厄洛替尼联合放疗对MKN45细胞株的影响

目的:观察厄洛替尼联合放疗对人胃癌MKN45细胞周期和凋亡的影响,了解厄洛替尼对放疗增敏的作用机制.方法:通过MTT法和集落形成实验,检测厄洛替尼和放射线对MKN45细胞的生长抑制作用,计算出半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)和放射生物学参数平均致死剂量(mean lethal dose,D0)、准阈剂量(quasi-threshold,Dq)值,得出放射增敏比;流式细胞仪检测MKN45细胞经厄洛替尼及联合放射线处理后细胞的凋亡率及周期分布情况;Westernblot法检测厄洛替尼及联合放射线对MKN45细胞的Bax与Bcl-2蛋白表达的影响.结果:厄洛替尼及放射线均能抑制MKN45细胞的生长,随用药浓度或剂量的增高,抑制作用增强(P<0.01).厄洛替尼与放射线联合对MKN45细胞的抑制作用大于单药和单纯照射(P<0.01);两者联合使S期细胞比率明显降低,放射敏感的G2/M期和G0/G1期细胞比率明显增加(71.87±0.77vs60.72±0.26,P<0.01),细胞凋亡率增加;厄洛替尼联合放射线作用于细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达则明显增加.结论:厄洛替尼通过增加G2/M和G0/G1期细胞比率,降低Bcl-2、升高Bax蛋白表达,从而降低Bcl-2/Bax比率,增加细胞凋亡,以此提高MKN45细胞的放射敏感性.

胃泌素对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白表达的影响研究

目的探讨胃泌素(Gastin)对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45依药物干预进行分组,共分为三组,浓度10^(-6)mol/L的胃泌素组、胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)联合组、不加药物培养液的对照组,均培养24 h、48 h。培养结束后取其上清液,应用酶标仪检测光密度值,连续3次。采用放射免疫法(RIA)检测OPN的表达,应用MTT法测定人胃癌细胞MKN45增殖情况。结果浓度10^(-6)mol/L的胃泌素对人胃癌细胞MKN45的增殖较对照组及联合组有明显的促进作用,差异有显著性(P<0.05);在胃癌细胞株MKN45培养液中测出OPN,随着培养时间的增加,OPN表达也有所增加,胃泌素组较对照组及联合组比较,可明显增加MKN45中的OPN含量,差异有显著性(P<0.05)。结论胃泌素会促进人胃癌细胞MKN45增殖,并促使OPN的表达,提示胃泌素促人胃癌细胞MKN45作用与OPN表达有一定关系;而其受体拮抗剂丙谷胺则可以对这种促进作用产生明显抑制作用。

非甾体抗炎药塞来昔布和吲哚美辛对胃癌细胞MKN45的抑制作用

目的:探讨非甾体抗炎药塞来昔布和吲哚美辛对胃癌细胞MKN45的增殖、凋亡的作用及相关作用机制。方法:MTT法检测不同浓度的塞来昔布和吲哚美辛对MKN45增殖的影响。非甾体抗炎药单独或联合应用P38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)处理MKN45细胞,采用流式细胞术检测体外细胞周期及细胞凋亡情况;Western印迹法检测COX2,p-P38MAPK及P38MAPK蛋白的表达情况。结果:MTT的检测结果显示非甾体抗炎药塞来昔布和吲哚美辛均可浓度依赖性的抑制胃癌细胞MKN45的体外增殖。流式细胞周期的检测结果显示非甾体抗炎药可抑制MKN45细胞周期的G1/S转换,而联合应用SB203580则可部分逆转非甾体抗炎药的抑制效应。细胞凋亡的检测结果显示非甾体抗炎药可上调细胞中P53和cleaved-caspase3/caspase3的表达,促进MKN45细胞凋亡;而联合使用SB203580可降低单加药组的细胞凋亡率,部分抑制细胞中P53和cleaved-caspase3/caspase3的表达。此外,Western印迹法的检测结果显示非甾体抗炎药可抑制细胞中COX2的表达,增加p-P38MAPK/P38MAPK的蛋白表达水平;联合使用SB203580可部分逆转该作用。结论:非甾体抗炎药可通过P38MAPK信号通路抑制胃癌细胞MKN45的增殖,并促进其凋亡。

西咪替丁对人胃癌细胞MKN45的生长抑制和促凋亡的研究

目的 探讨西咪替丁对胃癌细胞MKN45生长的抑制和凋亡作用。方法 采用MTT比色法测定不同浓度西咪替丁作用下胃癌细胞MKN45培养液的OD值 ,并用流式细胞仪测定西咪替丁对MKN45的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 西咪替丁作用 72小时 ,抑制胃癌细胞MKN45的生长并呈剂量依赖趋势。胃癌细胞MKN45细胞周期发生改变 ,G1期百分比减少 ,S期百分比增加 ,并出现明显的细胞凋亡峰。结论 西咪替丁可能通过诱导胃癌细胞MKN45凋亡从而抑制其细胞增殖。

HMGA2shRNA真核表达载体转染胃癌MKN45细胞株的沉默作用

目的:将HMGA2shRNA真核表达载体转染至胃癌细胞MKN45,检测其HMGA2mRNA及蛋白的表达。方法:实验分3组:空白组(未转染的胃癌细胞)、实验组(转染HMGA2shRNA组)、阴性对照组(转染错义序列组),RT-PCR和Western blot分别检测HMGA2在mRNA及蛋白水平的变化。结果:与空白组和阴性对照组相比,实验组HMGA2mRNA的表达明显下降,差异具有统计学意义(均P<0.05);HMGA2蛋白表达的变化与基因的变化相一致,实验组的蛋白表达明显受抑制,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:HMGA2的特异性shRNA表达载体抑制了HMGA2的表达,HMGA2shRNA转染有望用于胃癌的基因治疗,为进一步研究其更多功能打下基础。

贝母素乙联合奥沙利铂对胃癌MKN45细胞增殖和凋亡作用研究

目的研究贝母素乙(PMI)联合奥沙利铂对胃癌MKN45细胞增殖和凋亡作用。方法CCK8法检测PMI联用奥沙利铂处理24、48、72 h后胃癌MKN45细胞的OD值计算细胞增殖率以及凋亡率,筛选最佳作用浓度及作用时间;结晶紫染色法观察PMI联用奥沙利铂对胃癌MKN45细胞增殖的影响;Western blot检测PMI联用奥沙利铂处理后对细胞凋亡相关蛋白的表达。结果PMI在浓度范围10~20μg/mL对胃癌MKN45细胞无抑制作用,与奥沙利铂组比较,PMI联用奥沙利铂组干预胃癌MKN45细胞48 h和72 h后抑制率升高,IC50降低,差异有统计学意义(P<0.05)。PMI联用奥沙利铂可抑制胃癌MKN45细胞克隆,下调胃癌MKN45细胞Caspase 3蛋白表达量,增加Cleaved-parp和Cleaved-caspase 3蛋白表达量。结论奥沙利铂在体外实验抑制胃癌MKN45细胞增长,PMI联用奥沙利铂可产生协同作用。

二氢杨梅素对人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的:探讨二氢杨梅素(DHM)对人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法:培养人低分化胃癌MKN45细胞,用不同浓度的DHM(0,10,20,30,40,50μmol/L)分别处理细胞24及48 h,每组实验重复3次,采用CCK8实验检测癌细胞增殖活力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;免疫印迹分析细胞迁移和侵袭相关蛋白表达情况。结果:不同浓度DHM干预可降低MKN45细胞活力。20,30及40μmol/L的DHM处理48 h可明显抑制细胞的迁移能力(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05及0.01)。20及30μmol/L的DHM处理48 h可增加E-cadherin蛋白表达(P<0.01)、降低Vimentin表达(P<0.01),从而逆转EMT过程;10,20及30μmol/L的DHM处理48 h可明显降低pJNK的活性表达水平(P<0.05及0.01),及MMP-2蛋白表达(P<0.01);JNK通路特异性抑制剂SP600125预处理可明显促进DHM对癌细胞侵袭能力的抑制作用(P<0.01)及降低MMP-2表达(P<0.01)。结论:DHM具有抑制人胃癌MKN45细胞的迁移及侵袭的作用,其机制可能与通过JNK通路下调MMP-2蛋白表达水平、逆转上皮间质转化有关。

珠子参多糖通过靶向let-7a/CDK6分子轴调控胃癌MKN45细胞的增殖与凋亡

目的:探讨珠子参多糖(panax japlcus var polysaccharide,PJPS)对胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响及其调控机制。方法:选用人胃癌细胞系HGC27、MGC803、MKN45和胃黏膜上皮细胞株GES-1,分别将let-7a mimics、let-7a inhibitor转染进MKN45细胞;以100μg/ml PJPS处理胃癌细胞系并挑选后续实验细胞株为MKN45细胞;分别添加0、10、50、100、120μg/ml PJPS处理转染后各组MKN45细胞,用CCK-8法、流式细胞术分别检测MKN45细胞增殖活力和细胞凋亡率,用Western blotting检测MKN45细胞中细胞周期依赖性激酶6(cycle dependent kinase 6,CDK6)和凋亡相关蛋白的表达,用qPCR法检测调控胃癌细胞增殖的miRNAs表达水平。用双荧光素酶报告基因实验验证let-7a和CDK6的靶向关系。结果:与其他胃癌细胞比较,100μg/ml PJPS可显著抑制MKN45细胞的增殖活力(P<0.01);同时,100μg/ml PJPS处理后,可显著上调MKN45细胞中let-7a的表达(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实CDK6是let-7a的靶基因。进一步实验显示,PJPS通过上调let-7a靶向抑制CDK6的表达,从而抑制MKN45细胞的增殖并诱导其凋亡(均P<0.01)。结论:PJPS通过调控let-7a/CDK6分子轴抑制胃癌MKN45细胞的增殖并诱导其凋亡。

基于microcarrier 6构建正常免疫小鼠人胃癌移植模型

目的:基于新型3D微载体(microcarrier 6)复合人胃癌MKN45细胞接种于具有正常免疫功能的小鼠,以期建立新型人胃癌正常小鼠转移瘤模型。方法:将60只雄性C57BL/6小鼠按是否将MKN45细胞接种于支架材料随机分为2D组、对照组和3D组;体外构建三维肿瘤细胞培养模型,采用皮下接种法建立小鼠移植瘤模型,观察小鼠成瘤时间、成瘤率、病理学表现等。结果:2D组和对照组均未成瘤,3D组成瘤率达80%,成瘤时间早,移植瘤HE染色和免疫组织化学均符合人胃癌特点。结论:本实验成功基于microcarrier 6复合人胃癌MKN45细胞在正常免疫小鼠中建立人胃癌小鼠移植瘤模型,此模型可以更好地研究和进一步阐明胃癌在免疫功能正常机体中发生、发展机制,同时也为抗癌药物的研发提供了更有价值的动物模型。

蒲公英提取物对MKN-45胃癌细胞株P53和Ki67表达的影响

目的检测蒲公英提取物对MKN45胃癌细胞的P53、Ki67两种蛋白的表达的影响,探求中草药蒲公英抗癌作用的依据。方法以小鼠血清药物学方法配制蒲公英提取物药液,对MKN45胃癌细胞进行培养传代,取处于对数生长期的同一代细胞加入药液血清,应用免疫组化(S-P法)检测p53、Ki67的表达状况。结果 4组中p53的表达分别为100%(5/5)、60%(3/5)、80%(4/5)和60%(3/5),所有含药组合并后其P53阳性表达率与对照组之间具有显著性差异(p<0.05),各含药组的Ki67阳性表达率均高于对照组,分别为87%、96%、97%、92%,但目前尚未发现它们之间具有显著性差异(p>0.05)。结论蒲公英可能有降低胃癌细胞p53的阳性表达的作用。

厄洛替尼对胃癌细胞株的放射增敏作用

目的观察厄洛替尼对人胃癌MKN45细胞的放射增敏作用。方法取对数生长期MKN45细胞,通过MTT法检测厄洛替尼、5-氟尿嘧啶(5-Fu)联合放射线对MKN45细胞的生长抑制作用,计算出厄洛替尼、5-Fu的半数抑制浓度(IC50),比较两者联合放射对MKN45细胞的抑制率;通过集落形成实验检测两者联合放射线对MKN45细胞的增殖抑制作用,应用多靶单击模型计算两者的放射生物学参数:平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq),比较厄洛替尼、5-Fu的放射增敏比。结果厄洛替尼、5-Fu及放射线均能抑制MKN45细胞的生长,且随着浓度或剂量的增加及作用时间的延长,抑制作用明显增强(P<0.05),厄洛替尼、5-Fu联合放射线对MKN45细胞的抑制作用强于单纯照射(P<0.01);厄洛替尼联合放射线对MKN45细胞的增殖抑制作用明显优于5-Fu联合放射线,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),厄洛替尼的放射增敏比为1.54±0.12,明显高于5-Fu的1.24±0.93,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论厄洛替尼对MKN45细胞的放射敏感性好于5-Fu,实验结果可为临床提供参考。

顺铂对人胃癌细胞系p53及其异构体△133p53蛋白表达的影响

目的探讨顺铂对MKN45胃癌细胞系p53及其异构体△133p53蛋白表达的影响及临床意义。方法 PRMI1640血清培养的MKN45胃癌细胞系分为不同浓度梯度顺铂实验组及未加药物对照组。应用免疫细胞化学法检测p53蛋白表达情况。结果免疫细胞化学结果显示DDP组药物血清作用后,△133p53随着药物浓度增加,表达呈减少趋势,△133p53在胃癌组织中的表达呈负相关关系(P<0.01)。结论在顺铂诱导胃癌细胞系MKN45生长抑制的实验中,△133p53异构体蛋白表现出与野生型p53蛋白相反的趋势,并提示△133p53异构体蛋白本身可以作为肿瘤生物学行为的重要预测因子。

乌司他丁对胃癌细胞生物学功能的影响

目的探讨乌司他丁与胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡、侵袭的关系以及可能的作用机制。方法采用不同浓度的乌司他丁(400 U/ml、800 U/ml、1 600 U/ml)作用于体外培养的MKN-45细胞中,分为对照组、400 U/ml组、800 U/ml组、1 600 U/ml组;MTT实验检测乌司他丁对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化,采用免疫印迹法(Western blotting)检测核因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果与对照组相比,乌司他丁显著抑制细胞的增殖(P<0.05),促进其凋亡(P<0.05),降低细胞的侵袭能力(P<0.05)。800 U/ml组与400 U/ml组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但与1 600 U/ml组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。乌司他丁显著抑制NF-κB、Bcl-2蛋白水平(P<0.05),显著增加Bax蛋白水平(P<0.05);且随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强(P<0.05)。结论乌司他丁可以抑制胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,降低细胞的侵袭能力,其作用机制与NF-κB信号通路相关。

双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对不同胃癌细胞抑制作用的比较

目的比较肝细胞生长因子第一环状结构域基因(hepatocyte growth factor kringle 1,HGFK1)溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MGC803的抑制杀伤效果。方法以野生型腺病毒(AD5-EGFP)和空载体双靶向腺病毒(TH-AD-EGFP)为对照组,以双靶向HGFK1溶瘤腺病毒(TH-AD-HGFK1-EGFP)为试验组在感染复数(MOI)为100的条件下分别感染这三种胃癌细胞,测定其在72小时的细胞生存率状况(CCK8试验),并比较三种胃癌细胞试验组的差异。结果试验组双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞的72小时细胞抑制率均明显高于对照组(P<0.001),MKN45试验组明显低于SGC7901和MGC803试验组(分别是P=0.004和P=0.002)。而SGC7901试验组和MGC803试验组之间没有明显差别(P=0.599)。结论双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞SGC7901、MKN45、MGC803均具有抑制杀伤作用,但对SGC7901和MGC803的抑制效果明显高于MKN45。

胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制

目的:观察健脾复方胃肠安对人胃癌MKN45细胞自噬的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:体外培养人胃癌MKN45细胞,采用细胞活力检测法(CCK-8)检测不同质量浓度胃肠安(250,500,1000,2000 mg·L^-1)作用体外培养的人胃癌细胞MKN45细胞,共孵育24,48,72 h,检测细胞增殖活力的改变;采用吖啶橙(AO)染色和单丹磺胺戊二胺(MDC)染色观察胃肠安对胃癌MKN45细胞自噬小体及自噬囊泡的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测微管相关蛋白1轻链3(LC3),酵母ATG6同源物(Beclin1),泛素结合蛋白-1(p62),自噬相关基因5(ATG5),自噬相关基因7(ATG7)mRNA和蛋白的表达。结果:CCK-8实验显示,与空白组比较,胃肠安(500,1000,2000 mg·L^-1)可明显抑制MKN45细胞的增殖能力(P<0.05,P<0.01);AO和MDC染色显示,与空白组比较,随着胃肠安浓度的增加,自噬小体和自噬囊泡含量逐渐增加;Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,胃肠安(1000 mg·L^-1)组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),p62表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论:胃肠安可诱导人胃癌MKN45细胞自噬,其机制涉及上调自噬相关基因Beclin1,ATG5,ATG7 mRNA和蛋白表达,下调p62 mRNA和蛋白表达,促进自噬标志蛋白LC3-I向LC3-Ⅱ转化。

高压氧联合多柔比星处理对人低分化胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨高压氧(HBO)联合多柔比星(DOX)对人低分化胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人胃癌MKN45细胞完成后,按照实验设计将细胞分为4组:对照组、DOX组、HBO组和HBO+DOX组。对照组加入DMSO培养基,DOX组加入终质量浓度为2 mg/L DOX溶液;HBO组则在高压氧舱(0.25 MPa)中暴露培养90 min,HBO+DOX组先在高压氧舱暴露培养90 min后再用2 mg/L DOX溶液处理。利用CCK-8法检测HBO+DOX处理对胃癌MKN45细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞术检测胃癌MKN45细胞的凋亡率,Western blotting实验检测胃癌MKN45细胞内凋亡蛋白及JNK/STAT3信号通路相关蛋白的表达水平。结果:HBO+DOX组MKN45细胞存活率明显低于对照组和HBO组(P<0.01),也低于PTX组(P<0.05)。HBO+DOX组MKN45细胞凋亡率明显高于对照组和HBO组(P<0.01),也高于PTX组(P<0.05)。与对照组和HBO组比较,DOX组和HBO+DOX组MKN45细胞内Bad、caspase-3、PARP蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01);DOX组PARP蛋白表达明显低于HBO+DOX组(P<0.05)。与对照组和HBO组比较,DOX组和HBO+DOX组MKN45细胞内p-JNK蛋白表达明显降低,且HBO+DOX组低于DOX组(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,DOX组和HBO+DOX组MKN45细胞内p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.05)。与对照组、HBO组和DOX组比较,HBO+DOX组MKN45细胞内耐药性相关蛋白P-gp明显降低(P<0.01)。结论:HBO处理能够增强DOX对人胃癌MKN45细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,其作用机制可能是通过调节MKN45细胞中的JNK/STAT3信号通路来实现的。

厄洛替尼对MKN45细胞株放射增敏机制的实验研究

目的观察厄洛替尼联合放射线对MKN45细胞的影响,初步探讨厄洛替尼对其放射增敏机制。方法通过MTT法检测厄洛替尼、5-氟尿嘧啶(5-Fu)对MKN45细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测MKN45细胞经厄洛替尼、5-Fu及联合放射线处理后细胞的凋亡率及周期分布情况;Western Blots法检测厄洛替尼、5-Fu及联合放射线对MKN45细胞的Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。结果厄洛替尼、5-Fu均能抑制MKN45细胞的生长,与药物浓度及作用时间呈正相关(P<0.01)。厄洛替尼联合组使G2/M、G0/G1期细胞比率增加最明显,与5-Fu联合组比较有统计学意义(70.32±0.65vs58.25±0.42,P<0.01);细胞凋亡率增加最多,与5-Fu联合组比较有统计学意义(19.21±1.23vs13.11±0.76,P<0.01);厄洛替尼联合组作用于细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达则明显增加,与其他组比较差异显著(P<0.01)。结论厄洛替尼的放射增敏机制与增加MKN45细胞的细胞凋亡率、G2/M和G0/G1期细胞比率;降低Bcl-2、升高Bax蛋白表达,从而降低Bcl-2/Bax比率有关。

阿司匹林对西罗莫司抗胃癌MKN45细胞体外增殖作用的影响研究

目的:研究阿司匹林对西罗莫司抗胃癌MKN45细胞体外增殖作用的影响及作用机制。方法:体外培养胃癌MKN45细胞,给予西罗莫司(0、0.5、1.0、2.0nmol·L-1)、阿司匹林(10mmol·L-1)+西罗莫司(0、0.5、1.0、2.0nmol·L-1),以MTT法测定并计算细胞增殖抑制率;通过实时定量聚合酶链式反应(PCR)测定正常胃上皮GES-1细胞、MKN45细胞和经西罗莫司(2.0nmol·L-1)、阿司匹林、阿司匹林+西罗莫司(2.0nmol·L-1)处理后的MKN45细胞中环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素1α(IL-1α)表达情况。结果:西罗莫司可抑制MKN45细胞增殖,且呈剂量依赖性;与西罗莫司比较,阿司匹林+西罗莫司处理后的MKN45细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01)。mRNA相对表达量COX-2MKN45/GES-1、IL-1αMKN45/GES-1分别为1.49±0.17、1.58±0.19。与对照MKN45细胞比较,COX-2、IL-1α在经西罗莫司、阿司匹林、阿司匹林+西罗莫司处理后的MKN45细胞中的表达均明显降低(P<0.01),其中组间均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。结论:阿司匹林可协同增强西罗莫司抑制胃癌MKN45细胞增殖的作用,其作用机制可能与抑制COX-2、IL-1α表达有关。

rmhTNF-α对人胃癌细胞系MKN45中的NF-κBp65表达的影响

目的在rmh TNF-α-MKN45人胃癌细胞系模型中,观察NF-κB p65基因及蛋白表达的变化情况。方法以不同浓度的rmh TNF-α(0IU/ml,50IU/ml,100IU/ml,200IU/ml)作用人胃癌细胞系MKN45后,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,巢式逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB p65基因的表达变化水平,并进行统计学分析,组间差异用单因素方差分析,组内比较用T-test。免疫荧光细胞化学(IF)方法检测NF-κB p65蛋白在胃癌细胞系MKN45的核转位变化情况。结果 CCK-8法结果显示,细胞增殖抑制率随rmh TNF-α浓度的增加而增加,差异有统计学差异;RT-PCR结果显示,随着rmh TNF-α浓度的增加,NF-κB p65 mRNA表达量下降,且组间差异具有统计学意义;IF结果显示,随着rmh TN浓度的增加NF-κB p65蛋白的核内活性下降。结论在rmh TNF-α抑制胃癌细胞系MKN 45的模型中,可能是通过下调NF-κB p65的基因表达及抑制NF-κB p65蛋白的核转位来抑制肿瘤增殖。

黄芪多糖抑制人胃癌MKN45、MGC-803细胞生长的作用机制

目的:探讨黄芪多糖抑制人胃癌细胞MKN45、MGC-803生长的作用机制。方法:将人胃癌细胞MKN45、MGC-803置于RPMI1640培养基中做传代培养,分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组和黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)组。对照组采用1640培养基培养,5-FU组给予不同质量浓度的5-FU培养,黄芪多糖组给予不同质量浓度的黄芪多糖培养,采用四甲基偶氮噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测细胞生长抑制情况,使用流式细胞仪检测细胞周期,使用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果:(1)培养24 h,APS质量浓度≥10.0 g·L^(-1)、5-FU质量浓度≥0.05 g·L^(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;培养48 h,APS质量浓度≥5.0 g·L^(-1)、5-FU质量浓度≥0.025 g·L^(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;(2)细胞培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞周期均改变,停留在G0/G1期的细胞比例显著高于对照组,处于S期和G2/M期细胞明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞凋亡率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪多糖可以抑制胃癌细胞MKN45、MGC-803的生长,其作用机制可能是使细胞停留在GO/G1期并诱导细胞发生凋亡。