东方山羊豆Cu/ZnSOD基因的克隆及表达分析

超氧化物歧化酶是一种广泛存在于真核生物中的金属酶类,在植物的抗逆性中起到重要的作用。文章采用RACE方法,从东方山羊豆中克隆了Cu/ZnSOD基因,并对其进行了初步分析。该基因cDNA序列全长935 bp,开放阅读框600 bp,编码199个氨基酸,蛋白质分子量为20.35 kDa。通过实时荧光定量PCR结果分析,该基因在东方山羊豆叶中表达量最多,茎中次之,根中最少。在NaCl和PEG诱导下,Cu/ZnSOD基因表达量先上调后下降。NaCl诱导24 h后,该基因的表达量显著低于对照。ABA胁迫抑制了该基因的表达。亚细胞定位结果表明,Cu/ZnSOD蛋白定位于叶绿体中。实验结果证明,Cu/ZnSOD基因主要在东方山羊豆的绿色组织中表达,在抵抗渗透性胁迫方面起到一定作用。

山羊豆种质苗期耐盐性鉴定及评价方法

采用NaCl胁迫对44份山羊豆种质材料进行了苗期耐盐性研究。结果表明,在NaCl胁迫下,山羊豆的生长受到明显抑制,地上生物量、地下生物量、株高、叶片数、存活率与材料的耐盐能力存在明显相关性,可作为耐盐鉴定指标;采用4种方法进行耐盐性评价,最佳的评价方法是标准差系数赋予权重法与聚类分析相结合;依据标准差系数赋予权重法以及聚类分析,44份材料可分为5类:相对高度耐盐的有16份材料,耐盐材料有8份,中等耐盐材料7份,盐害敏感材料10份,盐害高敏材料3份。

低温胁迫对东方山羊豆幼苗生理特性的影响

以东方山羊豆及敖汉苜蓿为材料,研究低温胁迫对东方山羊豆和敖汉苜蓿可溶性蛋白含量、保护酶活性、渗透调节物质的影响。结果表明:在低温胁迫下,东方山羊豆及敖汉苜蓿脯氨酸含量、SOD、POD活性、可溶性蛋白含量先上升后下降。经对几项生理指标的综合分析,认为东方山羊豆比敖汉苜蓿具较强的抗低温能力。

盐胁迫对东方山羊豆生理特性的影响

对东方山羊豆和肇东苜蓿2种牧草进行不同浓度NaCl胁迫处理,浓度梯度分别为50、100和150mmol/L,胁迫0、1、2、3和4d后取样,研究盐胁迫对东方山羊豆和肇东苜蓿脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、SOD和POD活性的影响。试验结果显示,东方山羊豆比肇东苜蓿具有相对较强的抗盐能力。

柳枝稷、新引1号东方山羊豆在山西的引种试验

针对山西省牧草资源短缺的问题,引进新引1号东方山羊豆和柳枝稷进行栽培试验。通过观测物候期、产草量、适应性、营养成分等,以期能找到适合该区栽种的高产优质牧草,结果表明,2种牧草均能完成生育周期,适应性强,产量高,品质好,可作为山西省牧草新品种作进一步研究。

东方山羊豆GoGID基因表达载体构建及紫花苜蓿转化

根据已经克隆得到的东方山羊豆赤霉素受体(GoGID)基因,扩增编码区cDNA。以pBI121为基础载体,采用酶切连接法,构建植物超表达载体pBI121-GoGID。酶切鉴定表明:目的基因已经正确插入载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl_2冻融法将重组载体转入农杆菌菌株中。以叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织培养法,转化紫花苜蓿(Medicage sativa),得到抗性苗。对载体携带的nptⅡ基因、GUS基因进行PCR检测均成阳性,表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。同时对转基因植株进行Southern-blot及RT-PCR检测,并均得到目的条带。本研究为进一步分析GoGID基因对紫花苜蓿生物量影响奠定了基础。

东方山羊豆GoMIPS双元表达载体的构建及鉴定

从东方山羊豆(Galega.orientalis L.)中克隆出的GoMIPS(肌醇-1-磷酸合成酶)基因序列设计合成1对带有NcoI和SpeI酶切位点的引物,用RT-PCR方法从东方山羊豆幼嫩叶片总RNA中扩增出GoMIPS基因的cDNA序列,经纯化后,克隆至pMD19-T载体上,构建pMD-MIPS的中间载体,测序鉴定。然后用NcoI和SpeI限制性酶对含有目的基因的pMD-MIPS和pCAMBIA1302空载体进行双酶切,通过酶切鉴定和测序分析表明,已成功构建了CaMV35S启动子驱动GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1302-MIPS。

山羊豆种质资源形态多样性分析

采用15个形态性状对43份山羊豆种质资源进行遗传多样性分析,结果表明,山羊豆种质资源遗传变异丰富,多样性指数为1.863,其中俄罗斯南部地区可能是山羊豆形态多样性的分布中心。基于形态性状的聚类分析把43份材料聚为5类,其中第1类15份资源的株高和主茎分枝数明显高于其他类,且叶量丰富,营养性状表现良好;结实性状中荚果长和百粒重较大,综合性状表现较好,可以从中筛选合适的材料作为引种驯化和育种的试验材料。

不同处理对东方山羊豆硬实种子萌发的影响

东方山羊豆种皮透性差,硬实率较高,常规播种难以萌发,试验以东方山羊豆种子为材料,探讨物理方法与化学方法对其硬实及萌发特性的影响。结果表明,热水处理、磨破种皮、浓硫酸处理均可破除硬实。热水处理下效果最好的为始温85℃时,种子的发芽率、发芽势及硬实率分别为31.67%、27.67%和69%。磨破种皮处理效果最好,发芽率、发芽势均达90%以上。浓硫酸处理30 min时发芽率升高至59.33%,发芽势56.67%。高锰酸钾处理1~6 h对破除种子硬实效果不显著。

基于UPLC-Q-Exactive-MS/MS和网络药理学方法探讨山羊豆抗非小细胞肺癌的药效成分及潜在作用机制

目的:研究山羊豆抗非小细胞肺癌的药效物质基础和潜在作用机制。方法:利用非小细胞肺癌A549细胞,给予山羊豆90%乙醇提取物及不同极性萃取物,比较各部位对A549细胞的增殖抑制率,筛选潜在活性部位,通过细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验研究山羊豆活性部位对细胞迁移活力的影响。运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UPLC-Q-Exactive-MS/MS)技术对筛选得到的部位的化学成分进行分析鉴定,利用网络药理学方法筛选抗非小细胞肺癌的核心靶点,在DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析,在微生信平台上进行可视化分析。使用Cytoscape软件建立成分-核心靶点-通路网络图,运用Autodock vina软件进行分子对接并应用Pymol软件作可视化处理,分析、预测作用机制。结果:山羊豆乙酸乙酯部位能够有效抑制A549细胞增殖和迁移,山羊豆碱、槲皮苷、阿福豆苷等15个成分为山羊豆抗非小细胞肺癌的潜在药效成分,网络药理学及分子对接结果表明,黄酮类成分与EGFR、HRAS、MAPK等靶点对接吻合度较好。结论:山羊豆抵抗非小细胞肺癌可能是通过多成分、多靶点起作用,该研究可为山羊豆抗肺癌功能的开发应用及质量评价提供科学依据。

东方山羊豆引种研究初报

1999年 1月从哈萨克斯坦共和国引进多年生优良豆科牧草东方山羊豆分别在不同地点进行了多点试种 ,并对其播种密度、播种深度、产草量、单株种子平均产量、营养成分、适口性进行了研究。