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miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖 被引量:3
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作者 王鹏 刘子嶷 +1 位作者 刘玉芳 储明星 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第23期4757-4771,共15页
【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。... 【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。【目的】通过研究miR-535靶向GAB2(GRB2 associated binding protein 2)及其相关信号通路PI3K/AKT对山羊颗粒细胞增殖的影响,进一步探讨其分子生物学调控机制。【方法】在本研究中,选择具有两胎以上产羔记录的高、低产云上黑山羊各3只,同期发情处理后采集卵泡期卵巢组织,收集原代颗粒细胞。使用荧光定量PCR(reverse transcription-quantitativePCR,RT-qPCR)检测miR-535和GAB2在云上黑山羊高、低产卵巢组织中的表达量。构建GAB2的过表达/干扰载体,使用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、CCK8、EdU和细胞凋亡检测候选基因GAB2对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响。使用miRDB和miRanda软件预测miR-535和GAB2的靶向关系,构建GAB2的野生型和突变型载体,利用双荧光素酶活性检验检测miR-535和GAB2的靶向关系。构建过表达/干扰miR-535载体,探究其颗粒细胞增殖及下游基因功能的影响。【结果】RT-qPCR结果显示,GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著低于低产个体,miR-535的表达则相反(P<0.05);随后,RT-qPCR和Westernblot结果表明,在颗粒细胞中过表达GAB2后,CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高(P<0.05),BAX的表达量显著降低(P<0.05),抑制其表达则与之相反;EdU和CCK8检测显示,GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05),抑制其表达后则相反;双荧光素酶报告试验表明,miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示,在颗粒细胞中过表达miR-535后,GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低(P<0.05),BAX的表达量显著升高(P<0.05),抑制其表达后则与之相反;EdU和CCK8检测显示,miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反;细胞凋亡试验表明,miR-535过表达后促进颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后,发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高(P<0.05)。【结论】miR-535通过抑制GAB2的表达,抑制了山羊颗粒细胞的增殖,为进一步探究miR-535调控山羊颗粒细胞的生物学功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 山羊产羔数 卵巢颗粒细胞增殖 gab2基因 miR-535 P13K/AKT信号通路
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基于生物信息学分析和预测人骨肉瘤中Gab2靶向作用的miRNA分子
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作者 张蕊 吴启洋 +2 位作者 刘纪明 郭晓仪 吴龙火 《赣南医学院学报》 2019年第5期433-439,445,共8页
目的:通过生物信息学软件分析和预测在人骨肉瘤中能够靶向结合Gab2的miRNA。方法:首先通过生物信息学软件mir Walk 2. 0预测可以靶向结合Gab2的miRNA,然后用miRanda得到Gab2-miRNA的热力学稳定性评分和序列保守性评分。并通过人骨肉瘤mi... 目的:通过生物信息学软件分析和预测在人骨肉瘤中能够靶向结合Gab2的miRNA。方法:首先通过生物信息学软件mir Walk 2. 0预测可以靶向结合Gab2的miRNA,然后用miRanda得到Gab2-miRNA的热力学稳定性评分和序列保守性评分。并通过人骨肉瘤miRNA芯片GSE70367得到在人骨肉瘤中差异表达的miRNA。在生物信息学软件打分较高的miRNA中选出差异表达的miRNA,从而选出人骨肉瘤中能与Gab2结合的特异性最强,稳定性最高的miRNA。结果:mir Walk 2. 0预测有22个miRNA可与Gab2靶向结合;其中,miR-1236-3p、miR-218-5p与Gab2结合的稳定性和特异性最好;在人骨肉瘤中差异表达的miRNA有184个,而miR-218-5p的表达也存在差异性,并且表达下调。结论:在人骨肉瘤中miR-218-5p可能靶向结合于Gab2,Gab2是miR-218-5p的靶基因。 展开更多
关键词 人骨肉瘤 生物信息学 gab2 MIRNAS 靶基因
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Gab2基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响 被引量:5
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作者 范亚峰 崔晓燕 +2 位作者 虞中平 李海燕 张开明 《肿瘤学杂志》 CAS 2019年第3期213-217,共5页
[目的]探讨Gab2结合蛋白2 (Gab2)基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt信号/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。[方法]以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,通过Western bloting检测肺癌H322、A549、PC9、H1299、SPC-A-1细胞中G... [目的]探讨Gab2结合蛋白2 (Gab2)基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt信号/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。[方法]以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,通过Western bloting检测肺癌H322、A549、PC9、H1299、SPC-A-1细胞中Gab2的蛋白表达;转染48h后Western bloting检测Gab2、Cleaved Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(cyclin D1)、c-myc蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。[结果]与MRC5细胞比较,Gab2在肺癌细胞中的表达显著性升高(P<0.05)。与对照组比较,Gab2-siRNA组Gab2的蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,Cleaved caspase3和Bax蛋白上调表达,Bcl-2、β-catenin、cyclin D1、c-myc蛋白表下调表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。[结论]抑制肺癌细胞Gab2表达能诱导细胞凋亡,机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。 展开更多
关键词 gab2基因 肺癌 凋亡 WNT/Β-CATENIN信号通路
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