葫芦素B诱导G_2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡研究

目的探讨葫芦素B对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞,MTT法检测不同浓度葫芦素B对DU145细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;Hoechst 33258核染色观察细胞核的形态变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测葫芦素B对DU145细胞周期调节蛋白Cyclin B1表达的影响。结果葫芦素B对DU145细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;葫芦素B使DU145细胞发生G_2/M期阻滞;可见细胞核染色质浓缩、核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导DU145细胞凋亡,呈剂量依赖性;葫芦素B使DU145细胞Cyclin B1蛋白表达降低。结论葫芦素B通过诱导G_2/M期阻滞抑制人前列腺癌DU145细胞增殖并诱导细胞凋亡。

G_2/M期阻滞与细胞放射敏感性关系的研究进展

在肿瘤的临床治疗中,放射治疗的适应证宽泛,选择性大,故其在肿瘤治疗中的作用和地位日益突出。电离辐射可以引起肿瘤细胞的DNA损伤,之后通过多种机制杀灭肿瘤细胞。其中,影响肿瘤细胞的周期调控,即通过降低肿瘤细胞的G_2/M期阻滞,从而影响肿瘤细胞受损DNA的修复,引起肿瘤细胞死亡就是其治疗肿瘤的主要机制之一。

EM-3通过Stat3通路诱导鼻咽癌细胞凋亡和G_2/M期阻滞并降低SP细胞比例

目的:研究白花地胆草(Elephantopus mollis H.B.K)的乙醇提取物EM-3抗肿瘤作用分子机制。方法:MTT、克隆形成抑制和细胞划痕实验检测EM-3对鼻咽癌细胞增殖、迁移能力的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;PI单染检测细胞周期;超速流式分选细胞仪检测鼻咽癌CNE2-S18肿瘤干细胞样SP细胞(side population cell)比例;Western blotting检测细胞凋亡、周期、侵袭迁移及肿瘤干细胞相关蛋白表达变化。结果:MTT、克隆形成抑制和细胞划痕实验结果表明,EM-3可以显著抑制鼻咽癌细胞的增殖,随着药物浓度的增大,细胞克隆数逐渐减少,体积逐渐变小,而且能够显著抑制鼻咽癌细胞的迁移;流式细胞术结果表明随着药物浓度的增加,凋亡率逐渐增加,并且G_2/M期细胞比例逐渐增加;超速流式分选细胞仪结果表明,EM-3可以显著降低CNE2-S18肿瘤干细胞样SP细胞的比例;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,x IAP、Bcl-2、Cyclin D1、MMP2(药物高浓度)、MMP9、p-Met、Oct4(药物高浓度)及Sox2蛋白表达减少,而Cyclin B1、Bax蛋白表达增多,并伴随Caspase-9、Caspase-3活化及多聚ADP核糖聚合酶PARP酶切失活。结论:EM-3通过抑制Stat3通路诱导鼻咽癌细胞发生凋亡,并诱导G_2/M期阻滞。此外,EM-3经MMPs途径抑制鼻咽癌细胞迁移,同时可以有效降低CNE2-S18肿瘤干细胞样SP细胞干性。

Chk1在K562/A02细胞耐药中的作用机制

目的研究检测点激酶1(Chk1)对K562/A02细胞周期及凋亡的影响,探讨Chk1在肿瘤细胞耐药中的作用机制。方法以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞株K562/A02为研究对象,与阿霉素共同孵育后,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白质的表达及磷酸化水平,MTT法检测药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果Chk1 mRNA及蛋白表达水平在两种细胞间无显著差异(均P>0.05);Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为(0.79±0.56),K562细胞为(0.27±1.47),其差异有显著性意义(P<0.05)。阿霉素作用6h后,致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞的(36.99±1.28)%(P<0.05),K562/A02细胞凋亡率为(6.25±0.81)%,显著低于K562细胞的(66.47±1.26)%(P<0.05)。阿霉素对K562/A02和K562细胞的IC50值分别为(109.65±0.26)mg/L、(1.08±0.74)mg/L,耐药倍数为102倍。结论由于G2/M期阻滞是导致白血病细胞耐药的机制之一,Chk1磷酸化水平与G2/M期阻滞和细胞凋亡密切相关,提示Chk1的活化状态可能参与K562/A02细胞的耐药机制。