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miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖 被引量:3
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作者 王鹏 刘子嶷 +1 位作者 刘玉芳 储明星 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第23期4757-4771,共15页
【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。... 【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。【目的】通过研究miR-535靶向GAB2(GRB2 associated binding protein 2)及其相关信号通路PI3K/AKT对山羊颗粒细胞增殖的影响,进一步探讨其分子生物学调控机制。【方法】在本研究中,选择具有两胎以上产羔记录的高、低产云上黑山羊各3只,同期发情处理后采集卵泡期卵巢组织,收集原代颗粒细胞。使用荧光定量PCR(reverse transcription-quantitativePCR,RT-qPCR)检测miR-535和GAB2在云上黑山羊高、低产卵巢组织中的表达量。构建GAB2的过表达/干扰载体,使用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、CCK8、EdU和细胞凋亡检测候选基因GAB2对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响。使用miRDB和miRanda软件预测miR-535和GAB2的靶向关系,构建GAB2的野生型和突变型载体,利用双荧光素酶活性检验检测miR-535和GAB2的靶向关系。构建过表达/干扰miR-535载体,探究其颗粒细胞增殖及下游基因功能的影响。【结果】RT-qPCR结果显示,GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著低于低产个体,miR-535的表达则相反(P<0.05);随后,RT-qPCR和Westernblot结果表明,在颗粒细胞中过表达GAB2后,CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高(P<0.05),BAX的表达量显著降低(P<0.05),抑制其表达则与之相反;EdU和CCK8检测显示,GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05),抑制其表达后则相反;双荧光素酶报告试验表明,miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示,在颗粒细胞中过表达miR-535后,GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低(P<0.05),BAX的表达量显著升高(P<0.05),抑制其表达后则与之相反;EdU和CCK8检测显示,miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反;细胞凋亡试验表明,miR-535过表达后促进颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后,发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高(P<0.05)。【结论】miR-535通过抑制GAB2的表达,抑制了山羊颗粒细胞的增殖,为进一步探究miR-535调控山羊颗粒细胞的生物学功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 山羊产羔数 卵巢颗粒细胞增殖 gab2基因 miR-535 P13K/AKT信号通路
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Gab2基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响 被引量:5
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作者 范亚峰 崔晓燕 +2 位作者 虞中平 李海燕 张开明 《肿瘤学杂志》 CAS 2019年第3期213-217,共5页
[目的]探讨Gab2结合蛋白2 (Gab2)基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt信号/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。[方法]以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,通过Western bloting检测肺癌H322、A549、PC9、H1299、SPC-A-1细胞中G... [目的]探讨Gab2结合蛋白2 (Gab2)基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt信号/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。[方法]以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,通过Western bloting检测肺癌H322、A549、PC9、H1299、SPC-A-1细胞中Gab2的蛋白表达;转染48h后Western bloting检测Gab2、Cleaved Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(cyclin D1)、c-myc蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。[结果]与MRC5细胞比较,Gab2在肺癌细胞中的表达显著性升高(P<0.05)。与对照组比较,Gab2-siRNA组Gab2的蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,Cleaved caspase3和Bax蛋白上调表达,Bcl-2、β-catenin、cyclin D1、c-myc蛋白表下调表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。[结论]抑制肺癌细胞Gab2表达能诱导细胞凋亡,机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。 展开更多
关键词 gab2基因 肺癌 凋亡 WNT/Β-CATENIN信号通路
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The Gab2 in signal transduction and its potential role in the pathogenesis of Alzheimer’s disease
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作者 潘小玲 任汝静 +2 位作者 王刚 汤荟冬 陈生弟 《Neuroscience Bulletin》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期241-246,共6页
The growth factor receptor-bound protein 2 (Grb2) -associated binder (Gab) proteins are intracellular scaffolding/ docking molecules,and participate in multiple signaling pathways,usually acting as the downstream ... The growth factor receptor-bound protein 2 (Grb2) -associated binder (Gab) proteins are intracellular scaffolding/ docking molecules,and participate in multiple signaling pathways,usually acting as the downstream effector of protein-tyrosine kinases (PTKs) -triggered signal transduction pathway.When phosphorylated by PTKs,Gab proteins can recruit several signaling molecules (p85,SHP2,and Crk) ,and subsequently activate multiple transmitting signals that are critical for cell growth,survival,differentiation and apoptosis.Recently,it has been reported that Gab2 polymorphism is associated with the increase in the risk of Alzheimer’s disease (AD) and is involved in the pathogenesis of AD.This review mainly focuses on the structure and function of Gab2 protein and its role in the pathogenesis of AD. 展开更多
关键词 gab2 signal transduction Alzheimer’s disease APOE
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