肝郁脾虚方对抑郁失眠模型大鼠结肠组织GABA能信号系统及肠道菌群的影响

目的探究肝郁脾虚方治疗抑郁共病失眠的可能作用机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组,模型组及肝郁脾虚方低、高剂量组,每组6只。除空白组外,其余各组均采用慢性不可预知温和应激方法(CUMS)干预21天构建抑郁模型,再注射4-氯-DL-苯丙氨酸(PCPA)3天构建抑郁失眠大鼠模型。造模后肝郁脾虚方低、高剂量组分别予以肝郁脾虚方8、32 g/(kg·d)灌胃,空白组及模型组以蒸馏水20 ml/(kg·d)灌胃,共灌胃14天。采用实时荧光定量PCR检测大鼠结肠组织γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)、γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)、γ-氨基丁酸转运蛋白(GAT)、谷氨酸脱羧酶(GAD)mRNA表达,Western blot法检测大鼠结肠组织中GABAA、GABAB、GAT、GAD蛋白表达。通过16SRNA基因测序技术分析大鼠肠道菌群物种多样性及物种组成。Pearson相关性分析γ-氨基丁酸(GABA)能信号系统与优势菌门的相关性。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠组织GABAA、GABAB蛋白及mRNA表达降低,GAD蛋白及mRNA、GAT蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,肝郁脾虚方高、低剂量组GABAA蛋白及mRNA表达升高,GABAB mRNA表达升高、蛋白表达下降,GAD mRNA表达降低,GAT蛋白表达下降(P<0.05)。与肝郁脾虚方低剂量组比较,肝郁脾虚方高剂量组GABAA、GAD mRNA表达升高,GABAB蛋白表达降低(P<0.05)。各组均未检测到GAT mRNA表达。Alpha多样性结果显示,与模型组比较,肝郁脾虚方低、高剂量组Shannoneve指数升高,Simpson指数降低(P<0.05)。Beta多样性结果显示,肝郁脾虚方低剂量组菌群结构更接近空白组。物种组成结果显示,各组均存在的优势菌门为厚壁菌门、拟杆菌门。Pearson相关分析显示,厚壁菌门丰度与GAD mRNA表达呈负相关(r=-0.65,P=0.02),与GABAA蛋白表达呈负相关(r=-0.80,P=0.02),拟杆菌门丰度与GAD mRNA(r=0.79,P=0.02)、GABAB mRNA呈正相关(r=0.69,P=0.01),与GABAA蛋白表达呈正相关(r=0.63,P=0.02)。结论肝郁脾虚方治疗抑郁共病失眠可能是通过调节肠道微生物分布,同时上调GABAA蛋白,下调GABAB、GAT蛋白实现的,且低剂量较高剂量更佳。