基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS的灵芝不同生长阶段的成分分析

[目的]探究灵芝(Ganoderma lucidum)不同生长阶段的成分差异。[方法]使用气相色谱-质谱检测法(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-offlight mass spectrometry,UPLC-QTOF/MS)技术,选用ACQUITY超高效液相色谱仪HSS T3色谱柱在Waters超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)系统上对灵芝原基、产孢前和产孢后的子实体进行成分分析与鉴定。[结果]GC-MS共检测到24种成分,其中醛类8种、酯类4种、烃类1种、酸类1种、醇类1种、酮类2种、胺类2种、吡嗪类1种、咪唑类1种、吡咯类1种、呋喃类1种、酚类1种。UPLC-QTOF/MS共检测90种成分,最主要的成分三萜类共有67种,此外还包括脂肪酸类8种、氨基酸及其衍生物类3种、苷类2种、维生素1种、生物碱类2种、有机酸类2种、糖类2种、萜1种、杂萜1种、甾体1种。共有73种成分在原基中检出,其中三萜类成分54种;72种成分在产孢前子实体中检出,其中三萜类成分57种;52种成分在产孢后子实体中检出,其中三萜类成分有42种。[结论]灵芝不同生长阶段成分存在明显差异,本研究结果为灵芝不同时期的化学成分的分析与鉴定,以及化学物谱图的完善提供了基础数据,为相关药理、药效分析提供了有效参考。

基于GC-Q-Exactive-MS的灵芝孢子油化学成分定性分析

目的:利用高分辨气相色谱-四级杆-静电轨道阱质谱法(GC-Q-Exactive-MS)定性分析灵芝孢子油的化学成分。方法:采用GC-Q-Exactive-MS,在电子轰击(EI)源下获取化合物的全扫描质谱数据,通过总结脂肪酸类、萜类、甾醇类及醛类化学成分的质谱裂解规律,并检索NIST、MassBank、HMDB、PubChem在线数据库及查阅相关文献,对灵芝孢子油的各类化学成分进行鉴定。结果:从灵芝孢子油中共鉴定了22个化学成分,包括3个脂肪酸类、4个萜类、4个甾醇类、4个醛类及7个其他类化合物。结论:研究结果为灵芝孢子油质量控制和中药弱极性化学成分定性分析提供了参考。

破壁灵芝孢子中生物碱和脂溶性成分GC/MS分析

采用气相色谱-质谱联用(GC/MS)的方法对破壁灵芝孢子粉中的生物碱和乙醚提取物进行了化学成分的分析.实验中,灵芝孢子粉的乙醚提取物经气相色谱共分离出39个峰,通过谱图检索和谱图解析,鉴定出24种化合物.有4种化合物是通过人工的谱图解析及其特征峰断定为胺醇类化合物.24种化合物中主要为烃、醇、醛、酯、酮等,但其相对含量均较低,绝大多数是脂类物质.对灵芝孢子粉的生物碱的GC/MS分析,没有检测到生物碱的特征峰.

超微粉碎后超临界CO_2萃取灵芝孢子挥发油组分的GC-MS分析

采用扫描电子显微镜观察比较原木灵芝孢子超微粉碎后的破壁形态,应用超临界CO2流体萃取技术从破壁孢子粉中提取分离孢子挥发油。气相色谱-质谱联用分析其组分,结果表明超微粉碎后超临界萃取得到的灵芝孢子挥发油化学成分较为丰富。分离得到29个峰,共鉴定出4类25种成分,脂肪类17种,萜类3种,芳香类2种,杂环类3种;有些成分如α-愈创烯(倍半萜)、τ-杜松烯(单萜)等均首次发现于灵芝孢子;此外,1,3,5-环庚三烯(、1α,2β,4α,5β)-四氢-3-氧杂三环辛烷及2-氯-乙基岩芹酸酯等稀有脂肪类化合物也是首次从灵芝孢子中检出。

GC-MS分析红芝脂肪酸成分

用ＧＣ—ＭＳ分析了红芝子实体及菌丝体的脂肪酸成分．结果表明红芝子实体及菌丝体的氯仿提取物的酸性部分和中性部分均含有多种脂肪酸，但它们的含量存在差异．

灵芝菌丝体挥发油的GC/MS分析及在卷烟中的应用

为开发新型天然菌物烟用香料,采用同时蒸馏萃取法提取灵芝菌丝体挥发油,用GC/MS法对挥发油成分进行了分离鉴定,并用该挥发油进行卷烟加香试验。结果表明:①从灵芝菌丝体挥发油中共鉴定出39种挥发性成分,主要有亚油酸、棕榈酸、芳樟醇、大茴香醛、糠醛及吡啶等;②灵芝菌丝体的挥发油可以增加烟气的回甜感,降低因烟气粗糙带来的干燥感。

GC-MS与GC-MS/MS在灵芝农药残留分析中的应用

目的比较GC-MS和GC-MS/MS在灵芝农残分析中性能的差异,并考察时间锁定库对未知农药样品的定性筛查能力。方法灵芝样品加入一定量的农药标准品,分别采用GC-MS和GC-MS/MS进行分析,比较两种仪器的稳定性和灵敏度,同时采用GC-MS对含有未知农药的灵芝样品进行定性筛查和定量测定。结果在测试10 ppb以下低浓度化合物时,使用GC-MS/MS有较好的峰形和响应,不会受基质的干扰,而使用GC-MS时目标化合物会部分受基质干扰。研究还采用时间锁定库对68种农药进行了系统筛查。结论气质联用可以较好地进行灵芝农残的分析,其包含的时间锁定库可在缺少相应标准品的情况下,对各种农药成分进行定性筛查。本研究也为中药种植、生产企业准备2015年版《中国药典》有关中药安全性指标检测提供一些思路与参考。

海南10种市售灵芝水分及指标成分比较研究

目的:研究海南常见的10种市售灵芝质量差异,为地方药材标准起草奠定基础,为进一步开发灵芝提供参考。方法:购买海南常见的10种市售灵芝共30批,分别进行外观性状描述,再参考中国药典(2020版)灵芝标准项下的检验方法,适当优化后,测定灵芝中的水分、三萜和甾醇含量,作为评价灵芝质量的主要指标。结果:方法精密度RSD为1.9%,低、中、高浓度的加标回收率分别为96.4%、95.2%、98.3%,测定灵芝供试品,有1批水分超过17.0%,有4批三萜及甾醇含量低于0.50%。结论:中国药典标准只收录了紫芝和赤芝,其他市售灵芝品种起草标准时可参考药典标准适当修改限度范围。政府应加强监管,逐步规范灵芝市场,修订完善地方药材质量标准,以便于进一步开发和利用灵芝资源。

食药两用物质天麻、灵芝的外源性污染物分析

测定食药两用物质天麻、灵芝的外源性污染物,进行安全性风险评估。采用酸碱滴定法测定二氧化硫残留量,微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定7种重金属铬、铜、砷、镉、铅、汞和钡含量,气相色谱质谱联用法测定44种农药残留量,并利用内梅罗综合污染指数法评价重金属污染情况。15批天麻样品中二氧化硫检出率100%,超标率100%,25批灵芝样品检出率12%,无超标现象。天麻和灵芝中重金属含量按中药材属性判定时,合格率100%,按食品属性参照国家安全食品标准判定时,15批天麻中Cr超标11批,25批灵芝样品中Pb超标1批,As超标2批,Cr超标14批;内梅罗综合污染指数显示,天麻和灵芝中轻度以上污染率为73%和40%。灵芝中共检出毒死蜱、联苯菊酯和百菌清3种农药,均符合相关限量要求,天麻样品未检出农药。天麻和灵芝均存在外源性污染风险,天麻中二氧化硫和重金属超标,灵芝有农药超标的风险,研究可为食药两用类物质开展安全性风险评估及制定限量标准提供参考和依据。

紫外-可见分光光度法测定灵芝片中多糖、三萜及甾醇含量

目的建立测定灵芝片中多糖、三萜及甾醇含量的紫外-可见分光光度(UV)法。方法采用硫酸蒽酮显色法和香草醛冰醋酸显色法,分别测定灵芝片中的多糖、三萜及甾醇含量。结果 5批灵芝片多糖含量为0.94%~1.70%,平均1.38%;三萜及甾醇含量为0.58%~0.99%,平均0.73%。结论该方法简单、可行,可用于测定灵芝片中多糖、三萜及甾醇含量,对于提高灵芝片的质量标准有一定意义。

灵芝功能成分酸奶营养品质与风味物质分析

以灵芝酸、灵芝多糖和脱脂乳为原料,制备灵芝多糖酸奶和灵芝酸酸奶,采用固相微萃取-气相色谱-质谱(solid-phase micro extraction-gas chromatography-mass spectrometry,SPME-GC-MS)联用技术对不同灵芝功能成分添加的酸奶的挥发性风味物质进行分析。结果表明,与空白对照酸奶相比,灵芝多糖酸奶和灵芝酸酸奶乳酸活菌数分别增加3.1倍和1.5倍,灵芝多糖可显著促进嗜热链球菌、植物乳杆菌增殖生长。经SPME-GC-MS测定,空白对照酸奶中检测出24种挥发性风味化合物,质量分数0.12%灵芝多糖酸奶中检测出37种挥发性风味化合物,质量分数0.09%灵芝酸酸奶中检测出30种挥发性风味化合物,3种酸奶的风味特征为酮、醛、酸、醇、酯类等化合物综合作用结果。与空白对照酸奶相比,灵芝多糖酸奶中酮类、醛类、醇类相对含量降低14.15%、3.00%、10.35%,酯、烃类相对含量提高14.01%、10.42%;灵芝酸酸奶中酮、酸、醇类化合物相对含量分别降低4.78%、2.22%、8.93%,醛、酯类相对含量增加5.31%、10.61%。结果表明灵芝酸、灵芝多糖酸奶中风味物质种类增加,功能品质提高。

菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油中脂肪酸组成的比较研究

利用气相色谱法,对菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油中脂肪酸组成、不饱和脂肪酸含量等进行了比较研究。结果发现两者脂肪酸GC指纹图谱极为相似(脂肪酸组成基本相同),说明了菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油一样有同样的开发价值,但是脂肪酸含量不同,菌草灵芝孢子油中亚油酸和油酸占55.61%,不饱和脂肪酸占61.15%;段木灵芝孢子油中亚油酸和油酸占49.87%,不饱和脂肪酸占54.88%。而且两者的外观、气味略不同。

不同菌草基质栽培灵芝多指标质量评价

【目的】以水溶性浸出物、灵芝多糖肽、灵芝酸、灵芝甾醇、单糖组成和分子量特征图谱为指标综合评价不同菌草基质栽培灵芝的品质。【方法】采用HPLC法测定多糖肽、灵芝酸、甾醇含量和单糖组成,运用统计学方法比较不同基质栽培灵芝的差异及其相关性。【结果】不同栽培基质的水溶性浸出物含量为14.21%~17.35%,灵芝多糖肽含量为3.80%~6.63%,灵芝酸总量为0.24%~0.53%,甾醇含量为31.43~69.16μg·g^(-1);主成分分析筛选出2个主成分,累计方差贡献率84.63%;相关性分析显示浸出物与活性成分呈正相关;单糖组成主要是葡萄糖和少量甘露糖;分子量特征图谱标定了6个共有峰,组间相似度大于0.98。【结论】不同基质栽培灵芝的活性物质含量存在显著差异,其中灵芝多糖肽和灵芝酸可作为灵芝质量评价重要指标;类芦、芦竹和五节芒栽培灵芝富含活性成分,这为科学利用菌草栽培灵芝提供参考。

富硒灵芝多糖改善高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝大鼠症状

目的探讨富硒灵芝多糖对非酒精性脂肪肝病大鼠SREBP-1c及ACCα表达的影响。方法 120只SD大鼠随机分为正常组、高脂饮食组、多烯磷脂酰胆碱组、富硒灵芝多糖低、中和高剂量干预组等6组,每组20只,分别于治疗4和8周后处死大鼠各半,测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(CHOL)和三酰甘油(TG);用Western blot和RT-PCR检测肝脏组织中SREBP-1c及ACCα蛋白和mRNA表达;其余肝脏行病理学检测。结果富硒灵芝多糖可显著减少肝脏组织中的脂肪颗粒,并降低血清中AST、ALT、CHOL和TG含量,中、高剂量的灵芝多糖处理可显著降低肝脏中SREBP-1c、ACCαmRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论富硒灵芝多糖可缓解高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝大鼠症状。

灵芝甾醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察灵芝甾醇(GS)对局灶性脑缺血再灌注损伤(I/R)大鼠的保护作用,并对其作用原理进行初步探讨。方法复制大鼠大脑中动脉阻断再灌注模型(MCAO/R),分别采用TTC染色法、神经功能评分法观察GS对大鼠大脑梗死体积和行为学评分的影响,同时观察GS对脑组织形态学和MDA水平、SOD活性的影响。结果GS能够降低I/R大鼠脑梗死体积和行为学评分,减轻受损大鼠皮层脑组织的病理改变,抑制脑组织中MDA的生成,提高MnSOD的活性。结论GS对大鼠缺血再灌注损伤有一定保护作用,其作用机制与增强MnSOD活性,减轻I/R中氧化损伤有关。

红芝的甾醇分析

灵芝是我国传统的中药，含有丰富的药用成分，具有许多种药效。本文应用ＧＣ—ＭＳ分析了红芝子实体的提取物，发现其含有麦角甾－５，７，２２－三烯－３－β－醇（ｅｒｇｏｓｔａ－５，７，２２－ｔｒｉｅｎ－３－β－ｏｌ），４－甲基－胆甾－８，２４－二烯－３－醇（４－ｍｅｔｈｙｌ－ｃｈｏｌｅｓｔａ－８，２４－ｄｉｅｎ－３－ｏｌ），麦角甾－７－烯－３－β－醇（５．ｘｉ－ｅｒｇｏｓｔ－７－ｅｎｅ－３－β－ｏｌ）。

灵芝化学成分与质量控制方法的研究综述

综述灵芝活性成分和质量控制方法的研究进展。灵芝化学成分有三萜类化合物,核苷类化合物,呋喃类衍生物,甾醇类化合物,生物碱类化合物,氢醌及其他类化合物,脑苷及多肽、氨基酸类化合物,多糖、糖肽类化合物,以及有机酸、长链烷烃类化合物。其已有的质量控制方法研究包括比色方法测定灵芝总三萜酸含量,HPLC方法测定灵芝三萜酸,灵芝HPLC指纹图谱研究,高效毛细管电泳法测定核苷类化学成分的含量,灵芝中甾醇类化合物分析,灵芝孢子油中脂肪酸含量测定等。

灵芝孢子多糖的提取工艺优化及单糖组成、抗氧化活性分析

为确定灵芝孢子多糖(GLSP)的最佳提取工艺,以料液比、提取时间、提取温度为因素,多糖提取得率为指标,在单因素试验的基础上,通过响应面法确定灵芝孢子多糖提取的最佳工艺为:提取温度81℃,料液比19∶1,提取时间2 h,在该条件下灵芝孢子多糖提取得率为(1.507±0.028)%。以7种来源的灵芝孢子(GLS)为原料,通过最佳工艺提取灵芝孢子多糖,经三氟乙酸水解和糖腈乙酸酯法进行衍生化后,采用气相色谱法-质谱联用(GC-MS)测定灵芝孢子多糖的单糖组成。结果表明,7种灵芝孢子多糖的单糖组成相似,均主要由6种单糖组成,分别为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,而不同产地单糖含量有显著差异(P<0.05),其平均物质的量比为3.860,9.829,11.044,22.078,40.338,14.273。体外抗氧化试验表明:灵芝孢子多糖具有一定的抗氧化能力,不同来源间有显著差异,总体抗氧化性能表现为S2>S3>S5>S4>S6>S7>S1。

富硒灵芝调控大鼠乙酰辅酶A羧化酶α表达治疗非酒精性脂肪肝病的研究

60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、富硒灵芝治疗组。非酒精性脂肪肝病(Non-Alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)模型建立成功后富硒灵芝治疗组给予富硒灵芝水灌胃治疗,模型对照组给予生理盐水灌胃辅助对比,空白对照组不加以任何干涉,分别于6周和12周处死大鼠各半。大鼠肝脏HE染色显示,治疗6周后富硒灵芝组脂肪变性程度及细胞肿胀相较于模型组明显减轻,炎性细胞浸润及坏死灶较模型对照组明显减少,富硒灵芝12周组大鼠比富硒灵芝6周组肝脏改善效果更佳;治疗6周后,富硒灵芝治疗组与模型对照组相比,血清中乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA),肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、MDA和GSH,差异显著(P<0.05);SERBF-1mRNA和蛋白表达:富硒灵芝6周组与模型对照6周组相比,只有微小差异(P>0.05),12周富硒灵芝组与模型对照组相比,差距则具有统计学意义(P<0.05);ACCαmRNA和蛋白表达:富硒灵芝6周组与模型对照6周组相比,差别具有统计学意义(P<0.05);12周时差异更加显著;胰岛素抵抗指数6周时没有改善,12周时呈现出统计学意义(P<0.05)。因而推测,富硒灵芝可通过调控大鼠ACCα的表达、以提高抗氧化能力及改善肝功能来治疗NAFLD,但药效疗程较长,可能需长期服用。

不同来源灵芝孢子粉多指标质量评价

目的以多糖、三萜及甾醇、重金属元素含量为指标评价不同来源灵芝孢子粉质量。方法采用紫外-可见分光光度法及电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分别测定多糖、三萜及甾醇、重金属元素含量。分析不同树种及采收期灵芝孢子粉的含量差异规律。结果桦树样品及八月上旬采收样品中多糖含量较高,桑树样品及九月中下旬采收的样品中三萜及甾醇含量较高,不同树种及采收期样品重金属含量均符合限量要求。结论灵芝孢子粉可考虑采用桑树或白杨树树种进行栽培,于九月中下旬采收。