α-Gal抗原定量检测试剂盒的研发

目的:通过优化α-Gal抗原检测的方法及改善相关试剂的稳定性,研发α-Gal抗原定量检测试剂盒,并评价该试剂盒的稳定性、可靠性和适用性。方法:以医疗器械行业标准(YY/T 1561—2017组织工程医疗器械产品动物源性支架材料残留α-Gal抗原检测)中的α-Gal抗原检测酶联免疫抑制方法为基础,通过评价回收率、相关系数R2、最大吸收值和一抗的最高结合抑制率,对一抗、酶标二抗和固相抗原包被反应条件进行优化。预先制备好抗原包被板以及即用型试剂,制备成套试剂盒。通过考察Gal-BSA标准品的Gal抗原含量,评价试剂盒的检测回收率、标准曲线的R2值、最高反应的吸收度(A)和最高结合抑制率,考察其稳定性。使用优化好的试剂盒检测几种样品的Gal抗原,考察试剂盒的适用性。结果:经过优化后的试剂盒Gal抗原最低检测限为5.64×1012个/每反应,检测回收率80%~120%;相关系数R2>0.98;6批次的板内、板间检测的相对标准偏差RSD<5%;阴性参考品无Gal抗原检出。使用该试剂盒能够准确检测小鼠脏器Gal抗原含量,其结果显示小鼠各脏器Gal抗原表达趋势与Gal抗原调控基因的m RNA表达趋势完全一致,间接地佐证了该试剂盒的准确性和可信性。检测生物型硬脑膜补片原材料Gal抗原含量为(8.34±1.17)×1014个·mg-1,产品Gal抗原含量为(4.16±2.56)×1012个·mg-1,计算得抗原清除率为99.5%。结论:该试剂盒具有较好的灵敏度,特异性,适用于依照行业标准YY/T 1561—2017进行动物源医疗器械/生物材料α-Gal抗原残留量的定量和Gal抗原清除率检测,为行业标准的实施提供技术保障。