Gas6/MerTK通路诱导线粒体自噬在肺癌进展的机制研究

目的:通过下调Gas6/MerTK信号通路探究线粒体自噬在肺癌进展中的可能机制。方法:培养Calu-1与A-427细胞系,分为(1)对照组、Gas6干预(下调Gas6)组,(2)对照组、雷帕霉素(自噬诱导剂,RAPA)组,Western blotting检侧Gas6、MerTK、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平,透射电镜观察细胞自噬小体,平板克隆检侧Calu-1与A-427细胞克隆能力,CCK-8检测Calu-1与A-427细胞活力,细胞划痕实验检测Calu-1与A-427细胞的迁移能力,免疫荧光检测Calu-1与A-427细胞中LC3表达水平。结果:与对照组相比,Gas6干预组Calu-1细胞与A-427细胞的Gas6、MerTK蛋白水平显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ、Beclin1蛋白水平显著增加(P<0.05),且Calu-1细胞与A-427细胞中自噬小体形成,大量自噬空泡聚集,细胞克隆能力显著降低(P<0.05)、细胞活力显著降低(P<0.05)、细胞迁移距离显著减少(P<0.05)。与对照组相比,RAPA组Calu-1细胞与A-427细胞LC3蛋白表达增加(P<0.05),细胞克隆能力显著降低(P<0.05)、细胞活力显著降低(P<0.05)、细胞迁移距离显著减少(P<0.05)。结论:下调Gas6/MerTK信号通路可诱导Calu-1与A-427细胞线粒体自噬,并抑制其增殖、活性和迁移能力。

二甲双胍调控Gas6/Axl信号通路抑制食管鳞癌细胞增殖及迁移

目的 探讨二甲双胍对食管鳞癌细胞增殖及迁移的抑制作用,以及生长停滞特异性蛋白6(growth-arrest-specific protein 6,Gas6)与其配体Axl的调控机制。方法 食管鳞癌EC109和TE-1细胞用不同浓度二甲双胍处理后,采用CCK-8法或克隆形成实验测定细胞增殖情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力,TUNEL实验标记细胞凋亡比例,Mito-SOX探查线粒体氧化应激状态,JC-1显示线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,免疫荧光实验检测Gas6表达,Western blot法分析Gas6/Axl通路和凋亡相关蛋白变化。此外,联合Axl高效抑制剂(bemcentinib,R428)处理后,观察二甲双胍对EC109细胞增殖、迁移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。结果 相较于对照组,二甲双胍显著降低EC109和TE-1细胞的活性(PEC109<0.001;PTE-1<0.001),而对Het-1A细胞活性的影响并不显著(P=0.38);同时二甲双胍抑制EC109细胞克隆形成能力(P=0.002)和迁移能力(P<0.001),增加凋亡率(P=0.002),上调线粒体活性氧水平(P<0.001),下调MMP水平(P<0.001)。此外,二甲双胍可降低EC109细胞Gas6荧光强度,阻断EC109和TE-1细胞中Gas6表达,下调EC109细胞内p-Axl、Axl和Bcl2的水平,并增加Bax以及细胞色素C和Caspase3活性。二甲双胍联合R428较单独二甲双胍能更有效抑制EC109细胞增殖、迁移及裸鼠皮下成瘤能力。结论 二甲双胍能够调节线粒体稳态,激活氧化应激诱导的凋亡反应,进而发挥抗EC109细胞增殖及迁移作用,该作用可能与下调Gas6/Axl信号通路相关。

Gas6/Axl信号通路与肿瘤关系的研究进展

Axl为受体酪氨酸激酶家族成员之一,它与配体Gas6结合后激活自身酪氨酸激酶活性,通过激活下游信号转导途径,在细胞黏附、抗凋亡、增殖及迁移中发挥重要作用。近年来研究发现,在多种肿瘤组织中Gas6、Axl高表达,Gas6/Axl信号通路的激活在肿瘤细胞抗凋亡、增殖以及肿瘤血管生成、肿瘤侵袭和转移方面也有重要作用。目前针对拮抗Gas6/Axl信号通路的抗肿瘤实验研究也证实,Gas6/Axl信号通路在肿瘤治疗中有重要作用,因此Gas6/Axl信号通路可能会成为肿瘤治疗的新靶点。本文就Gas6/Axl信号通路与肿瘤的发生、发展及在抗肿瘤治疗中应用的进展作一综述。

GAS6/AXL信号通路失活对小鼠能量代谢的影响

目的研究小鼠生长停滞特异蛋白6(growth arrest-specific gene 6,GAS6)信号通路的失活对维持机体能量代谢稳态的影响。方法以GAS6主要受体Axl基因敲除(Axl-/-)小鼠及其野生型(Axl+/+)小鼠为研究对象,比较两组动物基础血糖值、血脂四项指标、脂肪系数及骨骼肌中糖代谢信号蛋白PI3K、AKT与葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)基因表达水平及其蛋白磷酸化水平间的差异;同时检测人工诱发2型糖尿病(type2 diabetes mellitus,T2DM)造模前后小鼠血清GAS6蛋白水平与T2DM模型成模率的改变之间是否存在相关性。结果 Axl-/-小鼠血脂出现异常波动,且脂肪沉积率显著高于野生型小鼠(P<0.01)。Axl-/-小鼠血糖调节能力受损,其空腹血糖值显著高于野生型,骨骼肌Glut4的mRNA水平升高,而PI3K、AKT和GLUT4蛋白的磷酸化水平均略有下降。经人工诱发T2DM后,Axl+/+和Axl-/-小鼠血浆中GAS6浓度均显著低于各自对照组,且Axl-/-小鼠T2DM模型的成模率是Axl+/+小鼠的2倍(P<0.01)。结论 GAS6/AXL信号通路的激活在一定程度上降低血糖和抑制脂肪沉积。

Gas6／Axl信号通路失活对小鼠能量代谢的影响

目的研究小鼠血清中生长停滞特异蛋白6（growtharrest—specificprotein6，Gas6）对维持其能量代谢稳态的影响。方法以敲除了Gas6主要受体Axl基因（Axl-／-）及其野生型（Axl-／-）的小鼠为研究对象，首先比较两组动物基础血糖值、血脂4项指标、脂肪系数及骨骼肌中信号蛋白P13K、Akt与葡萄糖转运蛋白4（Glutg）基因表达水平及其蛋白磷酸化水平间的差异；其次检测人工诱发2型糖尿病（type2diabetesmellitus，T2DM）模型后，两组小鼠体内血清Gas6蛋白水平及T2DM模型成模率间是否存在差异。高于野生型小鼠。

熊果苷调节Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的神经保护作用

目的 研究熊果苷通过调节Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠神经保护的作用。方法 采用Rice-Vannucci法构建HIBD新生大鼠模型,并将造模成功的48只新生大鼠随机分为Model组、低剂量熊果苷组(50 mg/kg)、高剂量熊果苷组(100 mg/kg)、高剂量熊果苷+Anticancer agent 109组(100 mg/kg+3.00 mg/kg Gas6/Axl抑制剂);再选12只新生大鼠作为NC组。平衡木法对各组大鼠进行行为学评估;苏木精-伊红(H-E)染色检测大鼠脑组织病理损伤;TTC染色法检测脑梗死面积;ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;Western blot检测大鼠海马组织中Gas6、磷酸化Axl(p-Axl)、Axl蛋白表达。结果 与Model组比较,低剂量熊果苷组和高剂量熊果苷组大鼠行为学评分降低,脑组织结构较正常,大鼠脑梗死面积减少,血清中IL-6、MDA表达减少,SOD、BDNF表达增加,Gas6、Axl蛋白表达增多,p-Axl蛋白表达减少(P<0.05)。高剂量熊果苷+Anticancer agent 109组与高剂量熊果苷组比较,结果相反,HIBD大鼠神经损伤加重(P<0.05)。结论 熊果苷可能通过激活Gas6/Axl信号通路对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠发挥神经保护作用。

欧前胡素调节Gas6/Axl轴对膀胱癌荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:探讨欧前胡素(IMP)调节生长停滞特异蛋白6(Gas6)/Axl轴对膀胱癌荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:从60只SPF级雄性C57BL/6小鼠中随机选取12只小鼠作为对照组(CON组),其余小鼠平均分为Model组、IMP组、Gas6组、IMP+Gas6组,每组12只,往其左侧前肢皮下注射0.2 mL浓度为1×10^(7)个/mL的鼠源性膀胱癌肿瘤细胞系T739细胞溶液(Model组和IMP组注射对照载体的T739稳转株细胞,Gas6组和IMP+Gas6组注射过表达Gas6的T739稳转细胞株)造模。造模成功后,IMP组及IMP+Gas6组通过腹腔注射5 mg/kg的IMP;CON组、Model组及Gas6组通过腹腔注射等量的生理盐水,2天1次,持续5次。测量小鼠肿瘤体积和重量;测定胸腺指数和脾脏指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;苏木精-伊红(HE)染色检查肿瘤组织病理变化;流式细胞术检测T细胞亚群;TUNEL染色检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测Gas6/Axl通路相关蛋白表达。结果:Model组肿瘤细胞整体上排列松散,出现不同程度的核固缩、核碎裂现象;IMP则可以逆转该现象,使肿瘤细胞排列重新变得紧密,细胞核固缩程度提升,核碎裂现象降低;Model组较CON组肿瘤体积、肿瘤质量、CD8^(+)细胞百分比、Gas6、Axl蛋白水平、VEGF水平显著增加(P<0.05),胸腺指数和脾脏指数、IL-2、IFN-γ、CD4^(+)细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)、肿瘤细胞凋亡率显著下降(P<0.05);与Model组相比,IMP组胸腺指数和脾脏指数、IL-2、IFN-γ、CD4^(+)细胞百分比、CD4^(+)/CD8^(+)、肿瘤细胞凋亡率显著升高(P<0.05),肿瘤体积、肿瘤质量、CD8^(+)细胞百分比、Gas6、Axl蛋白水平、VEGF水平显著下降(P<0.05);而Gas6组结果与IMP组趋势相反;而IMP+Gas6组的结果显示:IMP能逆转Gas6过表达后对膀胱癌荷瘤小鼠的促瘤作用。结论:IMP可能通过下调Gas6/Axl信号通路改善膀胱癌荷瘤小鼠免疫功能,从而产生抑瘤效果。

木犀草素抗肿瘤血管生成作用机制的研究进展

血管生成是恶性肿瘤的标志之一,涉及血管内皮细胞的增殖、迁移和细胞外基质分解等多种途径。血管内皮生长因子(VEGF)靶向抗肿瘤血管生成是临床肿瘤治疗的有效方法。木犀草素为黄酮类化合物,具有抗肿瘤活性,可通过抑制VEGF及相关信号通路、抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、抑制血管新生分子、抑制孕激素活性、靶向刺激Wnt信号通路、阻断生长停滞特异性蛋白6(Gas6)/受体酪氨酸激酶(Axl)信号通路而发挥抗肿瘤的血管生成作用。归纳了木犀草素抗肿瘤血管生成的作用机制,以期为木犀草素的临床应用提供参考。

三七总皂苷对巨噬细胞M1极化的影响及机制初探

目的 观察三七总皂苷(PNS)对巨噬细胞(Mφ)M1极化及炎症因子TNF-α的影响,并初步探究其效应与调节GAS6/MERTK通路表达的相关性。方法 分别建立THP-1来源Mφ单培养体系和THP-1来源Mφ及类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)的共培养体系;以LPS+IFN-γ诱导MφM1极化,并将细胞分为空白对照组,模型组,5、10、20μg·mL^(-1)PNS组;采用CCK-8法筛选PNS最佳给药浓度;流式细胞术检测M1极化比例;实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测TNF-α、MERTK受体、GAS6配体表达水平;ELISA法检测TNF-α、GAS6分泌水平;Western blot检测MERTK受体总蛋白及磷酸化水平。结果 在单培养条件下,5~20μg·mL^(-1)PNS均可显著抑制M1极化,并上调MERTK表达;在共培养条件下,5~20μg·mL^(-1)PNS同样可显著抑制M1极化并上调MERTK表达,与单培养体系不同的是5μg·mL^(-1)PNS能显著上调HFLS-RA分泌GAS6水平且5、10μg·mL^(-1)PNS处理后MERTK磷酸化水平被显著上调。结论 一定浓度的PNS能显著抑制LPS+IFN-γ诱导的MφM1极化及炎症因子TNF-α的表达水平,其作用机制可能与PNS调节GAS6/MERTK通路表达有关。