Tiam 1反义寡核苷酸转染对胃癌细胞体内外侵袭转移能力的影响

背景与目的：作为细胞骨架结构调节因子，T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam 1）与胃肠道肿瘤侵袭转移密切相关。本研究应用反义寡核苷酸（ASODN）转染技术，特异抑制胃癌细胞中Tiam 1表达，进而观察对胃癌细胞体内、外侵袭转移能力的影响。方法：采用层粘连蛋白黏附法，由胃癌MKN-45细胞株（M0）中筛选获得高侵袭转移亚株（MH）。以脂质体介导将Tiam 1 ASODN转染至MH细胞中，并应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。应用Boyden小室及裸鼠接种法分别观察ASODN转染后MH细胞在体内、外侵袭转移能力方面的改变。结果：应用0．43μmol／L Tiam 1 ASODN转染能特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam 1 mRNA和蛋白表达（0．162±0．018，0．982±0．119），与脂质体转染组（0．789±0．054，1．237±0．108）、正义寡核苷酸（SODN）-脂质体转染组（0．754±0．039，1．234±0．103）、未转染组（0．801±0．065，1．290±0．182）相比，分别约为后三者的20．2％-21．5％、76．1％-79．6％（P〈0．05）。ASODN转染组细胞的体外侵袭、移行能力（10±3、21±9）较SODN转染组（27±10、56±13）、未转染组（26±6、53±12）明显受抑制（P〈0．05），同时ASODN转染组细胞在裸鼠体内的肺转移率（1／5=20％）也较SODN转染组（4／5=80％）、未转染组（4／5=80％）显著下降（P〈0．05）。结论：特异性ASODN转染可有效抑制Tiam 1在胃癌细胞中的表达并削弱其体内、外侵袭转移能力。

反义抑制Tiam 1对胃癌细胞形体重塑影响的实验研究

目的观察T淋巴细胞瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)反义寡核苷酸(ASODN)转染对胃癌细胞形体重塑的影响。方法采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株(M0)中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam1ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及流式细胞技术分别检测Tiam1mRNA和蛋白的表达。采用HE染色、细胞骨架蛋白染色及扫描电镜技术观察转染与未转染MH细胞在形态学方面的不同。结果与未转染组相比,应用0.43μmol/L Tiam 1 ASODN转染可特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam 1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);转染MH细胞的膜表面突起及伪足变稀疏或缩短,细胞骨架结构紊乱程度降低,斑点状肌动蛋白小体减少。结论特异性ASODN转染可有效抑制Tiam1在胃癌细胞中的表达及胃癌细胞形体重塑,这可能对胃癌细胞的侵袭转移产生影响。

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1反义寡核苷酸转染对胃癌细胞形态及侵袭移行能力的影响

目的观察T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam 1）反义寡核苷酸（ASODN）转染对胃癌细胞形态及体外侵袭、移行能力的影响。方法采用层黏连蛋白黏附法，由胃癌MKN-45细胞株（M0）中筛选获得高侵袭转移亚株（MH）。以脂质体介导将Tiam 1 ASODN转染至MH细胞中，并应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及流式细胞技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。采用苏木精-伊红染色、细胞骨架蛋白染色、扫描电镜技术及Boyden小室法分别观察转染与未转染MH细胞在形态学及体外侵袭、移行能力方面的变化。结果与对照组相比，应用0．43μmol／L Tiam 1 ASODN转染可特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam 1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。Tiam 1 ASODN转染MH细胞较未转染MH细胞的体外侵袭、移行能力显著下降（P〈0．05或P〈0．01），同时转染MH细胞较未转染MH细胞膜表面突起及伪足变稀疏或缩短、细胞骨架结构紊乱程度降低、斑点状肌动蛋白小体减少。结论特异性ASODN转染可有效抑制Tiam 1在胃癌细胞中的表达并削弱其体外侵袭、移行能力，这可能是通过调整胃癌细胞骨架结构重组、降低其变形、游走能力而实现的。

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1与胃癌细胞侵袭移行能力的关系

目的检测胃癌细胞中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（T lymphoma invasion and metastasis inducing factor1，Tiaml）的表达及其与肿瘤侵袭、移行能力的关系，同时观察胃癌细胞在形态学方面的变化。方法采用层黏连蛋白黏附法，由胃癌MKN-45细胞株（M0）中筛选获得高（MH）、低（ML）黏附亚株。应用流式细胞仪检测Tiaml在胃癌细胞中的表达，以Boyden小室法测定M0、ML、MH细胞的体外侵袭、移行能力，并分析其与Tiaml表达间的关系，同时采用苏木精-伊红及细胞骨架蛋白染色、扫描电镜技术观察胃癌细胞形态。结果MH细胞的体外侵袭、移行能力及Tiaml表达均强于M0、ML细胞（P〈0．05），且Tiaml表达与胃癌细胞体外侵袭、移行能力呈正相关（r=0．997和1．000）；同时与M0、ML相比，MH胞体伸展，表面突起增多，片状伪足宽厚，丝状伪足细长而密集，异型性明显，且细胞骨架结构较紊乱，斑点状肌动蛋白小体增多。但M0、ML细胞间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Tiaml表达水平升高可能促进胃癌细胞侵袭、移行。这或许是通过调整胃癌细胞骨架结构重组，增强其变形、游走能力而实现的。