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Basic Investigations EXPRESSION OF GAP JUNCTION PROTEIN Cx43 IN CULTURED HUMAN NORMAL AND MALIGNANT LUNG CELLS
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作者 张志谦 林仲翔 +2 位作者 吕有勇 孟松娘 韩亚玲 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1994年第2期95-101,共7页
Gap junctional intercellular communicationexchange of small molecules and ions between contiguous cells through membranous gap junctional channelsis essential for growth control and tissue homecotasis. This work conce... Gap junctional intercellular communicationexchange of small molecules and ions between contiguous cells through membranous gap junctional channelsis essential for growth control and tissue homecotasis. This work concerns the functional expression of gap junction protein connexin 43 (Cx43) in normal human lung cells and the changes in lung carcinoma cells. By. using Northern blot hybridization analysis and Cx43 immunocytochemical methods, it was otherved that cultured normal human embryonic lung cells expressed a high level of Cx43 in both mRNA and protein levels.The Cx43 immunofluorescence was localized at cell membrane regions corresponding to the location of gap junctions. These normal lung cells were competent of intercellular communication function as detected by Lucifer yellow dye transfer. In contrast to normal celis, Cx43 mRNA and protein was not detectable in the carcinoma PG cell line. These tumor cells were defective of intercellular communication function. These results demonstrate that Cx43 is expressed in normal cultured human embryonic lung cells but not in lung tumor cells. The lack of intercellular communication in the lung tumor cell line correlates with dysfunctional intercellular communication. The suggestive role of Cx as a tumor suppersor gene is discussed. 展开更多
关键词 gap junction protein connexin 43. Intercellular communication Normal human lung cells Human lung carcinoma.
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Lp-PLA2、H-FABP、Cx43水平与PCI后AMI患者预后及MACE风险的相关性
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作者 邢孔玉 凌学斌 +3 位作者 高飞 钟丹萍 黄贝霞 黎海江 《临床和实验医学杂志》 2023年第3期250-254,共5页
目的探讨血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、心形脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、细胞间隙连接蛋白43(Cx43)与急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠脉介入术(PCI)后发生不良心血管事件(MACE)的关系。方法回顾性选取2019年8月至2022年8月在海南医学院... 目的探讨血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、心形脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、细胞间隙连接蛋白43(Cx43)与急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠脉介入术(PCI)后发生不良心血管事件(MACE)的关系。方法回顾性选取2019年8月至2022年8月在海南医学院第一附属医院实施PCI治疗后且发生MACE事件的53例患者作为MACE组,选取同期PCI治疗的AMI且未发生MACE患者80例作为对照组。比较两组患者入院后24 h内的Lp-PLA2、H-FABP、Cx43、血常规指标、心肌酶学指标、血脂指标水平,患者植入支架情况等,采用Logistic模型分析影响AMI患者PCI术后发生MACE事件的相关因素。结果MACE组的Lp-PLA2、H-FABP、中性粒细胞计数与淋巴细胞的比值(NLR)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)、总胆固醇为(236.80±56.80)μg/L、(120.66±20.16)μg/L、4.82±1.33、(90.77±27.04)U/L、(12.66±1.94)μg/L、(5.58±0.84)mmol/L,均高于对照组[(201.60±55.1)μg/L、(96.40±14.18)μg/L、3.92±1.20、(74.18±22.60)U/L、(11.40±1.82)μg/L、(5.26±0.90)mmol/L],Cx43、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)为(98.77±19.30)pg/mL、(0.98±0.14)mmol/L,低于对照组[(130.16±24.66)pg/mL、(1.10±0.16)mmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05);MACE组和对照组的血红蛋白、白细胞计数、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、植入支架数目、支架总长度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。MACE组的植入支架数目、支架总长度与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归模型结果显示:年龄增大、NYHA分级≥Ⅱ级、Lp-PLA2升高、H-FABP升高、Cx43降低、NLR升高、HDL-C降低是AMI患者发生MACE的独立危险因素(P<0.05)。结论AMI患者PCI后发生MACE的患者Lp-PLA2、H-FABP水平显著高于非MACE患者,Cx43低于非MACE患者,Lp-PLA2、H-FABP、Cx43水平与患者发生MACE事件关系密切。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 脂蛋白相关磷脂酶A2 心形脂肪酸结合蛋白 细胞间隙连接蛋白43 不良心血管事件
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左归丸对化疗性卵巢早衰小鼠卵巢组织中缝隙连接蛋白43表达的影响 被引量:6
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作者 孙晓峰 阳松威 +3 位作者 贺又舜 陈聪 龚力民 罗令 《中国药房》 CAS 北大核心 2017年第22期3044-3047,共4页
目的:研究左归丸对环磷酰胺(CTX)致卵巢早衰(POF)小鼠卵巢组织中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨左归丸治疗化疗性POF的作用机制。方法:将72只小鼠按体质量随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇片组(阳性对照,0.000 13 g/kg)和左归... 目的:研究左归丸对环磷酰胺(CTX)致卵巢早衰(POF)小鼠卵巢组织中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨左归丸治疗化疗性POF的作用机制。方法:将72只小鼠按体质量随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇片组(阳性对照,0.000 13 g/kg)和左归丸低、中、高剂量组(13.65、40.95、122.85 g/kg),每组10只。除空白组外,其余各组小鼠均ip CTX复制POF模型,每天1次,连续20 d;并同时ig相应药物,每天1次,连续30 d。末次给药2h后,分别采用反转录-聚合酶链反应法和Western blot法检测卵巢组织中Cx43 mRNA和蛋白表达;并采用免疫组化法检测卵巢组织中Cx43蛋白的分布。结果:与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织中Cx43 mRNA及蛋白表达均明显减弱,卵泡与颗粒细胞中Cx43蛋白的分布明显减少(P<0.01);与模型组比较,戊酸雌二醇片组和左归丸中、高剂量组小鼠卵巢组织中Cx43 mRNA及蛋白表达均明显增强,卵泡与颗粒细胞中Cx43蛋白的分布明显增加(P<0.01)。结论:左归丸可上调CTX致POF小鼠卵巢组织中Cx43 mRNA及蛋白表达,增加Cx43在卵泡及颗粒细胞间的分布,改善缝隙连接功能,这可能是其治疗POF的作用机制之一。 展开更多
关键词 左归丸 卵巢早衰 卵巢 缝隙连接蛋白43 小鼠
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胃癌组织中间隙连接超微结构改变及间隙连接蛋白-43的表达及其意义 被引量:4
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作者 李春辉 潘理会 +2 位作者 徐贝贝 刘海旺 程玉 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期697-701,共5页
目的观察胃癌组织中间隙连接结构的改变,并检测Cx43蛋白及m RNA在组织中的表达,为胃癌的发病机制研究提供新的思路,同时也为药物治疗提供潜在的作用靶点。方法通过透射电子显微镜技术观察正常胃与胃癌组织中间隙连接的变化;利用Western ... 目的观察胃癌组织中间隙连接结构的改变,并检测Cx43蛋白及m RNA在组织中的表达,为胃癌的发病机制研究提供新的思路,同时也为药物治疗提供潜在的作用靶点。方法通过透射电子显微镜技术观察正常胃与胃癌组织中间隙连接的变化;利用Western blot和RT-PCR技术检测Cx43在正常胃与胃癌组织中的表达水平。结果胃癌组织超微结构中细胞间隙连接破坏,分化越差破坏越严重,在正常胃组织中Cx43蛋白及m RNA的表达高于胃癌组织中的表达(P<0.05),在胃癌组织中高-中分化者Cx43蛋白及m RNA表达高于低分化者(P<0.05),胃癌组织中TNM分期Ⅰ/ⅡCx43蛋白及m RNA表达高于Ⅲ/Ⅳ期的表达(P<0.05),胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层者Cx43蛋白及m RNA的表达高于侵及浆膜层者(P<0.05),胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43蛋白及m RNA的表达高于有淋巴结转移者(P<0.05),Cx43蛋白及m RNA在不同年龄和性别组中的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论间隙连接超微结构的改变同Cx43蛋白及m RNA的异常表达与胃癌的发生、发展有关,这为胃癌的发病及靶向治疗提供了新的方向。 展开更多
关键词 胃癌 间隙连接 间隙连接蛋白-43 超微结构 蛋白
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非霍奇金淋巴瘤中MCM2、Cx43、Skp2蛋白的表达 被引量:4
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作者 齐彦 廖斌 +2 位作者 杨丽英 沈达煌 徐成波 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第6期958-961,共4页
目的:研究非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin's lymphoma,NHL)中微小染色体维持蛋白2(Minichromosome maintenance protein 2,MCM2)与细胞间隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)以及S期激酶相关蛋白2(S phase kinase-associated protein 2,Sk... 目的:研究非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin's lymphoma,NHL)中微小染色体维持蛋白2(Minichromosome maintenance protein 2,MCM2)与细胞间隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)以及S期激酶相关蛋白2(S phase kinase-associated protein 2,Skp2)在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义,以期为临床诊治非霍奇金淋巴瘤提供一定的参考。方法:选取2013年1月至2015年1月间入院诊治的非霍奇金淋巴瘤36例作为实验组,并选取同期入院诊治的淋巴结反应性增生18例作为对照组,应用免疫组化法检测MCM2、Cx43、Skp2的表达情况,同时分析MCM2、Cx43、Skp2的表达与非霍奇金淋巴瘤恶性程度、临床分期等的相关性。结果:实验组NHL患者MCM2阳性表达率为83.33%、Skp2阳性表达率为86.11%,显著高于对照组22.22%与27.78%的阳性表达率(P<0.01);NHL患者Cx43阳性表达率为22.22%,显著低于对照组61.11%阳性表达率(P<0.01)。NHL患者MCM2阳性表达与肿瘤恶性程度、临床分期及Ki67水平密切相关(P<0.05);NHL患者Cx43阳性表达与肿瘤恶性程度呈负相关(P<0.01);NHL患者Skp2阳性表达与肿瘤恶性程度及临床分期密切相关(P<0.05)。结论:MCM2、Cx43、Skp2的异常表达与非霍奇金淋巴瘤的恶性程度密切相关,联合检测MCM2、Cx43、Skp2可为非霍奇金淋巴瘤的诊治提供一定的参考。 展开更多
关键词 非霍奇金淋巴瘤 微小染色体维持蛋白2 细胞间隙连接蛋白43 S期激酶相关蛋白2 免疫组化
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血管紧张素Ⅱ经AT_1受体和ERK1/2上调心肌细胞Cx43间隙连接 被引量:4
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作者 王业松 马虹 +3 位作者 胡苑 曾武涛 张惠忠 陈健文 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期58-62,共5页
目的:探讨血管紧张素Ⅱ对培养新生鼠心室肌细胞Cx43间隙连接的影响及其机制。方法:AngⅡ处理培养心肌细胞24h。缬沙坦、PD98059在AngⅡ刺激细胞前1h加到培养基中,对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Westernblotting分析、代谢标记和免疫沉... 目的:探讨血管紧张素Ⅱ对培养新生鼠心室肌细胞Cx43间隙连接的影响及其机制。方法:AngⅡ处理培养心肌细胞24h。缬沙坦、PD98059在AngⅡ刺激细胞前1h加到培养基中,对照组加等体积药物溶剂DMSO。用Westernblotting分析、代谢标记和免疫沉淀测定、电镜观察心肌细胞Cx43表达、合成和间隙连接。结果:Westernblotting分析显示用10-9-10-6mol/LAngⅡ刺激细胞24h,Cx43的表达与对照组相比呈浓度依赖性增加;用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)活性高于对照组(P<0.01),AT1受体拮抗剂缬沙坦(1μmol/L)能完全阻断AngⅡ增加P-ERK1/2活性;用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,Cx43表达及P-ERK1/2活性均高于对照组(P<0.01),ERK1/2激酶特异性抑制剂PD98059(1μmol/L)能阻断AngⅡ上调Cx43表达和增加P-ERK1/2活性。代谢标记和免疫沉淀测定显示AngⅡ处理组放射渗入Cx43的量明显高于对照组(P<0.01),缬沙坦(1μmol/L)能完全阻断AngⅡ增加放射渗入Cx43的量。电镜观察表明用AngⅡ0.1μmol/L刺激心肌细胞24h,AngⅡ处理组细胞间隙连接数目和大小大于对照组(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1受体和ERK1/2促进培养心肌细胞合成Cx43,上调Cx43表达和增加间隙连接数目及大小。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 心肌细胞 连接蛋白43 缝隙接合部 有丝分裂素激活蛋白激酶类
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心脏连接蛋白43羧基末端相互作用蛋白的酵母双杂交筛选 被引量:5
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作者 梁庆 林吉进 李玉光 《心脏杂志》 CAS 2007年第3期280-285,共6页
目的研究心脏连接蛋白43(Cx43)羧基末端与哪些心肌细胞内蛋白质存在相互作用。方法①通过PCR方法得到编码心脏Cx43羧基末端(AA235-382)的cDNA片段,并在其两端分别加上EcoRI和BamHI酶切位点,应用EcoRI/BamHI酶切PCR产物及pGBKT7空载体,... 目的研究心脏连接蛋白43(Cx43)羧基末端与哪些心肌细胞内蛋白质存在相互作用。方法①通过PCR方法得到编码心脏Cx43羧基末端(AA235-382)的cDNA片段,并在其两端分别加上EcoRI和BamHI酶切位点,应用EcoRI/BamHI酶切PCR产物及pGBKT7空载体,凝胶分离后应用T4连接酶进行连接;②通过化学转化法将pG-BKT7-Cx43-CT转化酵母菌AH109;③通过“尿素/SDS”法从被转化的酵母菌中提取蛋白质;④应用抗C-myc抗体,通过Western blot方法检测”诱饵”蛋白的表达(即Gal4-BD-C-myc-Cx43-CT融合蛋白);⑤检测”诱饵”蛋白自我激活报告基因与否后,将已被“诱饵“质粒转化的AH109与人心脏cDNA文库进行杂交,筛选阳性克隆分离阳性克隆中的cDNA,并测序。结果①诱饵载体测序结果证明pGBKT7中的“Gal4 DNA binding domain-C-myc”与Cx43的羧基末端在同一读框中;②“诱饵”质粒转化AH109酵母菌成功率100%;③从被转化的AH109中能提取到浓度满意的总蛋白;④Western blot能检测到特异性条带,其位置与Gal4-BD-C-myc-Cx43-CT的分子量相当;⑤“诱饵”蛋白不能自激活报告基因Ade2和Mel1,但可自激活His3,5mmol/L的3-AT可有效抑制“诱饵”蛋白本身自激活报告基因His3,以利于下一步的杂交筛选,筛选得到10个准阳性克隆。结论心脏连接蛋白43羧基末端能与心肌细胞中的多种蛋白质存在相互作用,这些蛋白质可能参与对间隙连接通道的功能调控。 展开更多
关键词 缝隙连接通道 连接蛋白43 心律失常 蛋白质-蛋白质相互作用
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缝隙连接蛋白43与基质金属蛋白酶9在人股动脉粥样硬化斑块中表达分析 被引量:1
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作者 王耀磊 周志强 +2 位作者 吴成稳 李祥波 李飞 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第14期48-51,共4页
目的探讨缝隙连接蛋白43(CX-43)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在人股动脉粥样硬化(AS)斑块中的表达及其与斑块稳定性关系。方法收集股动脉内膜剥脱术后所得AS斑块标本47例,正常脾动脉、肠系膜上动脉组织标本21例作为对照组。根据术前彩超及... 目的探讨缝隙连接蛋白43(CX-43)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在人股动脉粥样硬化(AS)斑块中的表达及其与斑块稳定性关系。方法收集股动脉内膜剥脱术后所得AS斑块标本47例,正常脾动脉、肠系膜上动脉组织标本21例作为对照组。根据术前彩超及术后病理检查结果进行分组:稳定斑块组(22例)和不稳定斑块组(25例),免疫组织化学SP法检测各标本中CX-43和MMP-9的表达以及两者之间的相关性。结果 CX-43和MMP-9蛋白在对照组、稳定斑块组及不稳定斑块组中的表达均有差异(F_(CX-43)=662.971,F_(MMP-9)=397.716),差异有统计学意义(P<0.05)。和对照组比较,斑块组CX-43和MMP-9表达均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。不稳定斑块组较稳定斑块组CX-43和MMP-9表达明显增强,且差异有统计学意义(P<0.05)。相关性研究结果显示,CX-43和MMP-9在AS组表达呈正相关(r_(稳定斑块组)=0.640,P<0.05;r_(不稳定斑块)=0.715,P<0.05),对照组研究结果提示CX-43与MMP-9无明显相关性。结论 CX-43和MMP-9蛋白表达的上调促进人股动脉粥样硬化斑块形成以及斑块组织的不稳定性。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 缝隙连接蛋白43 基质蛋白酶9
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腹膜间隙连接蛋白43与中医脾气的相关性 被引量:3
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作者 孟立锋 杨端云 樊均明 《医学争鸣》 CAS 2019年第4期21-25,共5页
腹膜透析(PD)是终末期肾脏疾病替代治疗的主要方法之一,腹膜纤维化是患者退出PD的首要原因。腹膜间皮细胞间充质转分化在腹膜纤维化的发生、发展中起着关键作用。腹膜间皮细胞损伤、脱落是由于其细胞间隙连接蛋白43(Cx43)及其介导的胞... 腹膜透析(PD)是终末期肾脏疾病替代治疗的主要方法之一,腹膜纤维化是患者退出PD的首要原因。腹膜间皮细胞间充质转分化在腹膜纤维化的发生、发展中起着关键作用。腹膜间皮细胞损伤、脱落是由于其细胞间隙连接蛋白43(Cx43)及其介导的胞间通讯功能(GJIC)受损所致,基于中医“脾主大腹”理论,脾气亏虚是PD相关的腹膜早期病变的主要病机。在腹膜纤维化过程中,Cx43及其介导的GJIC功能受损,与中医“脾气亏虚”存在密切相关性。健脾益气法能有效防治PD相关性腹膜损伤病变。 展开更多
关键词 腹膜透析 腹膜纤维化 间隙连接蛋白43 胞间通讯 健脾益气
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雷米普利通过激活ERK1/2-Cx43信号通路降低SHR大鼠的血压
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作者 赵亮 魏童 《河北医学》 CAS 2022年第8期1251-1256,共6页
目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂雷米普利(Ramipril,RMP)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血压的影响并探讨机制。方法:50只雄性SHR大鼠随机分为SHR组、RMP+SHR组、RMP+甘珀酸[CBX,缝隙连接蛋白43(Cx43)抑制剂... 目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂雷米普利(Ramipril,RMP)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血压的影响并探讨机制。方法:50只雄性SHR大鼠随机分为SHR组、RMP+SHR组、RMP+甘珀酸[CBX,缝隙连接蛋白43(Cx43)抑制剂]+SHR组、RMP+U0126[细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)抑制剂)]+SHR,RMP+CBX+U0126+SHR组,n=10/组。健康wistar大鼠为control组(n=10)并与SHR组均给予生理盐水40mL/kg i.v.,其余3组分别给予RMP 10mg/kg i.v.,RMP 10 mg/kg和CBX 13.5mg/kg i.v.,RMP 10mg/kg和CBX 13.5mg/kg和U012612mg/kg i.v.,尾静脉推注,给药48 h后采用BP-6大鼠无创血压测试仪、苏木精伊红染色和Western blot分析方法,观察大鼠生理指标的变化。结果:与Control组比,SHR组大鼠呈高血压症状(均P<0.05),且Cx43的Ser368磷酸化水平(p-Cx43)和磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达水平下调(均P<0.05)。与SHR组比,RMP+SHR组的血压降低(均P<0.05),p-Cx43和p-ERK1/2的表达增加(均P<0.05)。与RMP+SHR组比,RMP+CBX+SHR组的血压增高,p-Cx43表达降低(均P<0.05),p-ERK1/2的表达无明显变化(P>0.05);与RMP+SHR组比,RMP+U0126+SHR组的血压明显增高,且p-Cx43和p-ERK1/2的表达都降低(均P<0.05)。与RMP+CBX+SHR组或RMP+U0126+SHR组比,RMP+CBX+U0126+SHR组的血压增高,而且p-Cx43和p-ERK1/2的表达都降低(均P<0.05)。结论:本研究证实RMP可以通过激活ERK1/2-Cx43信号通路改善SHR大鼠的高血压症状。 展开更多
关键词 雷米普利 细胞外信号调节激酶1/2 缝隙连接蛋白43 自发性高血压大鼠
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黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞缝隙连接蛋白43表达的影响
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作者 林锐珊 赵平 +3 位作者 吴绍锋 罗海燕 伍趣京 苏宁 《安徽中医学院学报》 CAS 2013年第6期74-77,共4页
目的研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。方法将体外培养的大鼠GMC分为6组:低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组,蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)... 目的研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。方法将体外培养的大鼠GMC分为6组:低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组,蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制剂组。培养72h后,收集细胞并提取细胞总蛋白,Western-blot法检测黄芩苷对高糖环境下GMC中PKC和Cx43表达的影响,用划痕标记染料示踪技术检测黄芩苷对GMC缝隙链接通讯功能(gap junction intercellular communication,GJIC)的影响。结果 Western-blot结果显示,与低糖组比较,高糖组中PKC蛋白表达量显著增加(P<0.01),Cx43蛋白表达量显著减少(P<0.01);黄芩苷呈剂量依赖性降低PKC蛋白表达水平,升高Cx43蛋白表达水平。划痕标记染料示踪实验结果显示:与低糖组比较,高糖组GMC的GJIC功能缺乏,未向邻近细胞传输;与高糖组比较,PKC抑制剂组罗氏黄荧光染料向划痕两侧邻近细胞传输的层数较黄芩苷各剂量组明显增多,黄芩苷各剂量组呈剂量依赖性地增加传递的层数。结论黄芩苷可剂量依赖性地抑制高糖环境下GMC中PKC的异常活化,从而上调Cx43表达,恢复GJIC的功能。 展开更多
关键词 肾小球系膜细胞 黄芩苷 缝隙连接 蛋白激酶C 缝隙连接蛋白43
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与缝隙连接43蛋白相关的星形胶质细胞通过外泌体对神经元保护作用的机制研究
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作者 熊进挺 邓培刚 +6 位作者 李嘉杰 任大斌 郑平 段剑 冯九庚 邹树峰 陈伟 《江西中医药大学学报》 2021年第2期88-91,124,共5页
目的:观察缝隙连接43(Cx43)蛋白参与星形胶质细胞来源的外泌体对神经元保护作用的机制。方法:采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取星形胶质细胞及神经元,建立共培养(Co-Culture)模型,给予神经元过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤,星形胶质细胞给予C... 目的:观察缝隙连接43(Cx43)蛋白参与星形胶质细胞来源的外泌体对神经元保护作用的机制。方法:采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取星形胶质细胞及神经元,建立共培养(Co-Culture)模型,给予神经元过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤,星形胶质细胞给予Cx43特异性阻断剂Gap26,分别建立(Co-Culture+H_(2)O_(2))组及(Co-Culture+H_(2)O_(2)+Gap26)组,同时设单纯神经元损伤(Neuron+H_(2)O_(2))组,通过蛋白免疫印记(WB)法,测定神经元骨架相关的紧密连接蛋白(ZO-1)、α-肌动蛋白(α-actin)、谷氨酸转运蛋白-1(GLT-1)、外泌体标记蛋白CD63和凋亡相关的Bax/Bcl-2比例的变化,采用高效液相色谱仪(HPLC)观察神经元谷氨酸(Glu),采用ELFA法检测氧化应激因子腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAPDH)氧化酶活性。结果:与(Neuron+H_(2)O_(2))组相比,(Co-Culture+H_(2)O_(2))组的神经元ZO-1、α-actin、GLT-1和CD63的表达明显上调,而Bax/Bcl-2比例、NAPDH氧化酶活性则明显降低(P<0.05)。在给予Gap26后,可明显抑制以上星形胶质细胞对神经元的此种作用(P<0.05)。结论:Cx43蛋白可促进星形胶质细胞的外泌体被神经元吸收,可产生稳定细胞形态结构、加强兴奋性氨基酸转运及降低神经元凋亡和氧化应激损伤等神经保护功能。 展开更多
关键词 缝隙连接43蛋白 星形胶质细胞 神经元 外泌体 脑损伤
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上调Cx43对心肌细胞间通讯及离子通道的影响 被引量:3
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作者 唐良虎 李德 +3 位作者 杨大春 王强 马双陶 张彦 《西部医学》 2016年第3期312-316,320,共6页
目的通过重组腺病毒介导缝隙连接蛋白Cx43在体外培养的心肌细胞中过度表达,观察心肌细胞间通讯及细胞离子通道变化。方法通过RT-PCR法克隆SD大鼠缝隙连接蛋白Cx43基因的全长cDNA,用基因重组的方法构建腺病毒pAdEasy-1-Cx43。行心肌细胞... 目的通过重组腺病毒介导缝隙连接蛋白Cx43在体外培养的心肌细胞中过度表达,观察心肌细胞间通讯及细胞离子通道变化。方法通过RT-PCR法克隆SD大鼠缝隙连接蛋白Cx43基因的全长cDNA,用基因重组的方法构建腺病毒pAdEasy-1-Cx43。行心肌细胞基因转染后,分别用RT-PCR和蛋白质免疫印迹技术检测Cx43在心肌细胞中的mRNA和蛋白表达,用免疫荧光技术分析Cx43在心肌细胞膜上的分布。采用划痕标记荧光染料示踪(SLDT)技术观察培养心肌细胞群之间的罗氏黄(lucifer yellow,LY)染色传输,检测上调Cx43对心肌细胞间通讯的影响;采用单细胞膜片钳技术分析各离子通道电流的变化,观察上调Cx43对心肌细胞膜离子通道表达的影响。结果腺病毒重组质粒pAdEasy-1-Cx43构建成功;转染心肌细胞后,pAdEasy-1-CX43转染组Cx43mRNA及蛋白表达上调,且心肌细胞膜上分布较多;细胞划痕荧光染料示踪提示转染后,心肌细胞间通讯增强;膜片钳全细胞膜电流提示转染后钙内流降低,钾离子电流未发现有明显改变。结论成功构建腺病毒重组质粒pAdEasy-1-Cx43载体,隙连接蛋白Cx43表达上调增强了心肌细胞间通讯以及钙内流,为Cx43改善心室肌电重构,减少或预防室性心律失常发生的进一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 重组腺病毒转染 缝隙连接蛋白CX43 细胞划痕荧光染料示踪 细胞间通讯 膜片钳
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基于GR/ERK/CX43研究母代肾精亏虚诱发子代原发性睾丸生精功能减弱的宫内编程机制
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作者 萧闵 江晓翠 +5 位作者 刘祺 田代志 姜兴宇 龚健 陈思易 曹继刚 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期494-499,共6页
目的明确母代肾精亏虚导致子代原发性睾丸生精功能减弱的宫内编程机制。方法制备孕鼠24只,数字随机法均分为空白组,模型组,补肾组;除空白组以外,余下各组孕期采用慢性应激复制母鼠肾精亏虚模型。酶联免疫吸附法(ELISA)法检测母鼠血清甲... 目的明确母代肾精亏虚导致子代原发性睾丸生精功能减弱的宫内编程机制。方法制备孕鼠24只,数字随机法均分为空白组,模型组,补肾组;除空白组以外,余下各组孕期采用慢性应激复制母鼠肾精亏虚模型。酶联免疫吸附法(ELISA)法检测母鼠血清甲状腺素(T4)、糖皮质激素(GC)、胎产数评估母鼠模型。从孕0天开始,补肾组给予左归丸灌胃填补肾精;孕期20天时,比较母鼠一般情况及体重变化,雄性胎鼠睾丸体质比,ELISA法检测其血清T4、GC、促卵泡生长激素(FSH)含量,并通过苏木素-伊红染色评估睾丸生殖细胞发育状况,免疫荧光双染检测胎鼠睾丸缝隙连接蛋白43(Cx43)、SYR-盒包含蛋白9(Sox9)表达,实时荧光定量聚合酶链式反应检测胎鼠睾丸细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、Cx43基因表达,蛋白免疫印迹法检测胎盘组织GR、胎鼠睾丸ERK1/2、Cx43、促卵泡生长激素受体(FSHR)蛋白表达。结果与空白组母鼠比较,模型组母鼠,产后体重减轻、胎产数减少、血清T4含量降低、血清GC含量升高(P<0.01);与模型组母鼠比较,补肾组母鼠,产后体重增加、胎产数增加、血清T4含量升高、GC降低、(P<0.01)。与空白组雄性胎鼠比较,模型组雄性胎鼠血清T4含量降低、GC、FSH含量均升高、睾丸体质比降低、支持细胞数量、精原细胞数量及曲精小管个数均降低、睾丸Sox9、Cx43蛋白降低,ERK、Cx43 mRNA表达降低、FSHR表达升高(P<0.01或P<0.05),胎盘组织GR蛋白升高(P<0.05);与模型组比较,补肾组胎鼠血清T4含量升高、GC、FSH含量均降低、睾丸体质比升高、支持细胞数量、精原细胞数量及曲精小管个数均升高、睾丸ERK、Cx43 mRNA表达升高、Sox9、Cx43蛋白升高、FSHR表达降低(P<0.01或P<0.05),胎盘组织GR蛋白降低(P<0.05)。结论母鼠孕期肾精亏虚是原发性睾丸生精功能障碍的诱因之一,其机制可能与GR/ERK/CX43宫内编程调控支持细胞数量相关。 展开更多
关键词 母代 肾精亏虚 睾丸发育 宫内编程 糖皮质激素 缝隙连接蛋白43
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热疗上调细胞间隙连接通讯对胶质瘤侵袭性的影响及其机制 被引量:2
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作者 秦丽娟 张志勇 +5 位作者 王银环 朱丽艳 杨秀红 张田 孙娜 宋鸿艳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1692-1695,共4页
目的探讨热疗降低胶质瘤侵袭性的作用与细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的关系。方法热疗处理C6胶质瘤细胞后,免疫组织化学法和Western blot法动态检测HSP70和Cx43的表达水平;划痕标记染料示踪技术... 目的探讨热疗降低胶质瘤侵袭性的作用与细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的关系。方法热疗处理C6胶质瘤细胞后,免疫组织化学法和Western blot法动态检测HSP70和Cx43的表达水平;划痕标记染料示踪技术检测胶质瘤GJIC功能变化;结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性的改变。结果 C6细胞经热疗后,HSP70表达增加,于30 min时含量最多。C6细胞内Cx43的表达水平也在热疗后明显增加,并于热疗后的120 min达高峰,后逐渐减少。热疗后GJIC功能的恢复与C6细胞内Cx43的表达相一致,且GJIC功能越强,胶质瘤侵袭性越低。结论胶质瘤细胞经热疗后HSP70表达增加,增加的HSP70可能是通过其分子伴侣作用提高Cx43的表达水平,进而上调GJIC功能而引起胶质瘤侵袭性的下降。 展开更多
关键词 热疗 胶质瘤 肿瘤侵袭性 细胞间隙连接通讯 热休克蛋白70 连接蛋白CX43
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丹参酮ⅡA通过PKC/Cx43通路减轻大鼠心肌缺血再灌注致心律失常 被引量:4
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作者 周露 李冰艳 +2 位作者 顾霞飞 徐敏钦 唐广胜 《药物评价研究》 CAS 2023年第12期2617-2623,共7页
目的探讨丹参酮ⅡA(TA)对再灌注致心律失常的改善作用及机制。方法取60只SD大鼠随机分为6组:对照组,模型组,TA低、高剂量(10、20 mg·kg^(-1))组,蛋白激酶C(PKC)激活剂PMA(5 mg·kg^(-1))组,TA(20 mg·kg^(-1))联合PKC抑制... 目的探讨丹参酮ⅡA(TA)对再灌注致心律失常的改善作用及机制。方法取60只SD大鼠随机分为6组:对照组,模型组,TA低、高剂量(10、20 mg·kg^(-1))组,蛋白激酶C(PKC)激活剂PMA(5 mg·kg^(-1))组,TA(20 mg·kg^(-1))联合PKC抑制剂Rottlerin(5 mg·kg^(-1))组,每组10只。构建SD大鼠心肌缺血再灌注(I/R)模型,缺血30 min再灌注30 min;再灌注期间记录各组小鼠Ⅱ导联心电图并对再灌注后心律失常严重性进行评分;再灌注结束后,取颈静脉血采用试剂盒检测心肌损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)和心肌肌钙蛋白(cTnT)水平;取左心室心脏组织,使用试剂盒检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测PKC、缝隙连接蛋白43(Cx43)mRNA表达,Western blotting法检测PKC、Cx43蛋白表达水平和磷酸化水平。结果与模型组比较,TA 2个剂量组和PKC激活剂PMA组CK-MB、LDH、AST、cTnT、MDA水平均显著降低,SOD活性显著升高,室性早搏(PVB)次数、室性心动过速(VT)次数和持续时间以及心室颤动(VF)次数和持续时间显著减少,心律失常评分显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05、0.01、0.001);而TA联合PKC抑制剂组显著削弱TA的作用(P<0.05、0.01、0.001);与模型组相比,TA 2个剂量组和PMA组Cx43 mRNA表达和磷酸化水平显著升高(P<0.01、0.001),而PKC抑制剂使TA的作用显著减弱(P<0.05、0.001)。结论TA通过激活PKC调控Cx43表达和磷酸化而改善再灌注后心律失常,减轻心肌I/R损伤。 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注 心律失常 丹参酮ⅡA 缝隙连接蛋白43(Cx43) 蛋白激酶C(PKC)
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抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白表达和通道功能的影响 被引量:3
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作者 梁沛彰 颜茹芳 +2 位作者 张永华 黄焕森 汪灵芝 《新医学》 CAS 2022年第3期188-192,共5页
目的探讨3种不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白和通道功能的影响。方法CCK-8实验检测不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞的细胞毒性,采用蛋白免疫印迹法和细胞接种荧光示踪法测定3种不同机制抗抑郁药对由缝隙连接蛋白43(... 目的探讨3种不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞缝隙连接蛋白和通道功能的影响。方法CCK-8实验检测不同机制抗抑郁药对海马星形胶质细胞的细胞毒性,采用蛋白免疫印迹法和细胞接种荧光示踪法测定3种不同机制抗抑郁药对由缝隙连接蛋白43(Cx43)组成的通道功能和Cx43蛋白表达的影响。结果CCK-8实验显示,25.00μmol/L氟西汀、0.10μmol/L阿米替林和0.20 nmol/L文拉法辛对海马星形胶质细胞无细胞毒性(P均>0.05);25.00μmol/L氟西汀、0.10μmol/L阿米替林和0.20 nmol/L文拉法辛能抑制海马星形胶质细胞缝隙连接的荧光传递功能(P均<0.05),但3种抗抑郁药均不影响海马星形胶质细胞Cx43蛋白的表达(P均>0.05)。结论抗抑郁药能够显著降低海马星形胶质细胞Cx43组成的通道功能。 展开更多
关键词 细胞缝隙连接 星形胶质细胞 海马 抗抑郁药 缝隙连接蛋白43
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Carbenoxolone pretreatment and treatment of posttraumatic epilepsy 被引量:2
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作者 Weiguan Chen Zhiwei Gao +1 位作者 Yaohui Ni Zhenxiang Dai 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2013年第2期169-176,共8页
Gap junction blocking agents can inhibit spontaneous discharge frequency in cells. We established a rat model of posttraumatic epilepsy induced using ferric ions. Rats were intraperitoneally injected with carbenoxolon... Gap junction blocking agents can inhibit spontaneous discharge frequency in cells. We established a rat model of posttraumatic epilepsy induced using ferric ions. Rats were intraperitoneally injected with carbenoxolone, 20 mg/kg, prior to and 30 minutes after model establishment, once a day for 14 consecutive days. Immunohistochemistry showed glial cell proliferation around a cortical focus and significantly increased connexin expression in posttraumatic epilepsy. However, carbenoxolone pretreatment or treatment significantly reduced connexin expression in the cortex, inhibited glial fibdllary acidic protein expression and ameliorated seizure degree in rats. These findings indicate that large amounts of glial cell proliferation and abnormal gap junction generation play a role in posttraumatic epilepsy, and that carbenoxolone may prevent and treat this disease. 展开更多
关键词 neural regeneration brain injury posttraumatic epilepsy ferric ion gap junction CARBENOXOLONE glial fibrillary acidic protein connexin 43 SEIZURE brain injury grant-supported paper photographs-containing paper NEUROREGENERATION
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人参皂苷Rg1通过调控缝隙连接拮抗铅致大鼠心肌细胞损伤的作用机制 被引量:1
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作者 李艺 王琼 +1 位作者 冯斌 何珍 《中国工业医学杂志》 CAS 2024年第2期118-122,132,I0001,共7页
目的 观察醋酸铅染毒大鼠经人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,以下简称Rg1)干预前后心肌缝隙连接蛋白Cx43(connexin 43,Cx43)及其磷酸化蛋白(p-Cx43)的表达变化,探究Rg1通过缝隙连接对铅致心肌细胞损伤的保护作用。方法 将无特定病原体级的S... 目的 观察醋酸铅染毒大鼠经人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,以下简称Rg1)干预前后心肌缝隙连接蛋白Cx43(connexin 43,Cx43)及其磷酸化蛋白(p-Cx43)的表达变化,探究Rg1通过缝隙连接对铅致心肌细胞损伤的保护作用。方法 将无特定病原体级的Sprague Dawley雄性大鼠按随机数字表法分为对照组,以二甲基亚砜(DMSO)溶解辛醇,作为辛醇对照组,辛醇为Cx43特异性阻滞剂,设置DMSO组及辛醇组,且不做干预;低、中、高剂量铅染毒组(90、180、360 mg/kg),Rg1干预组分为不同剂量铅染毒+Rg1组、辛醇+Rg1组、高剂量铅染毒+辛醇+Rg1组(Pb 360 mg/kg+辛醇+Rg1),共11组,每组8只。对照组给予等量蒸馏水,DMSO组、辛醇组按照体质量进行腹腔注射染毒(5 mmol/kg),不同剂量铅染毒组和铅染毒+Rg1组经口灌胃醋酸铅溶液,每天染毒1次,每周连续5 d,造模4周后,各Rg1(20 mg/kg)干预组每天给药1次,每周连续5 d,共4周;对照组及不同剂量铅染毒组每天经口灌胃蒸馏水。4周后处死大鼠收集心脏组织,计算心脏脏器系数,观察心肌组织病理学变化,检测全血血铅浓度,Cx43、p-Cx43、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果 与对照组相比,染毒组血铅水平显著升高(P<0.05);高剂量铅染毒组心脏脏器系数显著降低,Rg1干预后脏器系数升高(P<0.05)。HE染色显示,对照组、DMSO组及辛醇组心肌结构无明显变化;低、中剂量铅染毒组出现心肌纤维排列紊乱;高剂量铅染毒组心肌纤维断裂。与铅染毒组、辛醇组相比,Rg1干预组心肌组织结构明显改善,心肌纤维排列相对整齐紧密,无明显炎症。Western blot检测结果显示,铅染毒组Cx43、p-Cx43、Bcl-2及LC3-Ⅰ蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Cleaved caspase-3及LC3-Ⅱ蛋白表达高于对照组(P<0.05);Rg1干预组Cx43、p-Cx43、Bcl-2及LC3-Ⅰ蛋白表达高于各剂量铅染毒组(P<0.05),Bax、Cleaved caspase-3及LC3-Ⅱ蛋白表达低于各剂量铅染毒组(P<0.05)。辛醇组与对照组、辛醇+Rg1组相比,Cx43蛋白表达差异无统计学意义。结论 人参皂苷Rg1对铅致心肌细胞损伤的保护作用可能与其升高Cx43、p-Cx43蛋白表达有关。 展开更多
关键词 人参皂苷Rg1(Rg1) 醋酸铅 缝隙连接蛋白43(Cx43)
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工频磁场辐照导致细胞连接蛋白Cx43的异常移位 被引量:6
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作者 曾群力 胡根林 +3 位作者 姜槐 付一提 毛国根 鲁德强 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期260-262,F003,共4页
目的 研究 5 0Hz正弦磁场对细胞连接蛋白Cx4 3移位的影响 ,以探索极低频磁场 (ELFMF)抑制细胞间隙连接通讯 (GJIC)的机制。方法 用 5 0Hz、0 .8mT的正弦磁场和 (或 )十四酰基咐哌醇酯 (TPA ,5ng/ml)对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL... 目的 研究 5 0Hz正弦磁场对细胞连接蛋白Cx4 3移位的影响 ,以探索极低频磁场 (ELFMF)抑制细胞间隙连接通讯 (GJIC)的机制。方法 用 5 0Hz、0 .8mT的正弦磁场和 (或 )十四酰基咐哌醇酯 (TPA ,5ng/ml)对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)处理 2 4h(其中TPA处理 1h)。采用间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦显微镜进行连接蛋白Cx4 3定位的测定 ;采用Westernblot方法检测胞浆和核内Cx4 3蛋白的含量。结果 正常组细胞间连接处有明亮的点状标记 ,连接成线 ;TPA处理组、0 .8mT正弦磁场单独作用组及 0 .8mT正弦磁场联合TPA处理组细胞的连接处标记斑点均较正常组减少 ,大量Cx4 3蛋白标记斑点出现在胞浆内 ,且在核附近聚集。各组核内Cx4 3蛋白条带很淡 ,而胞浆内Cx4 3蛋白含量ELF组 (2 .0 3± 0 .89)和TPA组 (2 .4 3± 0 .82 )明显增加 ,与正常组 (1.0 4± 0 .17)相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论  5 0Hz正弦磁场直接和 (或 )协同TPA抑制体外培养细胞GJIC功能与细胞连接蛋白Cx4 展开更多
关键词 极低频磁场 连接蛋白CX43 激光共聚焦显微镜 细胞缝隙连接通讯 生物学效应 工频磁场 异常移位
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