榄仁叶提取物对D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤的防护作用

目的 :研究榄仁叶提取物 (TCE)对小鼠急性肝损伤的防护作用及可能机制。方法 :在体实验 ,建立小鼠D 氨基半乳糖 (D GalN)肝损伤模型 ,检测TCE对血清天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)活性的影响 ,观察肝脏组织结构的变化并测定肝线粒体肿胀度。离体实验 ,建立原代小鼠肝细胞D GalN损伤模型 ,运用MTT法检测TCE对细胞活性的影响 ,并测定细胞上清AST及超氧化物歧化酶 (SOD)活力变化。结果 :在体实验 ,一定剂量TCE能有效抑制D GalN引起的小鼠血清AST及ALT活性的显著上升 (2 95 ,3 35倍 ) ,明显减轻D GalN损伤引起的小鼠肝脏组织结构的破坏并抑制线粒体对外加Ca2 + 诱发肿胀敏感性的下降。离体实验 ,不同浓度TCE可剂量依赖性抑制D GalN引起的MTT下降 ,抑制甚至完全对抗D GalN引起的原代肝细胞上清AST的显著上升(1 9倍 )及SOD的明显下降 (48 0 % )。结论 :TCE对D GalN诱导的急性肝损伤具有效的防护作用 ,其机理可能与对抗脂质过氧化、保护线粒体及肝细胞有关。

1例粘多糖病ⅣA型儿童GALNS基因突变分析

目的研究1例粘多糖病ⅣA型(mucopolysaccharidosis ⅣA,Morquio A,MPS ⅣA)患者的临床特点及N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GALNS)基因的突变。方法研究对象为1例散发粘多糖病ⅣA型患儿及50例正常儿童。分别取其外周血5mL,提取DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增GALNS基因的全部14个外显子,应用正反引物对PCR产物进行基因序列直接测序。结果该患儿未发现GALNS基因致病突变。但是检测出2个GALNS基因多态性1431A>G、1569+36A>G。结论 GALNS基因突变不是本研究中1例散发MPSⅣA患儿的主要致病原因。

LPS/D-GaLN诱导大鼠急性肝损伤动物模型的建立

目的建立脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(D-GaLN)诱导大鼠急性肝损伤动物模型。方法将32只SD大鼠随机分为四组,腹腔注射不同剂量的LPS及300mg/kg的D-GaLN后观察大鼠的存活状态及存活时间,筛选最佳造模LPS剂量。确定最佳剂量后,另选40只SD大鼠随机分为8、24、48、72h模型组及对照组,模型组腹腔注射最佳剂量LPS/D-GaLN后,分别在造模8、24、48、72h处死,对照组给予同等剂量生理盐水腹腔注射。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化,观察肝组织病理变化。结果通过观察大鼠存活时间,结合肝组织病理表现,确定LPS(30μg/kg)/D-GaLN(300mg/kg)为最佳造模剂量;观察到造模后大鼠血清ALT、AST及TNF-α、IL-6水平显著升高,在24h达到高峰,之后逐渐下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);肝组织病理表现为肝细胞肿胀变性,出现片状坏死、融合坏死、炎症细胞浸润等表现。结论成功建立了LPS/D-GaLN诱导大鼠急性内毒素肝损伤动物模型,有利于保肝药物疗效的观察和机制的深入研究。

Beclin-1在LPS/GalN诱导的肝损伤中的表达及意义

目的:探讨LPS/GalN诱导的肝损伤中Beclin-1的表达情况及意义。方法:雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组和肝损伤模型组,肝损伤模型组又分为1h,3h,6h组;采用LPS+GalN腹腔注射制作肝损伤小鼠模型,分别于注药后1h,3h,6h取材。定量比较血清肝功能指标的变化;通过Western blot法检测小鼠肝中Beclin-1蛋白的表达情况。结果:1h,3h组与正常组ALT活性差异无统计学意义(P>0.05),6h组ALT活性明显高于正常组(P<0.001);Beclin-1在3h组表达最强(P<0.05),6h组表达较3h组减弱(P<0.05)。结论:Beclin-1在损伤肝表达由弱转强,但在严重肝功能障碍时表达最少。自噬现象在肝损伤的发生发展中起一定的保护作用,晚期下调可能参与肝功能衰竭的发生。

蓝狐胆汁对D-Galn肝损伤小鼠模型保护作用的研究

目的:探讨蓝狐胆汁对D-Glan肝损伤小鼠模型的保护作用。方法:取昆明种小鼠30只,随机分为5组,即空白对照组(空白组)、D-氨基半乳糖(D-Galn)急性肝损伤模型组(造模组)、阳性药葵花护肝(0.4 g/kg)组(阳性组)、蓝狐胆粉高剂量组(10 g/kg)组(高剂量组),蓝狐胆粉低剂量(5 g/kg)组(低剂量组),每组6只;灌胃给药,1次/d,连续10 d,空白对照组予同体积蒸馏水。末次给药前24 h,小鼠腹腔注射D-Galn 500 mg/kg,末次给药前15 h将动物禁食,末次给药后1 h将动物处死,取血清,测定血清中总胆固醇(T-CHO)浓度、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性;取肝脏,测定肝脏中的丙二醛(MDA)含量,并作病理切片。结果:与模型组比较,蓝狐胆粉高剂量、低剂量组均能显著降低血清ALT、AST、T-CHO及肝脏MDA的含量(P<0.05),表明蓝狐胆汁具有保护D-Galn造成肝损伤的作用。结论:蓝狐胆汁对D-Galn造成肝损伤小鼠模型具有保护作用。

DEM对Galn/LPS介导小鼠急性肝损伤发生的影响

目的 :耗竭肝脏还原型谷胱甘肽 (GSH)导致氧化还原失平衡后 ,探讨是否可通过改变枯否细胞信号转导途径而影响肝损伤的发生。方法 :将雄性昆明种小鼠随机分为 4组 ,除对照组、Galn/LPS致肝损伤组和单纯DEM组外 ,另设DEM加Galn/LPS组。分别测各组的ALT活性 ,TNFα ,GSH和MDA含量 ,并做组织切片进行比较。结果 :给小鼠注射半乳糖胺 /脂多糖 6h后 ,肝损伤组除血浆谷丙转氨酶 (ALT)活性显著升高外 ,肝脏丙二醛 (MDA)、GSH和肿瘤坏死因子α(TNFα)水平与其他组相比有统计学差异。结论 :利用二乙基顺丁烯二酸盐 (DEM)耗竭肝脏GSH ,可通过调整GSH/GSSG比值 ,使氧化还原失平衡 ,抑制脂多糖 (LPS)所致枯否细胞活化以及TNFα释放 。

双环醇对LPS／GalN诱导小鼠急性肝衰竭的保护作用

目的：研究双环醇对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和D-半乳糖胺（D—gaiactosamine，D—GaIN）诱导小鼠急性肝衰竭（acutehepaticfailure，AHF）的保护作用及相关作用机制。方法：采用LPS和GalN（LPS15ug／kg，GalN800mg／kg，ip）建立AHF小鼠模型。检测血清转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间及肝脏病理形态学改变。记录动物24h死亡率。ELISA法检测血清TNF-α、IFN-γ、IL-10水平，免疫组化法测定肝组织黏附分子ICAM-1，LFA-1表达，RT—PCR法测定肝组织CD14、Toll样受体4（TLR4）mRNA表达。

蒙药给旺-9味散对D-GalN诱导急性肝衰竭大鼠保肝、抗炎及组织形态学改变的影响

目的观察蒙药给旺-9对D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GalN)诱导的急性肝衰竭大鼠保肝、抗炎作用及肝组织形态学改变的影响。方法将72只SPF级雄性SD大鼠,随机法分为空白对照组、模型组、阳性对照美能15 mg·kg^(-1)剂量组、蒙药给旺-9低(0.4 g·kg^(-1))、中(0.8 g·kg^(-1))、高(1.6 g·kg^(-1))剂量组,每天灌胃1次,连续10天。采用D-GalN腹腔注射诱导急性肝衰竭大鼠模型。造模后观察各组大鼠行为学改变,并在造模后48 h取各组大鼠血清和肝组织,采用试剂盒检测血清谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST),总胆红素(Total bilirubin,T-Bil)、直接胆红素(Direct bilirubin,D-Bil)的活性。ELISA试剂盒检测肝匀浆内毒素(Lipopolysaccharides,LPS)、白介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)的含量。血浆分析仪检测凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶(Activated partial thromboplastin time,APTT)国际标准化比值(International normalized ratio,INR)。肝组织右叶做HE染色,观察组织形态学变化。结果与空白组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、T-Bil、D-Bil水平升高(P<0.01),肝匀浆LPS、IL-4、IL-10水平升高(P<0.01),与正常组比较模型组PT、APTT、INR显著升高。差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较阳性对照组、蒙药给旺-9味高、中、低剂量组大鼠PT、APTT、INR无显著降低(P>0.05),显微镜下肝组织出现水肿,炎细胞浸润、坏死等病变。与模型组比较,给旺-9低、中、高剂量组、阳性对照组大鼠血清ALT、T-Bil、D-Bil值显著下降(P<0.05),肝匀浆LPS、IL-4、IL-10含量显著下降(P<0.01),肝组织形态学病变显著改善。结论蒙药给旺-9可保护DGalN诱导的急性肝衰竭大鼠肝功能受损,抗炎并可明显减轻肝脏的病理损害,对肝脏组织起到一定保护作用。

左旋紫草素抑制NF-κB信号通路保护LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤

目的探讨左旋紫草素(L-Shikonin,L-SK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞的体外抗炎作用及其对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤的保护作用。方法体内实验采用LPS/D-GalN建立小鼠急性肝损伤模型,考察存活率和各组小鼠的肝脾指数变化,测定血清中AST、ALT、AKP与肝组织匀浆中的NO含量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,HE染色观察各组小鼠肝组织病理切片。体外实验采用MTT法检测细胞存活率、Griess法检测NO含量、RT-PCR和Western blot检测分别考察L-SK对LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子的mRNA和相关通路蛋白表达水平的影响。结果体内实验结果表明,L-SK可明显改善急性肝损伤小鼠的肝脾指数,血清中AST、ALT和AKP水平明显下降,肝匀浆中的NO和MDA含量明显下降,SOD活性提高,能明显改善小鼠肝组织病理性损伤。体外实验结果表明,L-SK能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中的INOS、COX2、IFN-β以及促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA表达,并且明显抑制INOS、COX2蛋白表达以及NF-κB信号通路蛋白表达。结论L-SK在LPS诱导的RAW264.7细胞的体外炎症中具有良好的抗炎作用,通过抑制NF-κB信号通路中的磷酸化p65以及IKKα/β的蛋白表达,从而发挥体外抗炎作用,同时L-SK对小鼠急性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗炎作用相关。

LPS／D-GalN 诱导小鼠急性肝损伤模型的建立

目的建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)诱导小鼠急性肝损伤模型。方法 40只雌性C57BL/6小鼠用于观察8种不同LPS与D-GalN剂量配比联合刺激后小鼠存活时间,以确定模型建立的最佳剂量。使用腹腔注射最佳剂量染毒32只雌性C57BL/6小鼠,分别在0、1、4、8 h处死,每组8只,0 h注射相同剂量生理盐水作为对照。观察染毒后小鼠肝组织病理损伤,检测血清中ALT及炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α表达水平变化。结果通过观察小鼠存活时间,确定腹腔注射最佳染毒剂量为LPS(2.5 mg/kg)/D-GalN(0.3 g/kg);小鼠染毒后肝组织呈进程性病变,最终发展为肝脏弥漫性坏死,肝细胞核崩解。与对照组相比,血清ALT显著升高(P<0.001),IL-6、MCP-1、TNF-α均在1 h后达到最高水平(P<0.001),然后持续下降。结论成功建立LPS/D-GaIN诱导小鼠急性肝损伤模型,为探索急性肝损伤的致病机制以及药物干预治疗提供有效的动物模型。

LPS/D-GalN诱发NF-κB转基因小鼠急性致死性肝损伤模型的建立

目的以NF-κB转基因BALB/c小鼠建立一个LPS/D-GalN诱发的急性致死性肝损伤模型。方法采取腹腔注射高剂量的LPS/D-GalN建立急性致死性肝损伤小鼠模型,观察模型小鼠的促炎症细胞因子水平和NF-κB的活性改变,以及肝脏功能和病理改变情况。结果模型组小鼠生存时间为8～10 h,模型建立后小鼠血清TNF-α、IL-6和MCP-1水平显著升高,在2～4h达到高峰;肝脏外观出现瘀血和出血,肝脏小叶被严重破坏,肝细胞严重坏死和出血;血清ALT/AST水平在模型诱发后持续迅速上升;整体成像显示NF-κB的活性在4～6 h达到高峰。正常对照组小鼠以上指标无显著变化。结论成功建立LPS/D-GalN诱发的NF-κB转基因小鼠的急性致死性肝损伤模型。

羊耳菊水提物对CCl4、D-GalN致小鼠急性肝损伤的保护作用

为研究羊耳菊水提物对CCl4、D-GalN致小鼠急性肝损伤的保护作用。通过腹腔注射0.08%CCl4花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,肝匀浆中总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活力,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)的含量;HE染色肝切片,显微镜观察肝组织病理改变;腹腔注射D-GalN(500mg/kg)花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中AST、ALT含量。结果表明:羊耳菊水提液可降低CCl4所致小鼠急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST含量(P<0.01),升高肝匀浆中SOD、GSH-Px活力(P<0.01或P<0.05)及降低TNF-α、IL-1的含量(P<0.05);病理切片显示,羊耳菊三个剂量组动物肝细胞坏死、变性,细胞浆聚集及炎症细胞的浸润程度均较模型组减轻。羊耳菊水提液也可降低D-GalN所致小鼠急性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量(P<0.01或P<0.05)。可见羊耳菊水提物对CCl4、D-GalN所诱导的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。

ATF4在CCl4和LPS/D-GalN介导小鼠肝损伤中的保护作用

目的利用小鼠模型对转录激活因子4(ATF4)在肝损伤中的作用进行研究。方法建立CCl 4慢性肝损伤小鼠模型和LPS/D-Gal N急性肝损伤小鼠模型,运用逆转录PCR和Western blot分析比较损伤模型中小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏组织中的ATF4蛋白及其mRNA水平。采用CRISPR-Cas9技术敲低ATF4后,分析检测两种模型中小鼠血清AST和ALT水平。为进一步探明ATF4的作用,采用内质网应激诱导剂衣霉素处理小鼠,Western blot检测小鼠肝、肺组织中ATF4、磷酸化-eIF2α、总eIF2α和Bip的蛋白水平。RT-PCR检测肝脏XBP1 mRNA的剪接形式(活性形式)和未剪接形式(非活性形式)。结果小鼠肝脏中的ATF4蛋白与其他组织相比异常增高。衣霉素能诱导小鼠体内内质网应激反应(如e IF 2α磷酸化),却引起小鼠肝脏中ATF4蛋白降低。在CCl4慢性肝损伤模型和LPS/D-GalN急性肝损伤小鼠模型中,肝脏ATF4蛋白明显降低。CRISPR-Cas9敲低肝脏ATF4后,两种小鼠模型中的血清AST和ALT进一步升高。结论 ATF4在小鼠肝损伤中起保护作用。

小柴胡汤对D-GalN/LPS诱导的虎龙杂交石斑鱼肝细胞损伤的保护作用

为探讨小柴胡汤对虎龙杂交石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀)化学性肝细胞损伤的免疫功能影响,用D-氨基半乳糖(D-GalN,20 mmol·L^(–1))和脂多糖(LPS,1μg·mL^(–1))作用肝细胞24 h构建虎龙杂交石斑鱼肝细胞损伤模型,用不同质量浓度的小柴胡汤(100、200和400μg·mL^(–1))对肝细胞进行前处理[D-氨基半乳糖联合脂多糖(DGalN/LPS)损伤前加药],通过CCK-8法检测肝细胞活力,HE染色观察肝细胞形态,收集细胞上清液检测炎症因子INFγ、COX-2和PGE2的含量,以及细胞沉淀中凋亡和免疫相关基因的表达。结果表明,小柴胡汤可以提高肝细胞的成活率,不同程度地抑制D-GalN/LPS损伤引起的肝细胞培养上清液中INF-γ活性以及COX-2和PGE2含量的升高,降低细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞凋亡率,对肝细胞结构具有明显的保护作用;同时显著抑制凋亡相关基因caspase-3、caspase-9和P53的上调,促进免疫相关基因TLR3的上调。数据统计分析显示,添加200μg·mL^(–1)小柴胡汤组的抑制效果最明显。综合以上结果,小柴胡汤对虎龙杂交石斑鱼化学性肝损伤有一定的保护作用,可预防肝脏疾病的发生和发展,为鱼类保肝药物研究提供了新的见解。

D-GalN/LPS诱导大鼠急性肝衰竭中髓过氧化物酶和 Nrf2/HO-1信号通路的变化

目的 探讨D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)诱导急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路的变化及ALF的发生机制。方法 SD大鼠随机分为对照组和ALF组。ALF组:将D-GalN 800 mg/kg和LPS 8μg/只同时腹腔注射,于注射后6、12和24 h检测血清总胆红素(TBiL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。ELISA法检测血清MPO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,比色法测定MPO活性,RT-PCR检测肝组织Nrf2和HO-1的mRNA水平,Western blot法检测肝组织MPO、Nrf2和HO-1蛋白水平。结果 与对照组比较,ALF组血清MPO水平于造模后6 h升高,12 h为最高,24 h开始下降(23.33±2.06 vs.33.00±3.16,65.75±7.02,53.92±5.63,P<0.05);血清TNF-α(11.30±3.26 vs.102.17±14.80,83.33±11.22,64.25±9.29,P<0.01)和IL-6(10.83±2.92 vs.89.25±10.86,77.33±8.02,65.58±7.31,P<0.01)于造模后6 h升高最明显,12 h后逐渐下降,差异均有统计学意义。ALF组6、12、24 h肝组织MPO活性高于对照组,差异均有统计学意义(15.5±1.51,28.08±4.65,22.92±1.93 vs.12.17±1.27,P<0.05);ALF组肝组织6、12、24 h Nrf2 mRNA(1.59±0.13,3.65±0.11,2.35±0.11 vs.1.04±1.01,P<0.01)和HO-1 mRNA(2.44±0.19,4.77±0.18,3.82±0.17 vs.1.12±0.06,P<0.01)水平高于对照组,差异均有统计学意义。ALF组肝组织MPO(4.10±0.70,9.77±1.15,7.23±0.40 vs.2.07±0.42,P<0.01)、Nrf2(4.03±0.80,9.03±0.50,6.07±0.47 vs.2.63±0.38,P<0.01)和HO-1(1.73±0.21,5.17±0.51,3.03±0.32 vs.0.97±0.21,P<0.01)蛋白表达于12 h达最高值,ALF组各时间点与对照组比较均差异有统计学意义。结论 MPO可能通过氧化应激和炎症反应影响Nrf2/HO-1信号通路,在ALF中发挥重要作用。

紫丁香苷对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤的保护作用研究

旨在探究紫丁香苷(syringin,SY)对脂多糖(LPS)联合D-半乳糖胺盐酸盐(D-GalN)、(LPS/D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其潜在机制。将40只昆明鼠随机分为4组,分别为正常对照组(NC)、LPS/D-GalN模型(LD)组、SY低剂量(LSY+LD)组、SY高剂量(HSY+LD)组,每组10只。LSY+LD组、HSY+LD组采用腹腔注射方式给予SY(25、50 mg/kg),NC组和LD组分别腹腔注射等量的生理盐水,连续3 d,在第3天预防性给药1 h后,腹腔注射LPS/D-GalN建立急性药物肝损伤模型。造模6 h后,试验小鼠眼静脉取血,处死小鼠;检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;检测肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、过氧化氢酶(CAT)的水平,观察肝脏氧化应激的水平;制作肝组织切片,采用苏木精伊红(HE)观察肝脏的组织变化;利用免疫组化观察激活的核转录因子p65(NF-κBp65)入核状态;ELISA法检肝匀浆IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子的水平。结果表明:与NC组相比,LD组AST、ALT的水平显著增高(P<0.01),肝血管严重出血,肝脏大面积实质性坏死,胞核碎裂、崩解,肝脏中SOD、GSH、CAT水平显著降低(P<0.05),NF-κBp65核转移率提高,肝脏中IL-6,IL-1β、TNF-α炎性因子水平显著升高(P<0.01);SY组可显著降低小鼠血清中AST、ALT的活性(P<0.05),肝组织病理变化明显减轻,肝脏SOD、CAT的活性与GSH的水平提高(P<0.05);NF-κBp65核转移发生抑制;IL-6,IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05)。结果表明SY(25、50 mg/kg)对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝脏损伤具有保护作用且具有剂量依赖性,其作用机制与SY可提高抗氧化酶活性,抑制炎性因子的产生有关。

罕见黏多糖贮积症ⅣA型致病基因GALNS突变谱和骨骼表型

目的分析罕见黏多糖贮积症ⅣA型(mucopolysaccharidosis typeⅣA,MPSⅣA)家系患者的临床特点,行致病基因突变研究,探讨MPSⅣA患者骨骼表型与基因突变谱的特点。方法纳入以步态异常、骨骼畸形为主要表现的3个家系4例患者,评估患者临床表现、骨转换生化指标、骨密度、骨影像学及MPS相关酶学指标。采用全外显子测序技术检测致病基因突变。复习文献,总结我国大样本MPSⅣA患者表型及基因型特点。结果MPSⅣA型主要表型包括身材矮小(74.0%)、关节松弛(53.0%)、鸡胸(39.0%)、漏斗胸(36.0%)、膝内翻/外翻畸形(17.0%)。影像学以椎体扁平及前端鸟嘴样突出(51.0%)、脊柱后凸(30.0%)、脊柱侧弯(29.0%)、肋骨飘带征(28.0%)、股骨头变形(10.0%)为主要特点。75.5%患者有尿黏多糖定性阳性,90.7%患者血N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(N acetylgalactosamine-6-sulfatase,GALNS)活性降低。本研究首次检出GALNS基因的5种新突变(p.Y190C、p.E192G、p.R259Y、p.A400P、c.898+2T>A),影响GALNS蛋白的折叠、分子间相互作用及合成,致GALNS合成减少,使得多组织中糖胺聚糖堆积。我国大样本MPSⅣA患者GALNS基因以错义及无义突变最常见,其中c.953T>G、c.706C>G、c.374C>T、c.1097T>C为高频突变。结论MPSⅣA是GALNS突变引起的罕见常染色体隐性遗传性溶酶体病。中国MPSⅣA患者以身材矮小、多部位骨骼畸形为主要表型,GALNS基因以错义及无义突变最常见,本研究首次发现GALNS的5种新突变,扩展了对MPSⅣA表型和致病基因突变谱的认识。

中药干预LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的研究进展

急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)病情危重,病死率高,内科综合治疗疗效尚不满意,肝移植受限于肝源供给不足难以广泛开展。中药治疗可减轻肝脏损伤,延缓病情发展,降低病死率。基于动物模型积极筛选有效中药并阐述其作用机制具有重要意义。D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine, D-GalN)可以引起肝细胞大量坏死,而脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)可以模拟肝细胞大量死亡后的机体免疫应答,LPS联合D-GalN诱导建立的ALF模型更符合临床实际。因此,基于LPS/D-GalN构建的ALF模型,归纳总结可有效干预ALF的常见中药及其有效活性成分,并详细阐述其作用机制,以期对中药有效性评价、试验思路及临床合理应用提供参考。

姜状三七皂苷R1对LPS/D-GalN诱导急性肝损伤的保护作用研究

目的:姜状三七皂苷R1对急性肝损伤的干预作用及其作用机制。方法:通过腹腔注射10μg/kg LPS和700 mg/kg D-GalN建立急性肝损伤小鼠模型,苏木素-伊红(HE)观察肝组织病理学变化;生化法检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;小动物活体成像观察2-DG和PEG在小鼠体内的荧光强度;流式细胞术检测肝细胞的活性氧和凋亡水平。结果:与模型组比较,各剂量姜状三七皂苷R1可改善急性肝损伤小鼠肝脏病理损伤;降低小鼠血清ALT、AST水平和小鼠体内2-DG和PEG的荧光强度(P<0.01);降低肝细胞活性氧水平、血清MDA含量和小鼠肝脏组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的水平(P<0.01,P<0.05);提高SOD和GSH-Px水平(P<0.05,P<0.01)。结论:姜状三七皂苷R1介导氧化应激和炎症来发挥抗急性肝损伤的作用。

中国人黏多糖贮积症ⅣA型家系GALNS基因新突变的鉴定

目的研究黏多糖贮积症ⅣA型（mucopolysaccharidosis type ⅣA，MPSⅣA）患者发病的分子遗传学机制，揭示其基因型与表现型的相互关系，为产前基因诊断等创造必要的前提条件。方法采用尿糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）定性检测法对疑似MPSIVA型的先证者进行初诊，然后采用PCR及扩增产物直接测序法对先证者及其家庭成员进行突变检测。在检出GALNS基因c．1567T〉G新突变后，先后建立XspI酶切鉴定法和扩增阻碍突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）快速特异鉴定法，对随机采集的110名正常对照与先证者及其家庭成员的GALNS基因第14外显子进行序列分析，同时采用生物信息学方法对蛋白质二级、三级结构进行预测，以及直接测定患儿GALNS酶活性的方法，对该新突变进行致病性鉴定。结果先证者尿检呈弱阳性GAGs（±），其GALNS基因第14外显子内存在杂合的c．1567T〉G终止密码突变，第4外显子存在杂合的c．374C〉T错义突变，为两种突变的复合杂合子。其妹突变类型与先证者完全相同，其母仅在第14外显子存在杂合的终止密码突变，为该病的携带者，其父仅在第4外显子存在杂合的错义突变，也为杂合子；第14外显子的PCR产物经XspI酶切后，正常对照组切出28bp、120bp、399bp3条带，而患者和携带者的母亲均切出28bp、120bp、148bp和399bp4条带；用ARMS特异引物扩增后，正常对照组均扩增阴性，而患者及携带者均扩增阳性；蛋白质二级、三级结构预测结果显示：c ．1567T〉G变异导致终止密码（TAG）突变为谷氨酸（GAG），使多肽链延长了92个氨基酸残基，导致蛋白质二、三级结构发生明显改变，而正常对照无此变化。酶活性测定的结果显示：患者的GALNS酶活性仅为8．3nmol／17h／mgpr，明显低于正常值（正常参考值为41．9～92．1nmol／17h，／mgpr）。结论c．1567T〉G变异是一种新的致病性突变，是引起该家系患儿发病的根本原因。