方法 利用酵母双杂交和自行构建的酵母三杂交系统分别研究 G_(β 1)和 G_(β 1)γ 2与腺苷酸环化酶Ⅱ (ACⅡ )的相互作用。 结果 发现酵母三杂交系统中 AD-β 1，γ 2和 BD-ACⅡ间的相互作用明显强于双杂交系统中 AD-β 1和 BD-ACⅡ的相互作用。对 BD-ACⅡ Q和 AD-β 1在酵母双杂交系统和三杂交系统中的表达进行免疫印迹杂交分析 ,发现其表达水平与β-半乳糖苷酶活力大小无关 ,即酵母三杂交系统和双杂交系统中相互作用的显著差别不是由 BD-ACⅡ Q和 AD-β 1蛋白表达水平的差异所造成。结论 β亚基对维持 G_(βγ)与 ACⅡ的相互作用十分重要 ,而γ亚基的存在显著增强了β亚基与 ACⅡ的相互作用 ,对维持 G_(βγ)与 ACⅡ的高亲和性很重要。

Chk1在K562/A02细胞耐药中的作用机制

目的研究检测点激酶1(Chk1)对K562/A02细胞周期及凋亡的影响,探讨Chk1在肿瘤细胞耐药中的作用机制。方法以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞株K562/A02为研究对象,与阿霉素共同孵育后,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白质的表达及磷酸化水平,MTT法检测药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果Chk1 mRNA及蛋白表达水平在两种细胞间无显著差异(均P>0.05);Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为(0.79±0.56),K562细胞为(0.27±1.47),其差异有显著性意义(P<0.05)。阿霉素作用6h后,致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞的(36.99±1.28)%(P<0.05),K562/A02细胞凋亡率为(6.25±0.81)%,显著低于K562细胞的(66.47±1.26)%(P<0.05)。阿霉素对K562/A02和K562细胞的IC50值分别为(109.65±0.26)mg/L、(1.08±0.74)mg/L,耐药倍数为102倍。结论由于G2/M期阻滞是导致白血病细胞耐药的机制之一,Chk1磷酸化水平与G2/M期阻滞和细胞凋亡密切相关,提示Chk1的活化状态可能参与K562/A02细胞的耐药机制。

Stomatal response of Pinus sylvestriformis to elevated CO2 concentrations during the four years of exposure

Four-year-old Pinus sylvestriformis were exposed for four growing seasons in open top chambers to ambient CO2 concentration (approx. 350 μmol·mol-1) and high CO2 concentrations (500 and 700 μmol·mol-1) at Research Station of Changbai Mountain Forest Ecosystems, Chinese Academy of Sciences at Antu Town, Jilin Province, China (42oN, 128oE). Stomatal response to elevated CO2 concentrations was examined by stomatal conductance (gs), ratio of intercellular to ambient CO2 concentration (ci/ca) and stomatal number. Reciprocal transfer experiments of stomatal conductance showed that stomatal conductance in high-[CO2]-grown plants increased in comparison with ambient-[CO2]-grown plants when measured at their respective growth CO2 concentration and at the same measurement CO2 concentration (except a reduction in 700 μmol·mol-1 CO2 grown plants compared with plants on unchambered field when measured at growth CO2 concentration and 350 μmol·mol-1CO2). High-[CO2]-grown plants exhibited lower ci/ca ratios than ambient-[CO2]-grown plants when measured at their respective growth CO2 concentration. However, ci/ca ratios increased for plants grown in high CO2 concentrations compared with control plants when measured at the same CO2 concentration. There was no significant difference in stomatal number per unit long needle between elevated and ambient CO2. However, elevated CO2 concentrations reduced the total stomatal number of whole needle by the decline of stomatal line and changed the allocation pattern of stomata between upper and lower surface of needle.

青蒿琥酯通过调控GADD45A、NACC1的表达抑制肝癌细胞的作用

目的阐明青蒿琥酯(artesunate,ART)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病理进程中对肿瘤细胞的作用及潜在的机制。方法用含不同浓度ART的培养基处理两种HCC细胞系MHCC-97H、HCC-LM3,以0 mg·L-1 ART处理的细胞作为对照组,对比ART对HCC的作用。采用MTT和克隆形成实验测定ART对HCC细胞生长能力的影响;划痕实验和Transwell实验分别检测ART对HCC细胞迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术验证ART对HCC细胞凋亡和细胞周期变化的影响;通过转录组测序分析以及qRT-PCR验证关键基因的表达情况探究ART在HCC细胞中的可能作用机制。结果与对照组相比,ART处理后的肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率明显上升,且G_(2)/M期细胞比例明显增高,提示肿瘤细胞被阻滞于该期。使用RNA测序数据进行转录组学分析,确定生长停滞与DNA损伤诱导蛋白45A(growth arrest and DNA damage inducible alpha,GADD45A)是ART的潜在作用靶点,并且提示,ART可通过上调GADD45A的表达进而诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。此外,生信分析结果提示,GADD45A与其上游转录因子伏隔核相关蛋白1(nucleus accumbens associated 1,NACC1)有蛋白互作现象,并且经ART处理后,GADD45A与NACC1的mRNA水平和蛋白水平均发生明显变化。结论ART可能通过影响GADD45A及其潜在上游NACC1基因的表达抑制HCC的发生发展。通过探究ART作用于HCC的功能影响及发生机制,为临床治疗肝癌提供新药物、新方向和新思路。

GTSE1在肝癌中的表达及其对预后和免疫浸润的影响

目的研究G_(2)/S期应答相关蛋白1(G_(2) and S phase-expressed protein 1,GTSE1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达、免疫学作用和预后分析,及其潜在作用机制。方法使用公共数据库癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)提供的数据,用Kaplan-Meier、肿瘤免疫评估资源(Tumor Immune Estimation Resource,TIMER)数据库和基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库进行GTSE1基因表达、免疫学作用及预后分析,通过免疫组化实验验证GTSE1在临床样本中的表达,应用R软件对GTSE1相关差异基因进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果GTSE1在人类癌组织中显著高表达,且与肝细胞癌预后不良显著相关(P<0.05);GTSE1基因表达与HCC中浸润性免疫细胞的丰度显著相关(P<0.001)。GTSE1相关的差异表达基因主要富集于核分裂、细胞器裂变、离子通道活性等基因模块;其参与的信号通路主要包括神经活性配体-受体的相互作用、细胞周期等。结论GTSE1在HCC中的表达显著上调并与患者预后不良显著相关,且在免疫细胞浸润中发挥重要作用,可作为HCC的预后标志物和免疫治疗靶点。

HPLC柱后光化学衍生荧光检测法检测3种含土鳖虫中成药的黄曲霉毒素

目的:考察免疫亲和净化HPLC柱后光化学衍生荧光检测法在中成药中黄曲霉毒素测定的可行性,并对其污染情况进行筛查,为中成药黄曲霉毒素污染监管提供依据。方法:采用免疫亲和净化HPLC柱后光化学衍生荧光检测法对含有土鳖虫的中成药中黄曲霉毒素的含量进行测定。样品经有机溶剂提取、免疫亲和柱净化后,利用高效液相色谱-光化学衍生-荧光检测器进行分析测定。对3种含土鳖虫的中成药,考察加样回收率,测定黄曲霉毒素残留量,并对测定结果进行分析。采用高效液相色谱-串联质谱法对部分超出限度批次进行结果确认。结果:3种中成药中黄曲霉毒素B_(1)、B_(2)、G_(1)、G_(2)的回收率均在80%~113%。3种24批中成药中,21批检出黄曲霉毒素,检出率为87.5%,部分批次黄曲霉毒素含量明显偏高。结论:免疫亲和净化HPLC柱后光衍生荧光检测法结果准确,重现性好,可用于中成药中黄曲霉毒素的测定。含土鳖虫药材的中成药,个别品种黄曲霉毒素污染情况较为严重,存在安全隐患,应引起生产企业的重视,保障用药安全。