5个赤芝菌株生产性能鉴定研究

为了在莆田地区发展灵芝种植,通过对不同来源的5株赤芝进行段木季节性栽培,观察不同菌株的菌丝生物学特性、子实体和孢子粉产量等生产性能。结果显示:5个赤芝菌株中,高邮红芝(GY)生物学特性最佳,满袋时间为72.2 d,每平方米干芝平均产量为1931.20 g,平均干孢子粉304.62 g,3个生产性能特性都优于其他4个菌株,且都达到极显著的水平。莆田地区野生灵芝资源不多,但气候条件适宜赤芝种植,其中高邮红芝生产性能最佳。

不同灵芝孢子粉产品的多糖成分比较

五种市售的灵芝(Ganoderma lingzhi)孢子粉产品被用于评价其多糖含量和成分,采用苯酚-硫酸法测定五种灵芝孢子粉产品的多糖含量、高效液相色谱分析其多糖指纹图谱、离子色谱分析灵芝孢子粉多糖的单糖组成。根据结果,不同来源的灵芝孢子粉总糖含量在2.05%~8.82%之间、多糖含量在1.05%~1.87%之间,而且多糖的种类及其水解后单糖组成也有明显的差异,结果表明市售灵芝孢子粉产品的多糖有显著不同。

不同生长阶段灵芝子实体和孢子粉活性成分分析

探究不同生长阶段灵芝子实体和孢子粉的活性成分变化,为灵芝子实体和孢子粉最佳采收期的确定提供理论依据,也为消费者选择相关灵芝产品提供科学参考。对梅州本地主栽品种‘梅灵1号’灵芝生长发育期间4个阶段的子实体、孢子粉弹射期间3个阶段的孢子粉进行多糖、三萜及甾醇、腺苷、蛋白质、脂肪等活性成分检测。结果显示,灵芝子实体中,菌蕾期子实体多糖、三萜及甾醇、蛋白质、脂肪含量最高,分别为0.65%、2.2 g/100 g、25 g/100 g、3.1 g/100 g,高于子实体其他时期;成熟期子实体多糖、三萜及甾醇、蛋白质、脂肪含量均高于弹粉后,但腺苷含量随着子实体的成熟逐渐升高(从低于检测下限10 mg/kg到99.2 mg/kg)。与灵芝子实体相比,不同阶段收集的孢子粉活性成分含量差别不大,多糖含量0.7%~0.85%、三萜及甾醇含量12.2~14.0 g/100 g、腺苷含量156~214 mg/kg、蛋白质含量16.1~16.6 g/100 g、脂肪含量31.7~34.2 g/100 g,其中头道孢子粉脂肪含量最高(34.2 g/100 g),二道孢子粉多糖、腺苷含量最高,(分别为0.85%、214 mg/kg),产孢40天收集的孢子粉三萜及甾醇含量最高(13.5 g/100 g)。本试验条件下,灵芝子实体菌蕾活性成分含量高,可以加以利用;子实体弹粉后多糖、蛋白质含量有所下降,三萜及甾醇含量没有差异,若不采收孢子粉,可选择在成熟期弹粉前采收子实体;头道孢子粉、二道孢子粉及产孢40天孢子粉活性成分含量没有差异;孢子粉(破壁)活性成分含量显著高于子实体,消费者可根据实际需求选购产品。

8个灵芝菌株农艺性状、产量及有效成分比较分析

以8个灵芝菌株为试验材料进行代料栽培试验,研究其菌包成活率、高温烂棒率、农艺性状、现蕾时间、产粉时间、孢子粉采收时间、孢子粉及子实体产量;检测孢子粉中有效成分灵芝多糖和三萜含量。数据分析结果表明,孢子粉产量最高为美芝,其次是角芝、沪农1号;子实体产量最高为韩芝,其次是日芝、泰山。孢子粉中三萜含量沪农1号最高,其次是113和美芝;孢子粉中灵芝多糖含量113最高,其次是沪农1号和美芝。试验筛选出美芝、角芝、113和沪农1号4个育粉灵芝菌株可用于灵芝工厂化栽培。

HPLC-ELSD测定灵芝孢子粉及产品中游离脂肪酸的含量

为准确测定灵芝孢子粉产品的酸价,阐明影响酸价的关键因素,本试验建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)分析方法测定孢子油中游离脂肪酸的含量。通过优化色谱条件,建立了亚油酸、棕榈酸和油酸的HPLC的定量测定方法。该方法精密度、重复性和稳定性好,可用于灵芝孢子粉、孢子油及其相关产品中亚油酸、棕榈酸和油酸成分的定量测定。与国标化学法测定的结果比较,两种方法的匹配度较好,HPLC-ELSD法灵敏度高,可以测定不同脂肪酸的含量。通过比较分析发现,贮存时间对破壁灵芝孢子粉脂肪酸影响最大,同时产地和采收时间也影响酸价的大小。对8种不同品牌市售灵芝孢子油产品的脂肪酸含量测定,发现脂肪酸含量相差较大,其中含量最高的为(99.81±10.21)mg/g,最低的为(1.90±0.12)mg/g。因此新建立的HPLC-ELSD法可精确定量灵芝孢子粉中游离脂肪酸,为市场上灵芝孢子类产品的质量控制提供科学依据。

灵芝孢子粉中核苷类成分分析

本文利用高效液相色谱方法(HPLC)同时对灵芝孢子粉中的15种核苷类成分的含量进行测定。采用Ultimate AQ-C18(4.6mm×250mm,5?m)色谱柱,以甲醇和水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0m L/min,检测波长259nm,柱温30℃,进样量10μL。方法学考察结果表明,该方法准确度高,稳定性、精密度、重现性好,适用于灵芝孢子粉中核苷类成分的测定分析。运用建立的方法对不同破壁时间、不同采收时期龙泉、奉化、大别山、黄山4个产区的灵芝孢子粉中的15种核苷类成分的含量进行测定。结果表明破壁处理对灵芝孢子粉中核苷类成分提取率的影响不大,不同产地的灵芝孢子粉中核苷类成分的组成和含量具有显著差异,且孢子粉中的核苷含量随着产粉时间的延长有所增加。各待测样品中均含有胞嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、腺苷等成分,其中尿苷、鸟苷、腺苷3种核苷的含量占总量的比例在待测样品中均达到70%以上,为灵芝孢子粉中的主要核苷类成分。

基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS技术的灵芝孢子粉化学成分分析

采用极性不同的6种溶剂(石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇和水)、按索氏提取法逐级萃取破壁灵芝孢子粉,并同时运用气相色谱-质谱联用(GC/MS)和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)技术对各萃取物进行化学成分分析与鉴定。结果表明:GC/MS共鉴定出101种化合物,其中酸类10种、酯类40种、醇类7种、酮类6种、酚类2种、烃类18种、甾类9种和杂原子化合物9种;UPLC-Q-TOF/MS共推断出40种化合物,其中倍半萜类1种、二萜类1种、三萜类9种、生物碱类4种、酰胺类7种、有机酸类9种以及其他化合物9种。两种测定方法间共有化合物仅1种,仅存在于5种有机溶剂(石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和甲醇)萃取物之一的化合物共105种,2种或2种以上萃取物共有的化合物共31种,实验方法较好地实现了样品中化合物组分的充分分离,扩大了可检测化合物的范围。研究结果为灵芝孢子粉中化学成分的系统分析与鉴定、及灵芝孢子粉的化合物谱图库的完善提供了基础资料,为相关药理、药效分析及灵芝的药用模式真菌研究提供参考。

HPLC法测定灵芝孢子粉中三萜含量

为准确测定灵芝孢子粉中三萜的含量,运用高效液相建立适合孢子粉的分析测定方法。通过对前处理条件的优化,确定40%乙醇为孢子粉中等极性三萜酸类的最佳提取溶剂,浓缩倍数是子实体提取条件的50倍。通过色谱柱和洗脱条件的优化,建立了包括灵芝酸I、灵芝烯酸C、灵芝酸C2等13种标准品测定方法,方法学考察显示该分析方法精密度、重复性、稳定性的RSD值均小于5%,可以用于灵芝孢子粉中三萜类成分的定量检测。通过5组样品的分析发现,灵芝酸C6、灵芝酸G、灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝酸F是灵芝孢子粉中的主要三萜类成分,其中灵芝酸A含量最高,平均占样品三萜总量的比例达19.71%;三萜类成分的溶出量与是否破壁没有相关性。三萜类成分在灵芝孢子粉和灵芝孢子油产品中的含量非常低,孢子粉的三萜含量为14.24–99.70mg/g,仅为子实体的1/100,灵芝孢子油中三萜含量也均低于50mg/g,因此三萜类成分不适合作为灵芝孢子粉及其相关产品的定量检测指标。

灵芝孢子粉中脂溶性成分分析方法的建立

运用高效液相建立灵芝孢子粉中脂溶性成分的分析测定方法。通过色谱柱、洗脱条件、ELSD参数的优化,建立了12种脂溶性成分的测定方法,结果表明,该方法简单、准确、稳定,可以实现孢子粉中甘油三酯、脂肪酸、甾醇三类脂溶性成分的同时提取、分析;破壁孢子粉中脂溶性成分为301.49–397.37mg/g,孢子油产品中脂溶性成分的含量为626.00–713.07mg/g,远高于三萜含量;1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯、甘油三油酸酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯是主要的脂溶性成分,脂肪酸以不饱和脂肪酸亚油酸及油酸为主,甾醇中麦角甾醇含量最高。研究结果明确了灵芝孢子粉中脂溶性成分的物质基础,为深入研究其活性成分、全面评价孢子粉质量提供了依据。