基于Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路探讨异荭草苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨异荭草苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗效果及其作用机制。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(600 mg·kg^(-1))、异荭草苷低剂量组(25 mg·kg^(-1))、异荭草苷高剂量组(50 mg·kg^(-1))及异荭草苷对照组(50 mg·kg^(-1)),每组8只。小鼠自由饮用2%DSS溶液复制UC模型,实验进行3周后,各给药组给予相应药物灌胃治疗4周。给药结束后,称取体质量,摘眼球取血,剖取结肠组织。采用苏木素-伊红(HE)、阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)法观察小鼠结肠组织病理形态变化;透射电子显微镜观察小鼠结肠组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)和髓过氧化物酶(MPO)水平;免疫组化法检测小鼠结肠组织中半乳糖凝集素(Gal-3)蛋白表达;免疫荧光法检测黏蛋白(MUC2)表达及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;免疫印迹(Western Blot)法检测小鼠结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量明显下降,结肠长度明显缩短,肠质量指数明显增加(P<0.01);小鼠肠黏膜结构紊乱,微绒毛稀疏,隐窝结构见大量炎性细胞浸润,线粒体肿胀明显,杯状细胞明显减少;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显升高,IL-10水平明显降低(P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达减少及NLRP3和ASC共定位增强;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显增加,Occludin和ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,异荭草苷低、高剂量组小鼠体质量明显上升,结肠长度明显增长,肠质量指数明显降低(P<0.05,P<0.01);肠黏膜、微绒毛及线粒体结构明显恢复,炎性浸润减轻,杯状细胞明显增加;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达增加,NLRP3和ASC共定位减弱;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,Occludin和ZO-1蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论异荭草苷对DSS诱导的UC小鼠具有良好的治疗效果,其机制可能与抑制Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路,保护肠黏膜屏障有关。

过敏性哮喘患儿血清Gal-3、SAA、IL-33与病情的关系

目的 分析过敏性哮喘患儿血清半乳糖凝集素-13(Gal-3)、淀粉样蛋白A(SAA)、白介素-33(IL-33)水平与病情严重程度的相关性。方法 选取许昌市人民医院2021年9月~2023年6月收治的102例过敏性哮喘患儿为研究组,并收集同期、同年段102名健康儿童资料作为对照组。比较2组血清Gal-3、SAA、IL-33水平、肺功能[用力肺活量(FVC)、最大呼气峰流速(PEF)]、呼出一氧化氮(FeNO),分析研究组不同病情程度血清Gal-3、SAA、IL-33水平、肺功能、FeNO,分析血清Gal-3、SAA、IL-33水平与肺功能、FeNO、病情严重程度的相关性。结果 研究组血清Gal-3、SAA、IL-33水平高于对照组(P<0.05);研究组PEF、FVC低于对照组,FeNO高于对照组(P<0.05);患儿血清Gal-3、SAA、IL-33水平轻度<中度<重度(P<0.05);患儿PEF、FVC轻度>中度>重度,FeNO<中度<重度(P<0.05);血清Gal-3、SAA、IL-33水平与PEF、FVC呈负相关,与FeNO、病情程度呈正相关(P<0.05)。结论 过敏性哮喘患儿血清Gal-3、SAA、IL-33水平表达上调,与患儿肺功能、气道炎症、病情程度密切相关,对病情严重程度判断具有重要临床意义。

原发性高血压患者血清sST2、MMP-3和Gal-3水平及其与左心室重塑的相关性研究

探讨原发性高血压患者血清可溶性ST2(sST2)、基质金属蛋白酶(MMP-3)及半乳糖凝集素-3(Gal-3)水平及其与左心室重塑的相关性。选择2019年11月—2021年12月在桂林市人民医院接受治疗的136例原发性高血压患者为研究对象,评估患者左心室质量指数(LVMI)。将136例原发性高血压患者分为伴左心室肥厚与不伴左心室肥厚,其中伴左心室肥厚52例,纳入观察组;不伴左心室肥厚84例,纳入对照组。重点分析患者血清sST2、MMP-3和Gal-3水平,以及血清sST2、MMP-3和Gal-3水平与左心室重塑的相关性。结果显示,观察组血清sST2、MMP-3和Gal-3水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究发现,原发性高血压患者血清sST2、MMP-3和Gal-3水平与左心室重塑有关,血清sST2、MMP-3和Gal-3水平过表达会增加LVMI的风险,检测各项指标水平有助于为临床准确诊断左心室重塑提供重要参考和指导价值。

益肾安宫Ⅱ号对脾肾两虚型复发性流产患者外周血可溶性Tim-3、Gal-9表达水平的影响

复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)的发生率达1%~5%[1],是生殖健康领域的常见疾病。连续发生自然流产2次与3次的病因构成相似,且发生2次自然流产后再发风险升高[2],因此将妊娠28周之前,与同一配偶连续发生2次及以上的自然流产定义为RSA,并推荐将反复生化妊娠纳入RSA进行管理[3]。

siRNA干扰Gal-3对Eca-109食管癌细胞株CyclinD1、p21、p27蛋白表达及细胞增殖的影响

目的探讨siRNA干扰Galectin-3 mRNA后,食管癌Eca-109细胞株增殖活性的影响及Ga-lectin-3、CyclinD1、p21、p27蛋白的表达。方法将Galectin-3-siRNA转染食管癌Eca-109细胞株后,分别用Real-timePCR、MTT、流式细胞术和免疫细胞化学分别检测转染效率、细胞增殖活性、细胞周期分布及Ga-lectin-3、CyclinD1、p21、p27蛋白的表达。结果食管癌Eca-109细胞增殖活性明显减少,主要分布在G1期,Galectin-3和CyclinD1蛋白表达下降,p21和p27蛋白的表达升高。结论运用siRNA可有效抑制Ga-lectin-3蛋白的表达及细胞增殖活性,Galectin-3参与食管癌Eca-109细胞株的增殖与CyclinD1、p21、p27蛋白关系密切,Galectin-3可成为治疗食管癌的靶基因。

采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA

为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。

慢性肾病大鼠血清Bcl-3、Gal-3、TGF-β1与肾间质纤维化的关系

目的探讨腺嘌呤诱导的慢性肾病大鼠血清Bcl-3、Gal-3、TGF-β1与肾间质纤维化的关系。方法将20只SPF级雄性大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(CKD组,n=10),模型组给予腺嘌呤灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,分别于第3、6周处死大鼠,留取血检测尿素氮、肌酐及Bcl-3、Gal-3、TGF-β1水平,HE染色观察肾脏病理改变,Masson染色观察肾间质纤维化情况及严重程度,免疫组化染色观察肾组织中α-SMA蛋白的表达情况。结果与对照组相比,CKD组各时间点的血尿素氮、肌酐、Bcl-3、Gal-3和TGF-β1水平均明显升高(P<0.05)。CKD组大鼠肾组织HE染色可见肾小管上皮细胞变性坏死、肾间质纤维化等病理改变;Masson染色可见蓝色胶原沉积明显增多,同时α-SMA蛋白表达也明显升高(P<0.05)。CKD组肾间质胶原纤维相对面积评分明显高于对照组(P<0.05)。相关性分析显示血Bcl-3、Gal-3、TGF-β1水平与肾间质纤维化相对面积呈正相关(r_(s)=0.776,P<0.001;r_(s)=0.58,P<0.001;r_(s)=0.52,P=0.001)。结论腺嘌呤诱导的CKD模型大鼠血清Bcl-3、Gal-3和TGF-β1水平明显升高,且与肾纤维化严重程度密切相关,有望成为评估肾纤维化的新型生物标志物。

Tim-3/Gal-9信号通路在间充质干细胞中减轻急性移植物抗宿主病治疗中的研究进展

移植物抗宿主病(Graft versus Host Disease, GvHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后的严重并发症。急性GvHD (aGVHD)发生于同种异体造血干细胞移植后,受体的组织抗原被表达给供体T细胞,从而导致供体T细胞激活、表达,增强对宿主的免疫反应,攻击健康的受体组织。aGVHD的发生率约为30%~50%。aGVHD的初始治疗是类固醇。对类固醇没有反应的aGVHD患者的预后很差。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)因其具有调节免疫特性,在aGVHD的治疗中显示相当大的前景。MSCs表达的β-半乳糖苷结合凝集素-9 (Galectin-9, Gal-9)是免疫抑制的重要调节因子,通过与T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域分子(T-cell immunoglobin mucin-3, Tim-3)结合,发挥免疫调控作用,在调节T细胞亚群及免疫耐受中起着重要作用。在移植后早期增强Tim-3/Gal-9途径的信号传导以抑制免疫应答,调节T细胞增殖,改善致死率,可成为异基因造血干细胞移植后免疫调节新途径。

斑石鲷irf3基因鉴定及其在虹彩病毒感染下的表达模式

干扰素调节因子(irf3)是干扰素调节因子(IRF)家族的一员,是I型干扰素依赖性免疫反应的主要转录调节因子,在针对DNA和RNA病毒的先天免疫反应中发挥重要作用。本研究中,斑石鲷irf3基因(Oplegnathus punctatus interferon regulatory factors 3,Opirf3)来自实验室斑石鲷基因组数据库,经分析鉴定Opirf3的CDS序列全长1362 bp,可编码453个氨基酸,预测其蛋白分子量为50.0 ku,理论等电点为4.97,有一个IRF结构域和一个IRF-3结构域。荧光定量分析结果显示,Opirf3在斑石鲷肝脏、鳃、心脏、皮肤、脾脏、肠、脑、肾脏、胃和头肾组织均有表达;虹彩病毒感染7 d时,免疫组织肝脏、脾脏和肾脏中Opirf3的表达水平显著上调。斑石鲷肾细胞系体外刺激实验显示,不同浓度poly I:C刺激后,Opirf3的表达量较对照组均显著升高,poly I:C浓度为100μg/mL时,肾脏细胞中Opirf3的相对表达水平升高,为对照组的86.8倍。siRNA干扰后,斑石鲷肾细胞系中Opirf3表达水平显著下调30%,下游基因IFN-α、CD40、CD80和IL-1β显著下调,IL-6显著上调。以上结果可能表明Opirf3基因参与了I型IFN在斑石鲷抗虹彩病毒过程中的先天免疫反应。本研究可为斑石鲷抗病分子育种提供理论依据。

Gal-3在动脉粥样硬化性疾病中的研究进展

半乳糖凝集素-3(Gal-3)是一种β-半乳糖苷结合蛋白,是唯一能够形成五聚体的半乳糖凝集素,具有多种调节活性和生理功能,如细胞生长、增殖、凋亡、分化、细胞黏附和组织修复等。研究表明,Gal-3在动脉粥样硬化的发病过程中也扮演着重要角色,但其具体作用机制目前尚未完全明确。本文围绕Gal-3在动脉粥样硬化性疾病中的作用机制及表达水平的研究进展进行综述,探讨Gal-3作为动脉粥样硬化性疾病新型标志物和新治疗靶点的应用价值,以期为动脉粥样硬化性疾病的早期防治提供新的科学依据。

人工注射Dnmt3 siRNA对意大利蜜蜂雌蜂发育的影响

为了研究人工注射DNA甲基化转移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)siRNA对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雌蜂的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及蜜蜂形态指标之间的影响和关系,分别给3组3日龄的意大利蜜蜂幼虫人工注射50ng Ringer,uth siRNA和Dnmt3 siRNA溶液。在幼虫的发育过程中,测定每组幼虫头部的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、前翅长、前翅宽、吻长、第3背板长等形态指标。结果表明:人工注射Dnmt3 siRNA不仅可以显著降低意大利蜜蜂幼虫头部Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量和dynactin p62基因整体甲基化水平,同时显著提高了刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、第3背板长。结果说明Dnmt3的改变可以影响雌性意蜂幼虫的发育。

siRNA敲除STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的抑制

目的:了解RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的可能作用。方法:根据STAT3基因特点,设计合成STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),并转染人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3mRNA,采用软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭能力。结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关。结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的侵袭。

VEGF和Gal-3表达与甲状腺乳头状癌浸润转移的关系

探讨VEGF和Gal-3在甲状腺乳头状癌中的表达及其与癌组织浸润转移的关系。应用免疫组织化学染色EliVisionTM plus两步法检测164例甲状腺乳头状癌组织和30例癌旁甲状腺组织中VEGF和Gal-3的表达状况。结果显示,癌组织VEGF和Gal-3总体阳性表达率分别为59.8%和92.1%,显著高于癌旁甲状腺组织(P<0.05)。有浸润和有淋巴结转移者,VEGF和Gal-3阳性表达率均显著高于无浸润和无淋巴结转移者(P<0.05),VEGF与Gal-3表达呈正相关(r=0.30)。结果表明,VEGF和Gal-3在甲状腺乳头状癌组织中多数呈强阳性表达,两者与癌组织浸润转移密切相关。

用噬菌体展示筛选Gal-α-1,3-Gal的模拟肽

猪心移植是解决心脏移植供体少的有效方法 .由于猪心血管内皮细胞表面抗原半乳糖 α 1,3 半乳糖 (Gal α 1,3 Gal) ,能与人体内预存的天然抗体结合产生超急性排斥反应 (HAR) ,而无法应用于临床 .为了解决这一难题 ,应用噬菌体展示技术 ,筛选出一个能与抗B型血单克隆抗体 (mABanti B)特异性结合的阳性噬菌体克隆 ,应用酶联免疫吸附测定 (ELISA)和竞争性ELISA结果表明 ,所获得的阳性噬菌体克隆能特异性地与mABanti B结合 ,并且这种结合可被蜜二糖 (具有Gal α 1,6 Glc的结构 )所竞争抑制 .由此推测 ,筛选到的噬菌体阳性克隆很可能就结合在蜜二糖与mABanti B结合的位点 .同时 ,进行了阳性噬菌体克隆的抑制猪红细胞凝集活性试验 ,试验结果表明 ,此阳性克隆不仅可抑制Gal α 1,3 Gal与抗体的结合 ,也可抑制Gal α 1,3 Gal与西非单叶豆凝集素 (GS I B4)的结合 .此噬菌体阳性克隆测序后 ,得小肽序列为CCWLLRQPVRFVRSIRS .鉴于以上的结果 ,认为此小肽可以作为Gal α 1,3 Gal的模拟肽 。

siRNA沉默CCL18的表达抑制卵巢上皮癌SKOV3细胞的侵袭和迁移

目的:探讨体外沉默CCL18基因的表达对卵巢上皮癌SKOV3细胞侵袭和迁移的影响。方法:化学合成3对靶向CCL18的siRNA(CCL18-siRNA61、CCL18-siRNA127、CCL18-siRNA224),体外转染至CCL18阳性的SKOV3细胞,RT-PCR检测SKOV3细胞中CCL18 mRNA的表达,选取其中干扰效率最好的序列,构建靶向CCL18的干扰质粒pSilencer4.1-CCL18-siRNA61。pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染SKOV3细胞后,MTT法测定SKOV3细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的细胞周期,采用Transwell法、Migration法以及Fibronectin黏附法分别测定细胞的体外侵袭、迁移、黏附能力。结果:3对靶向CCL18的siRNA中CCL18-siRNA61干扰效果最好,进而成功构建靶向CCL18的pSilencer4.1-CCL18-siRNA61干扰质粒,pSi-lencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染可显著下调SKOV3细胞中CCL18 mRNA的表达。pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染不影响SKOV3细胞的增殖,但pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染组SKOV3细胞中(S+G2+M)期细胞比例明显低于对照质粒pSilencer4.1-Ctrl-siRNA转染组[(19.71±4.4)%vs(26.45±7.91)%,P<0.05];且与pSilencer4.1-Ctrl-siRNA质粒转染相比,pSilencer4.1-CCL18-siRNA61质粒转染可有效抑制SKOV3细胞的侵袭、迁移和黏附能力[(9.91±3.41)%vs(23.75±6.81)%,(16.80±8.71)%vs(31.74±11.23)%,(6.73±4.33)%vs(17.53±6.54)%;均P<0.05]。结论:siRNA沉默CCL18的表达可抑制卵巢上皮癌细胞株SKOV3的侵袭、迁移和黏附能力。

ClC-3 siRNA抑制鼻咽癌细胞调节性容积回缩

目的用siRNA沉默ClC-3氯通道,探讨ClC-3氯通道在鼻咽癌CNE-2Z细胞调节性容积回缩(regulatory volumedecrease,RVD)中的作用。方法使用终浓度100 nmol/L的ClC-3 siRNA转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,流式细胞术检测siRNA的转染率,Western blotting检测ClC-3蛋白表达,活细胞图像系统分析对照组和ClC-3 siRNA组细胞在低渗(160mOsm/L)刺激时的容积调节能力。结果 ClC-3 siRNA转染率为(63.8±3.8)%(n=3,P<0.01),与对照组相比,ClC-3氯通道蛋白的表达减少(60.9±4.0)%(n=3,P<0.01)。对照组细胞的RVD为(42.6±2.8)%(n=20),ClC-3 siRNA组细胞在低渗液中的最大容积与对照组没有显著性差异,但RVD仅为(10.5±4.8)%,RVD抑制率达75.4%(P<0.01)。结论 ClC-3 siRNA成功转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,特异性抑制ClC-3蛋白表达,显著降低细胞RVD能力,提示ClC-3氯通道在鼻咽癌细胞调节性容积回缩中起重要作用。

siRNA沉默socs3对红系发育的影响

为了研究细胞因子信号转导分子3(suppressor of cytokine signals-3,SOCS-3)对造血发育的影响,构建了SOCS-3慢病毒siRNA干涉载体,并转染人红白血病细胞株K562.根据绿色荧光蛋白的表达进行流式分选后,获得了高表达慢病毒干涉载体的细胞.实时荧光定量PCR和Western-blot检测了转染细胞中SOCS-3基因的干涉效率,结果显示,与对照组相比,siRNA干涉后K562细胞SOCS-3基因的表达量仅为其相对表达量的22.1%,干涉效率77.9%;Western-blot结果显示,SOCS-3在蛋白质水平表达也明显受抑制.进一步对SOCS-3基因沉默后的K562细胞进行了诱导分化,并采用联苯胺染色法检测K562细胞向红系分化比例变化,免疫荧光染色检测细胞表面抗原的变化,RT-PCR检测造血相关基因的变化.结果发现,SOCS-3沉默后K562细胞向红系的发育能力显著提高.研究结果证明,SOCS-3在造血发育中有重要调控作用,而对其表达进行干涉或沉默将在规模化的红细胞诱导研究中发挥重要作用.

半乳糖凝集素-3(Gal-3)在上皮性卵巢癌中的表达及其对增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)在上皮性卵巢癌中的表达及对人上皮性卵巢癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法分别采用real-lime PCR和Western blot法检测上皮性卵巢癌中Gal-3的mRNA及蛋白表达;在上皮性卵巢癌细胞中运用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和慢病毒感染方法,分别下调和过表达Gal-3后,采用CCK一8试剂盒检测细胞的增殖,Matrigei和Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达水平。结果与正常卵巢组织相比,Gal-3在上皮性卵巢癌组织中高表达,并与临床分期有关(P<0.05)。在上皮性卵巢癌细胞中分别过表达和下调Gal-3后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均相应地增强和下降,与对照组比较均有明显统计学意义(P<0.001),Cyclin D1和MMP-9蛋白表达分别上调和下调,而E-钙黏蛋白表达分别出现下调和上调。结论 Gal-3在上皮性卵巢癌中高表达,并促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

水通道蛋白3-siRNA和磷脂酶D2-siRNA对黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨水通道蛋白(aquaporin,AQP)3-siRNA和磷脂酶D(phospholipase D,PLD)2-siRNA对黑素瘤(malignant melanoma,MM)细胞增殖和凋亡的影响。方法用脂质体转染法将siRNA导入人黑素瘤细胞株A375细胞。用CCK-8法检测细胞增殖。用细胞膜磷酯酰丝氨酸异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin-V-FITC/PI)双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染AQP3-siRNA、转染PLD2-siRNA、同时转染AQP3-siRNA和PLD2-siRNA后,A375细胞增殖均受到明显抑制(与正常培养组比较,P均<0.01)。同时转染组与单独转染组(AQP3-siRNA组和PLD2-siRNA组)比较,细胞增殖差异有统计学意义(P均<0.01)。转染AQP3-siRNA、同时转染AQP3-siRNA和PLD2-siRNA后,A375细胞凋亡明显增加(与正常培养组比较,P均<0.05)。同时转染组与单独转染组(AQP3-siRNA组和PLD2-siRNA组)比较,细胞凋亡差异有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。结论 AQP3和PLD2与MM增殖和凋亡相关,AQP3/PLD2信号分子在MM的发生中具有协同作用。

鸡β-防御素3(Gal-3)基因的克隆、表达及抑菌活性研究

【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(Gal-3)基因,并对其抑菌活性进行研究,为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用RT-PCR方法,从鸡心脏中分离并克隆了鸡Gal-3基因,将其与分子伴侣基因SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET-20b连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;最后,对Gal-3融合蛋白进行纯化,并对表达产物进行体外抑菌试验。【结果】通过RT-PCR扩增获得了约240bp的鸡Gal-3基因,经IPTG诱导获得约26ku的蛋白。IPTG在终浓度为0.6mmol/L,33℃诱导4h,诱导时菌体A600为0.6,蛋白表达量最高,且多数以可溶形式存在,33℃上清中的蛋白含量比37℃上清高。纯化的蛋白对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。【结论】成功克隆并表达了鸡Gal-3基因,其原核表达产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性。