不同来源栀子药材的质量比较研究

采用高效液相色谱法测定13个不同产地栀子中栀子苷、绿原酸和西红花苷-1三种主要药效成分的含量，并建立了化学成分指纹图谱，结果显示GAP基地产栀子药材的栀子苷和西红花苷-1含量最高，均显著高于其它12个非GAP基地来源栀子的含量。以中位数法自动生成对照图谱，确定13个不同产地来源栀子药材共有峰10个，各峰分离情况良好。应用Matlab软件进行相似度分析，结果显示13个来源药材的相似度在0．9106—0．9979之间，不同产地栀子药材质量存在一定差异。本研究结果可为科学评价栀子质量提供参考；规范化种植可以稳定和有效控制栀子药材的质量。

用LC-MS/MS法同时测定栀子中3种环烯醚萜苷类成分的含量

目的建立同时测定栀子中3种环烯醚萜苷类成分含量的方法。方法采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。色谱条件:Dikma Diamonsil~ C18柱(100mm×4.6mm,5μm);流动相为0.1%乙酸水(A)-0.1%乙酸乙腈(B),梯度洗脱;流速为0.4ml/min;柱温40℃;进样量2μl。质谱条件:电喷雾离子化电离源(ESI),正/负离子检测,雾化气流量3L/min,干燥气流量15L/min,脱溶剂管温度240℃,加热块温度400℃,碰撞气压力230kPa,以多反应监测模式(MRM)配对离子方式进行定量,山栀苷、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷选择的离子对质荷比分别为m/z 391.10→149.30,m/z 573.40→365.05,m/z447.30→225.15。结果回归方程为:山栀苷Y=243.810 X-289.957,r=0.999 9;京尼平龙胆双糖苷Y=137.125 X+2 092.76,r=0.999 6;栀子苷Y=2 030.32 X+823 213,r=0.999 8;线性范围分别为10.76～2 152ng/ml、516～4 128ng/ml、2 000～20 000ng/ml。精密度、稳定性、重复性和加样回收率试验结果均符合要求。结论此方法可快速、准确、灵敏地测定栀子中3种环烯醚萜苷类成分的含量,为栀子的质量控制提供依据。

基于回肠顶端钠依赖性胆酸转运体探究栀子水提物对小鼠胆汁淤积的治疗作用

目的 基于回肠顶端钠依赖性胆酸转运体(apical sodium-dependent bile acid transporter,ASBT)考察栀子水提物对α-异硫氰酸萘酯(α-naphthylisothiocyanate,ANIT)诱导的胆汁淤积小鼠的治疗作用,并筛选潜在的活性化合物。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、栀子对照(240 mg/kg)组、ANIT组及栀子水提物低、中、高剂量(60、120、240 mg/kg)组和熊去氧胆酸(60 mg/kg)组,每组10只。给予药物进行干预,2次/d,连续14 d;于第12天单次ig ANIT(50 mg/kg)诱导小鼠胆汁淤积模型。采用栀子水提物干预ANIT诱导的小鼠小肠上皮MODE-K细胞;测定血清生化指标及肝脏、血清、胆囊、回肠及粪便中胆酸盐含量;测定小鼠回肠及MODE-K细胞ASBT及法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的表达;采用原位肠灌流及外翻肠囊法测定回肠组织及肝门静脉中牛磺胆酸钠(taurocholate sodium,TCA)含量;采用定性代谢组学技术测定给予栀子水提物2 h后血清及回肠组织中的化合物。结果 与ANIT组比较,栀子水提物能缓解肝脏病变,减少肝脏胆酸盐及回肠TCA含量(P<0.05、0.01),增加粪便胆酸盐的含量(P<0.05);增加小鼠回肠及MODE-K细胞FXR表达(P<0.05、0.01、0.001),减少ASBT的表达(P<0.01、0.001)。同时,筛选出潜在的活性化合物37个。结论 栀子水提物可通过激活回肠FXR而抑制回肠ASBT的表达和功能,减少回肠胆酸盐重吸收并促进粪便排泄,减少肝脏胆酸盐蓄积,从而缓解ANIT诱导的小鼠肝内胆汁淤积。

指纹图谱结合一测多评法的栀子质量控制方法研究

目的建立栀子的指纹图谱,并同时建立其中6个主要成分含量的一测多评分析方法,以期对栀子药材进行整体质量控制。方法基于高效液相色谱结合紫外变波长分段检测,在各类化合物的最大吸收波长下,建立包含环烯醚萜苷类(240 nm)及二萜类(440 nm)成分信息的栀子指纹图谱。在此基础上,分别以栀子苷和西红花苷Ⅰ为内标,计算4个环烯醚萜苷类成分(山栀苷、山栀子苷B、京尼平龙胆双糖苷和栀子苷)和2个二萜类成分(西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ)的校正因子,通过4台高效液相色谱仪及4根不同色谱柱进行耐用性考察,并与外标法测定结果比较,验证一测多评方法的准确性。结果19批栀子的指纹图谱共标定20个共有峰,相似度为0.981~0.999;在240 nm下,以栀子苷为内标,山栀苷、山栀苷B、京尼平龙胆双糖苷和栀子苷的校正因子分别为1.15、1.36、1.54和1.00;440 nm下,以西红花苷Ⅰ为内标,西红花苷Ⅱ的相对校正因子为1.11,且耐用性较好。应用一测多评法测定6个成分的含量,与外标法测定结果比较,含量准确度均值为100.14%,RSD<3%,无明显差异。19批栀子中6个待测成分的质量分数范围分别为0.09%~0.35%、0.28%~0.82%、0.31%~1.00%、4.60%~7.78%、0.62%~1.64%和0.07%~0.26%。结论所建立的指纹图谱结合一测多评法简便可行,可为栀子药材整体质量控制提供一定参考和依据。