二甲双胍调控Gas6/Axl信号通路抑制食管鳞癌细胞增殖及迁移

目的 探讨二甲双胍对食管鳞癌细胞增殖及迁移的抑制作用,以及生长停滞特异性蛋白6(growth-arrest-specific protein 6,Gas6)与其配体Axl的调控机制。方法 食管鳞癌EC109和TE-1细胞用不同浓度二甲双胍处理后,采用CCK-8法或克隆形成实验测定细胞增殖情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力,TUNEL实验标记细胞凋亡比例,Mito-SOX探查线粒体氧化应激状态,JC-1显示线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,免疫荧光实验检测Gas6表达,Western blot法分析Gas6/Axl通路和凋亡相关蛋白变化。此外,联合Axl高效抑制剂(bemcentinib,R428)处理后,观察二甲双胍对EC109细胞增殖、迁移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。结果 相较于对照组,二甲双胍显著降低EC109和TE-1细胞的活性(PEC109<0.001;PTE-1<0.001),而对Het-1A细胞活性的影响并不显著(P=0.38);同时二甲双胍抑制EC109细胞克隆形成能力(P=0.002)和迁移能力(P<0.001),增加凋亡率(P=0.002),上调线粒体活性氧水平(P<0.001),下调MMP水平(P<0.001)。此外,二甲双胍可降低EC109细胞Gas6荧光强度,阻断EC109和TE-1细胞中Gas6表达,下调EC109细胞内p-Axl、Axl和Bcl2的水平,并增加Bax以及细胞色素C和Caspase3活性。二甲双胍联合R428较单独二甲双胍能更有效抑制EC109细胞增殖、迁移及裸鼠皮下成瘤能力。结论 二甲双胍能够调节线粒体稳态,激活氧化应激诱导的凋亡反应,进而发挥抗EC109细胞增殖及迁移作用,该作用可能与下调Gas6/Axl信号通路相关。

Gas6/Axl信号通路与肿瘤关系的研究进展

Axl为受体酪氨酸激酶家族成员之一,它与配体Gas6结合后激活自身酪氨酸激酶活性,通过激活下游信号转导途径,在细胞黏附、抗凋亡、增殖及迁移中发挥重要作用。近年来研究发现,在多种肿瘤组织中Gas6、Axl高表达,Gas6/Axl信号通路的激活在肿瘤细胞抗凋亡、增殖以及肿瘤血管生成、肿瘤侵袭和转移方面也有重要作用。目前针对拮抗Gas6/Axl信号通路的抗肿瘤实验研究也证实,Gas6/Axl信号通路在肿瘤治疗中有重要作用,因此Gas6/Axl信号通路可能会成为肿瘤治疗的新靶点。本文就Gas6/Axl信号通路与肿瘤的发生、发展及在抗肿瘤治疗中应用的进展作一综述。

GAS6/AXL信号通路失活对小鼠能量代谢的影响

目的研究小鼠生长停滞特异蛋白6(growth arrest-specific gene 6,GAS6)信号通路的失活对维持机体能量代谢稳态的影响。方法以GAS6主要受体Axl基因敲除(Axl-/-)小鼠及其野生型(Axl+/+)小鼠为研究对象,比较两组动物基础血糖值、血脂四项指标、脂肪系数及骨骼肌中糖代谢信号蛋白PI3K、AKT与葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)基因表达水平及其蛋白磷酸化水平间的差异;同时检测人工诱发2型糖尿病(type2 diabetes mellitus,T2DM)造模前后小鼠血清GAS6蛋白水平与T2DM模型成模率的改变之间是否存在相关性。结果 Axl-/-小鼠血脂出现异常波动,且脂肪沉积率显著高于野生型小鼠(P<0.01)。Axl-/-小鼠血糖调节能力受损,其空腹血糖值显著高于野生型,骨骼肌Glut4的mRNA水平升高,而PI3K、AKT和GLUT4蛋白的磷酸化水平均略有下降。经人工诱发T2DM后,Axl+/+和Axl-/-小鼠血浆中GAS6浓度均显著低于各自对照组,且Axl-/-小鼠T2DM模型的成模率是Axl+/+小鼠的2倍(P<0.01)。结论 GAS6/AXL信号通路的激活在一定程度上降低血糖和抑制脂肪沉积。

Gas6／Axl信号通路失活对小鼠能量代谢的影响

目的研究小鼠血清中生长停滞特异蛋白6（growtharrest—specificprotein6，Gas6）对维持其能量代谢稳态的影响。方法以敲除了Gas6主要受体Axl基因（Axl-／-）及其野生型（Axl-／-）的小鼠为研究对象，首先比较两组动物基础血糖值、血脂4项指标、脂肪系数及骨骼肌中信号蛋白P13K、Akt与葡萄糖转运蛋白4（Glutg）基因表达水平及其蛋白磷酸化水平间的差异；其次检测人工诱发2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）模型后，两组小鼠体内血清Gas6蛋白水平及T2DM模型成模率间是否存在差异。高于野生型小鼠。

熊果苷调节Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的神经保护作用

目的 研究熊果苷通过调节Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠神经保护的作用。方法 采用Rice-Vannucci法构建HIBD新生大鼠模型,并将造模成功的48只新生大鼠随机分为Model组、低剂量熊果苷组(50 mg/kg)、高剂量熊果苷组(100 mg/kg)、高剂量熊果苷+Anticancer agent 109组(100 mg/kg+3.00 mg/kg Gas6/Axl抑制剂);再选12只新生大鼠作为NC组。平衡木法对各组大鼠进行行为学评估;苏木精-伊红(H-E)染色检测大鼠脑组织病理损伤;TTC染色法检测脑梗死面积;ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;Western blot检测大鼠海马组织中Gas6、磷酸化Axl(p-Axl)、Axl蛋白表达。结果 与Model组比较,低剂量熊果苷组和高剂量熊果苷组大鼠行为学评分降低,脑组织结构较正常,大鼠脑梗死面积减少,血清中IL-6、MDA表达减少,SOD、BDNF表达增加,Gas6、Axl蛋白表达增多,p-Axl蛋白表达减少(P<0.05)。高剂量熊果苷+Anticancer agent 109组与高剂量熊果苷组比较,结果相反,HIBD大鼠神经损伤加重(P<0.05)。结论 熊果苷可能通过激活Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠发挥神经保护作用。

欧前胡素调节Gas6/Axl轴对膀胱癌荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:探讨欧前胡素(IMP)调节生长停滞特异蛋白6(Gas6)/Axl轴对膀胱癌荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:从60只SPF级雄性C57BL/6小鼠中随机选取12只小鼠作为对照组(CON组),其余小鼠平均分为Model组、IMP组、Gas6组、IMP+Gas6组,每组12只,往其左侧前肢皮下注射0.2 mL浓度为1×10^(7)个/mL的鼠源性膀胱癌肿瘤细胞系T739细胞溶液(Model组和IMP组注射对照载体的T739稳转株细胞,Gas6组和IMP+Gas6组注射过表达Gas6的T739稳转细胞株)造模。造模成功后,IMP组及IMP+Gas6组通过腹腔注射5 mg/kg的IMP;CON组、Model组及Gas6组通过腹腔注射等量的生理盐水,2天1次,持续5次。测量小鼠肿瘤体积和重量;测定胸腺指数和脾脏指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;苏木精-伊红(HE)染色检查肿瘤组织病理变化;流式细胞术检测T细胞亚群;TUNEL染色检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测Gas6/Axl通路相关蛋白表达。结果:Model组肿瘤细胞整体上排列松散,出现不同程度的核固缩、核碎裂现象;IMP则可以逆转该现象,使肿瘤细胞排列重新变得紧密,细胞核固缩程度提升,核碎裂现象降低;Model组较CON组肿瘤体积、肿瘤质量、CD8^(+)细胞百分比、Gas6、Axl蛋白水平、VEGF水平显著增加(P<0.05),胸腺指数和脾脏指数、IL-2、IFN-γ、CD4^(+)细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)、肿瘤细胞凋亡率显著下降(P<0.05);与Model组相比,IMP组胸腺指数和脾脏指数、IL-2、IFN-γ、CD4^(+)细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)、肿瘤细胞凋亡率显著升高(P<0.05),肿瘤体积、肿瘤质量、CD8^(+)细胞百分比、Gas6、Axl蛋白水平、VEGF水平显著下降(P<0.05);而Gas6组结果与IMP组趋势相反;而IMP+Gas6组的结果显示:IMP能逆转Gas6过表达后对膀胱癌荷瘤小鼠的促瘤作用。结论:IMP可能通过下调Gas6/Axl信号通路改善膀胱癌荷瘤小鼠免疫功能,从而产生抑瘤效果。

穿心莲内酯对大鼠神经性疼痛的影响机制

目的研究穿心莲内酯对大鼠神经性疼痛(NP)的影响机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、穿心莲内酯低剂量组(1 mg/kg)、穿心莲内酯中剂量组(5 mg/kg)、穿心莲内酯高剂量组(10 mg/kg)、阿魏酸钠组(150 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余各组大鼠均采用坐骨神经慢性压迫损伤法复制NP模型。建模成功后,各给药组大鼠鞘内注射相应剂量的穿心莲内酯或灌胃相应剂量的阿魏酸钠,假手术组和模型组大鼠给予等体积生理盐水,每日1次,连续14 d。给药7、14 d时检测各组大鼠的机械性缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL);末次给药后,检测各组大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、P物质(SP)水平,观察脊髓组织病理形态,检测脊髓组织中离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)、生长停滞特异性蛋白6(Gas6)、受体型酪氨酸激酶Axl(简称“Axl”)mRNA及蛋白表达量。结果与模型组比较,各给药组大鼠给药7、14 d时MWT、TWL以及末次给药后Gas6、Axl mRNA及蛋白表达量均显著升高(P<0.05),IL-6、TNF-α、PGE2、SP水平和Iba-1mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.05),脊髓组织神经元排列紊乱、毛细血管扩张充血等病理损伤均不同程度减轻;穿心莲内酯高剂量组与阿魏酸钠组大鼠上述指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论穿心莲内酯可能通过激活Gas6/Axl信号轴来抑制炎症反应,从而发挥缓解NP的作用。

木犀草素抗肿瘤血管生成作用机制的研究进展

血管生成是恶性肿瘤的标志之一,涉及血管内皮细胞的增殖、迁移和细胞外基质分解等多种途径。血管内皮生长因子(VEGF)靶向抗肿瘤血管生成是临床肿瘤治疗的有效方法。木犀草素为黄酮类化合物,具有抗肿瘤活性,可通过抑制VEGF及相关信号通路、抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、抑制血管新生分子、抑制孕激素活性、靶向刺激Wnt信号通路、阻断生长停滞特异性蛋白6(Gas6)/受体酪氨酸激酶(Axl)信号通路而发挥抗肿瘤的血管生成作用。归纳了木犀草素抗肿瘤血管生成的作用机制,以期为木犀草素的临床应用提供参考。