基于TLR/NF-κB通路探究蓬子菜总黄酮对动脉粥样硬化模型家兔的干预效果

目的分析蓬子菜总黄酮对动脉粥样硬化模型家兔主动脉组织中Toll样受体(TLR)/核转录因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法选取75只家兔,其中15只作为正常组,其余家兔建立动脉粥样硬化模型,建模成功后随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组15只。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予0.05 mg/kg、1.00 mg/kg、1.50 mg/kg蓬子菜总黄酮灌胃,模型组和正常组给予等体积生理盐水灌胃。采用酶联免疫吸附法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);采用放射免疫法检测6-酮-前列腺素(6-keto-PGF_(1α))、血栓素B_(2)(TXB_(2));采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测TLR/NF-κB通路蛋白表达量。结果高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组IL-6、IL-1α、TNF-α水平均高于正常组(P<0.05);高剂量组、中剂量组、低剂量组IL-6、IL-1α、TNF-α水平低于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组IL-6、IL-1α、TNF-α水平低于低剂量组(P<0.05);高剂量组IL-6、IL-1α、TNF-α水平低于中剂量组(P<0.05)。中剂量组、低剂量组、模型组6-keto-PGF_(1α)水平均低于正常组,TXB_(2)水平均高于正常组(P<0.05);高剂量组、中剂量组、低剂量组6-keto-PGF_(1α)水平高于模型组,TXB_(2)水平低于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组6-keto-PGF_(1α)水平高于低剂量组,TXB_(2)水平低于低剂量组(P<0.05);高剂量组6-keto-PGF_(1α)水平高于中剂量组,TXB_(2)水平低于中剂量组(P<0.05)。中剂量组、低剂量组、模型组TG、TC、LDL-C水平均高于正常组,HDL-C水平均低于正常组(P<0.05);高剂量组、中剂量组、低剂量组TG、TC、LDL-C水平低于模型组,HDL-C水平高于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组TG、TC、LDL-C水平低于低剂量组,HDL-C水平高于低剂量组(P<0.05);高剂量组TG、TC、LDL-C水平低于中剂量组,HDL-C水平高于中剂量组(P<0.05)。中剂量组、低剂量组、模型组TLR3、NF-κB p62水平高于正常组(P<0.05);中剂量组、低剂量组TLR3、NF-κB p62水平低于模型组(P<0.05);高剂量组、中剂量组TLR3、NF-κB p62水平低于低剂量组(P<0.05)。结论蓬子菜总黄酮可能通过调控TLR/NF-κB信号通路中相关重要信号传导分子的蛋白表达,发挥改善动脉粥样硬化局部炎症的作用,且表现为剂量依赖。

RP-HPLC法测定不同产地蓬子菜中二个黄酮类成分的含量

目的:测定10个产地蓬子菜中喇叭茶苷和香叶木苷的含量,建立蓬子菜中黄酮类成分含量测定的方法;方法:HPLC法,色谱柱:Hypersil ODS2 5μm(200mm×4.6mm i.d);流动相:甲醇-水-冰醋酸(体积比30:70:0.20);检测波长:340nm.结果:香叶木苷在0.601 0～1.510 μg(r=0.999 9),喇叭茶苷在0.098～0.249 8μg(r=0.996 2)与峰面积线性关系良好.结论:这两个黄酮类成分在10个产地中含量比较稳定,本法简单可行,准确性好,重现性高,是蓬子莱中黄酮类成分含量测定的有效方法.

蓬子菜中香叶木苷对华法林在大鼠体内药动学和药效学影响的研究

目的研究蓬子菜中香叶木苷对单剂量和稳态华法林在大鼠体内药动学和药效学的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为4组,每组6只。单剂量华法林组给予0.5%CMC-Na液灌胃,单剂量华法林+香叶木苷组给予香叶木苷药液80.00 mg/kg灌胃,均连续7 d;第8天,2组再分别给予华法林药液0.25 mg/kg灌胃1次。华法林稳态组、华法林稳态+香叶木苷组每天给予华法林药液0.25 mg/kg灌胃,连续8 d;第5天起,华法林稳态组同时给予0.5%CMC-Na液灌胃,华法林稳态+香叶木苷组同时给予香叶木苷药液80.00 mg/kg灌胃。给药后于不同时间点采集血浆样品,测定血药浓度,DAS 2.0计算主要药动学参数(C_(max),t_(1/2),AUC_((0-t)),AUC_((0-∞)));测定凝血酶原时间(PT),计算国际标准化比值(INR)。结果单剂量华法林+香叶木苷组的C _(max),t_(1/2),AUC_((0-t)),AUC_((0-∞))和血药浓度均较单剂量华法林组有所升高,但2组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);单剂量华法林+香叶木苷组PT明显长于单剂量华法林组(P<0.05),INR明显高于单剂量华法林组(P<0.05)。华法林稳态+香叶木苷组联合用药后第1,2,3天华法林的血药浓度均较华法林稳态组有所升高,但2组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);华法林稳态+香叶木苷组PT明显长于华法林稳态组(P<0.05),INR明显高于华法林稳态组(P<0.05)。结论香叶木苷与华法林联合应用可延长PT,升高INR,二者联合应用时应监测PT和INR,以免发生出血。

蓬子菜的化学成分

目的对茜草科拉拉藤属植物蓬子菜(Galium verumL.)全草的体积分数为95%的乙醇溶液提取物进行分离并鉴定。方法采用硅胶柱色谱等方法分离化学成分,1H-NMR、13C-NMR等方法进行结构鉴定。结果从体积分数为95%的乙醇溶液提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为2,5-二羟基-1-甲氧基-蒽醌(2,5-dihydroxy-1-methoxyanthraquinone,1)、1-羟基-2-羟甲基-3-甲氧基-蒽醌(1-hydroxy-2-hydroxymethy-3-methoxyanthraquinine,2)、环烯醚萜内酯(morindolide,3)、水晶兰苷(monotropein,4)、去乙酰车叶草苷酸(deacetylasperulosidic acid,5)、6α-羟基-京尼平苷(6α-hydrox-ygeniposide,6)。结论化合物1、2、3为从本属植物中首次分离得到。

药理效应法测定蓬子菜总黄酮在大鼠体内的药动学参数

目的:采用药理效应法测定蓬子菜总黄酮在大鼠体内的药动学参数。方法:以谷胱甘肽过氧化物酶活力升高率作为药理效应评价指标,测定蓬子菜总黄酮在大鼠体内的药物动力学参数。结果:低、中、高不同剂量蓬子菜总黄酮大鼠口服给药后t_(1/2α)分别为1.23,0.93,0.97 h;t_(1/2β)分别为11.84,12.06,16.51 h;AUC_(0-t)分别为143.43,206.25,275.92 mg·L^(-1)·h^(-1);AUC_(0-∞)分别为181.02,231.74,295.06 mg·L^(-1)·h^(-1);达峰T_(max)为2 h。结论:蓬子菜总黄酮口服给药后,在大鼠体内的药物动力学过程符合二室模型,且在给药剂量范围内呈线性动力学特征。

蓬子菜有效成分对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎症损伤的保护作用

目的:研究蓬子菜中总黄酮和木犀草苷对脂多糖(LPS)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症损伤的保护作用。方法:以HUVEC为研究对象,用CCK-8检测总黄酮及木犀草苷对HUVEC增殖的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度LPS对HUVEC细胞周期的影响;酶联免疫分析法检测总黄酮及木犀草苷对LPS诱导的HUVEC炎症因子生成的影响;实时定量PCR法检测HUVEC中P-选择素E-选择素mRNA水平。Western blot法测NF-κB,P-IκB蛋白表达。结果:药物浓度在6.25、12.5、25μg/m L时细胞增殖率最大;总黄酮及木犀草苷能明显下调LPS诱导的炎症因子和黏附分子的分泌,同时也降低了P-选择素E-选择素的表达,NF-κB,P-IκB蛋白表达量。结论:LPS对HUVEC有抑制作用呈剂量、时间依赖性,给予总黄酮和木犀草苷后,损伤有明显改善。

蓬子菜中活性成分DXG在大鼠体内的药物动力学研究

目的:研究蓬子菜活性成分DXG在大鼠体内的药物动力学。方法:采用HPLC法测定大鼠血浆中药物浓度,利用3P97药动学软件处理数据。结果:大鼠静脉注射不同剂量DXG后,DXG的血药浓度-时间变化符合二室模型,分布半衰期分别为3.57,3.70,3.48min(RSD2.51%),消除半衰期分别为34.10,37.99,32.98min(RSD6.13%);AUC值分别为53.62,107.74,242.27mg/min/L。结论:不同剂量DXG静脉注射后,在大鼠体内的药物动力学符合二室模型,且在给药剂量内呈线性药动学特征。

蓬子菜总黄酮颗粒剂的制备工艺研究

目的:优选蓬子菜总黄酮颗粒剂最佳成型工艺条件并建立其质量控制方法。方法:在对辅料筛选的基础上,采用正交试验,以颗粒的粗粒及细粉总和的百分率为指标,优选蓬子菜总黄酮颗粒成型工艺。采用TLC对蓬子菜总黄酮颗粒剂进行鉴别;采用UV法测定颗粒剂中总黄酮的含量。结果:最佳成型工艺为浸膏粉:辅料(糊精:甘露醇=1∶1)=1∶1.5比例混合,95%乙醇为润湿剂,所制颗粒各项指标均符合《中国药典》(2010年版一部附录I C)颗粒剂项下相关规定。TLC鉴别图谱斑点清晰;总黄酮在0.008～0.024mg/mL范围内线性关系良好。结论:该成型工艺稳定可控,建立的定性及含量测定方法可有效控制该颗粒剂质量。

药用植物蓬子菜的有效部位、活性成分及指纹图谱研究

从药用植物蓬子菜的有效部位，分离得到3个有机酸化合物和6个黄酮类化合物，分别为绿原酸、咖啡酸、水杨酸、芸香苷，喇叭茶苷，香叶木苷，香叶木素（2→1）葡萄阿拉伯糖苷，异槲皮苷，香叶木素7-O-β-D-葡萄糖苷。并对十个不同产地的蓬子菜进行了指纹图谱研究，确定了19个共有峰，分离所得到的大部分活性化合物出现在指纹图谱中。

蓬子菜中香叶木苷对急性血瘀及血管内皮功能影响的实验研究

目的:研究蓬子菜活性成分香叶木苷对急性血瘀模型大鼠凝血功能及血管内皮功能的作用。方法:采用皮下注射盐酸肾上腺素复合冰水浴制备大鼠急性血瘀模型,通过测定凝血四项研究香叶木苷对血瘀大鼠凝血功能的影响,并通过测定血液中可溶性细胞间黏附因子-1(s ICAM-1)、可溶性血管细胞黏附因子-1(s VCAM-1)的含量,研究香叶木苷对血管内皮功能的影响。结果:与模型组比较,香叶木苷能明显改善血瘀大鼠凝血功能,延长凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT),降低纤维蛋白原(FIB)及细胞黏附因子s ICAM-1、s VCAM-1的含量。结论:香叶木苷可改善急性血瘀大鼠凝血功能,有效减少细胞黏附因子的释放,具有抗凝血功能,并能改善血管内皮功能。

蓬子菜总黄酮对D-半乳糖致过氧化损伤大鼠SOD、MDA和GSH-Px水平的影响

目的:探究FGVL对D-半乳糖致过氧化损伤大鼠的保护作用。方法:采用腹腔注射D-半乳糖建立过氧化损伤模型后,分别灌胃给予FGVL低、中、高剂量和维生素E,记录大鼠体质量变化。末次给药后取血,并取出心、肾、脾、肝和脑称重,同时进行血浆、肝脏和脑组织中T-SOD、MDA和GSH-Px的测定。结果:给予FVGL不同剂量后,D-半乳糖致过氧化损伤大鼠的一般状态均明显改善,行动敏捷,毛色有光泽,体质量呈逐渐上升趋势,且与空白组相比无显著差异(P>0.05)。血浆和肝脏、脑组织中的T-SOD和GSH-Px水平均不同程度增加,而MDA的水平降低。结论:FGVL可通过降低活性氧自由基的含量,改善D-半乳糖致过氧化损伤大鼠的老化状态,提高其抗氧化能力,并维持各脏器指标正常,表明FVGL对衰老所致的氧化损伤具有良好的保护作用。

蓬子菜中香叶木苷抗血栓形成作用的实验研究

目的:研究蓬子菜活性成分-香叶木苷的抗凝血和抗静脉血栓作用。方法:通过结扎大鼠下腔静脉造成下肢静脉血栓模型,通过对凝血四项指标:凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)的观察,及下腔静脉在光镜下的组织学变化,研究香叶木苷对血栓大鼠凝血功能的影响。结果:香叶木苷90、180、360mg/kg能明显延长PT和TT时间;180、360mg/kg能明显延长APTT时间;90、180、360mg/kg能显著降低FIB含量(P<0.05或P<0.01)。光镜观察香叶木苷高、中、低剂量组均能明显抑制大鼠下腔静脉血栓形成,保护血管内皮细胞,且中剂量组与阿司匹林组作用相当。结论:香叶木苷具有抗凝血和抗静脉血栓形成作用。

蓬子菜中酚酸类成分的分离与鉴定

对茜草科拉拉藤属植物蓬子菜(Galium verum L)全草的乙醇[Ф(乙醇)=95%]提取物进行分离和鉴定.经反复纯化制备化合物,并根据化合物的理化性质分析、波谱解析、对照品比较及与文献报道对比鉴定化合物的化学结构.从蓬子菜全草的乙醇[Ф(乙醇)=95%]提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为芥子酸(1)、丁香酸(2)、咖啡酸丁酯(3)、原儿茶酸(4)、4-羟基苯甲酸(5)、咖啡酸(6)和绿原酸(7),化合物1～5为从该属植物中首次分离得到.

蓬子菜香叶木苷对大鼠细胞色素P450酶活性影响

考察香叶木苷对大鼠细胞色素P450酶活性的影响.SD大鼠12只,雌雄各半,随机分为2组,分别为空白对照组与香叶木苷给药组(300 mg/kg),连续灌胃7 d,于给药结束后次日制备肝微粒体,采用CO还原差示光谱法、紫外分光光度法测定大鼠细胞色素P450酶的质量浓度.香叶木苷给药组肝微粒体酶质量浓度明显高于空白对照组,组间差异P<0.05,差异显著.香叶木苷对大鼠肝微粒体P450酶具有诱导作用.

蓬子菜有效部位总黄酮的急性毒性实验研究

目的:对蓬子菜总黄酮安全性进行初步评价。方法:小鼠灌胃给药,通过预实验判断测定LD50的可能性,并据此测定LD50或MTD。结果:MTD测定结果显示,小鼠口服蓬子菜总黄酮最大耐受量相当于60kg体质量成人临床日用量的132倍。结论:蓬子菜总黄酮的急性毒性很小,安全性较高。

蓬子菜化学成分研究

对茜草科拉拉藤属植物蓬子菜(Galiumverum L.)全草的95%乙醇提取物进行分离并鉴定。经反复纯化制备化合物,并根据化合物的理化性质分析、波谱解析、对照品比较及与文献报道对比鉴定化合物的化学结构。从95%乙醇提取物中分离得到4种化合物,分别鉴定为异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、山柰酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、芦丁(4)。化合物1～3为从该属首次分离得到。

药用植物蓬子菜不同药用部位中芦丁及绿原酸的含量比较

[目的]采用HPLC-DAD比较蓬子菜不同药用部位中芦丁、绿原酸的含量。[方法]用HPLC-DAD梯度洗脱。比较蓬子菜根、茎、叶、花中芦丁和绿原酸含量。[结果]芦丁、绿原酸质量浓度与峰面积呈良好线性关系,线性范围分别是：芦丁0.024 3-1.950 0μg,绿原酸0.132 5-10.600 0μg;芦丁回收率101.02%,绿原酸回收率101.65%;蓬子菜中芦丁和绿原酸的含量花中最高,根中最低。[结论]HPLC-DAD法分离度好、稳定,可作为蓬子菜的质量控制方法;芦丁和绿原酸的含量因药用部位的不同存在差异。

蓬子菜中活性成分DXG大鼠血浆蛋白结合率测定

考察蓬子菜中活性成分DXG在大鼠血浆中的蛋白结合情况.采用平衡透析法测定DXG的大鼠血浆蛋白结合率.建立DXG透析外液和透析内液的HPLC测定方法,求得高、中、低不同质量浓度下,DXG的血浆蛋白结合率分别为29.39%,29.85%,32.94.该方法专属性强,灵敏度高,符合生物样品测定要求要求.DXG的大鼠血浆蛋白结合率较低,且不具有质量浓度依赖性.

原位灌注模型考察蓬子菜活性成分的肠吸收

为考察影响蓬子菜中活性成分肠吸收的因素.采用大鼠原位灌注模型及HPLC测定方法,以活性成分DXG的肠吸收转化率(A%)、吸收速率常数(ka)、吸收半衰期(t1/2)为评价指标,考察吸收部位与pH值对DXG肠吸收的影响.结果表明ka从大到小为十二指肠>回肠>结肠>空肠;(A%)从大到小为十二指肠>回肠>结肠>空肠.循环液pH=6.0时DXG的ka和A%明显大于pH=4.0和pH=8.0.DXG在十二指肠吸收较好,pH值对肠吸收影响较小,DXG在大鼠肠道内的吸收并非单纯被动扩散.

基于GC-MS的蓬子菜超临界CO_2萃取物的成分分析

[目的]分析蓬子菜(Herba Galii Veri)的超临界CO2流体萃取成分,为进一步开发蓬子菜中成药提供科学依据。[方法]用超临界CO2流体萃取技术对蓬子菜全草进行提取。用GC-MS技术分析超临界CO2萃取物的化学成分。[结果]确定了45个峰的成分,其相对含量占超临界萃取物总量的63.970%以上,主要化学成分有棕榈酸11.132%,β-谷甾醇7.770%,亚油酸5.553%,菜油甾醇3.334%,二十九烷3.179%,油酸3.067%,邻苯二甲酸二异辛酯2.770%,三十烷1.518%,植物醇1.270%,硬脂酸1.239%,豆甾醇1.372%,1-十九烯1.004%等。[结论]化合物均为首次从该植物中分析得到。