c-Ha-ras and c-myc antisense oligodeoxynucleotides inhibit the proliferation and DNA synthesis in human gastric carcinoma cell lines

The effects of two antisense oligodeoxynucleotides on the expression of c-Ha-ras proto-oncogene and the growth of human gastric carcinoma cell lines were observed. Synthetic 15-mer directed at the region of the translational initiation site of c-Ha-ras proto-oncogene (ASO-r) greatly inhibited the proliferation (55. 61%,P<0. 05) and DNA synthesis (76. 79%,P<0. 05) of MGc-803 cell line. It also inhibited the proliferation (62. 02%,P<0. 05) and DNA synthesis (76. 78%, P<0. 05) of SGc-7901 cell line. A reduction in intracellular P21 ras protein levels in MGc-803 cell line was observed 6 h after the treatment with ASO-r and maintained over 12 h. Another synthetic 15-mer targeted against the initiation codon and downstream 4 codons of c-myc proto-oncogene (ASOm) inhibited only DNA synthesis of MGc-803 cell line (71. 37%, P<0. 05). The control 15-mer did not inhibit the expression of P21 protein and proliferation of these cell lines. These experiments seemed to provide evidence that ASO-r could be effective in inhibiting the expression of c-Ha-ras proto-oncogene and controlling the growth of human gastric carcinoma cells,and that the over-expression of c-Ha-ras proto-oncogene might mainly be associated with the malignant proliferation of human gastric carcinoma cells.

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞的抑制作用

采用体外细胞培养方法，研究共轭亚油酸（ＣＬＡ）对人胃腺癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）生长的影响。ＣＬＡ的剂量分别为２５、５０、１００和２００μｍ ｏｌ／Ｌ，以乙醇为溶剂对照。结果表明：ＣＬＡ 能抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的增殖、细胞核分裂、集落形成和细胞ＤＮＡ的合成。

苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明:苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%,而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。

桉油精对补骨脂素体外抗肿瘤活性的增效作用研究

目的考察桉油精对补骨脂素体外抗肿瘤活性的增效作用。方法采用MTT法观察桉油精与补骨脂素对4种人胃癌细胞的生长抑制作用,计算IC50,选择对补骨脂素最为敏感的一种癌细胞,以确定桉油精与补骨脂素的最佳比例与浓度。结果补骨脂素作用于SGC-7901、MKN-45、BGC-823、MGC-803的IC50分别为36.23、66.26、36.9、40.27μg/mL,白蔻仁挥发油及桉油精单用无显著抗肿瘤作用,但其与补骨脂素联用,有显著的抑制增强作用。选用对补骨脂素最为敏感的SGC-7901进一步研究。结论桉油精对补骨脂素的体外抗肿瘤活性具有协同作用。桉油精与补骨脂素配伍的最佳抑制比例与剂量为2∶1,72∶36μg/mL。

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。

马钱子生物碱成分的体外抗肿瘤活性筛选

目的从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法应用人鼻咽癌细胞株KB、人白血病细胞株HL-60、人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选6种马钱子生物碱类成分对其生长的抑制作用。结果士的宁对人鼻咽癌细胞株KB、人白血病细胞株HL-60和人胃癌细胞株BGC等细胞的生长有一定的抑制作用;伪士的宁对人鼻咽癌细胞株KB、人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402等细胞的生长有一定的抑制作用;依卡金对人鼻咽癌细胞株KB和人胃癌细胞株BGC等细胞的生长有一定的抑制作用。结论士的宁、伪士的宁和依卡金对人鼻咽癌细胞株KB和人胃癌细胞株BGC等细胞的生长皆有抑制作用,呈现浓度-效应关系。

共轭亚油酸对人胃腺癌细胞侵袭能力的影响及其作用机制

研究c9,t11-共轭亚油酸 (CLA)对人胃腺癌细胞 (SGC 790 1)侵袭能力的影响 ,探讨其抑制肿瘤转移的可能机理。用 0、2 5、5 0、10 0和 2 0 0 μmol LCLA处理细胞 2 4h后 ,分别用重组基底膜侵袭实验评价癌细胞侵袭能力 ;PAGE底物酶谱方法检测Ⅳ型胶原酶活性 ;RT PCR方法检测SGC 790 1细胞TIMP 1和TIMP 2mR NA表达。研究结果表明 :c9,t11 CLA处理后 ,SGC 790 1细胞侵袭重组基底膜的能力下降、SGC 790 1细胞培养上清中的Ⅳ型胶原酶活性降低、SGC 790 1细胞中TIMP 1和TIMP 2mRNA的表达增加。因此 ,c9,t11 CLA抑制SGC 790 1细胞侵袭重组基底膜 ,并且c9,t11 CLA的抗侵袭活性与降低肿瘤细胞培养上清中Ⅳ型胶原酶活性和诱导肿瘤细胞TIMP 1和TIMP

反义hTR对人胃癌细胞株SGC-7901恶性表型的逆转作用

目的 探讨反义hTR基因转染对胃癌细胞系SGC 790 1恶性表型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法 构建包含端粒重复序列模板区的反义hTR基因真核表达载体 ,用脂质体法将其转染至胃癌细胞系SGC 790 1,比较观察反义hTR基因转染后 790 1细胞的hTRRNA表达、端粒酶活性、体外生长增殖特性和裸鼠体内致瘤能力的变化。结果 反义hTR基因转染的 790 1细胞hTRRNA表达和端粒酶活性明显降低、体外生长增殖能力降低、接触抑制恢复、细胞凋亡率增加、软琼脂集落形成能力和裸鼠体内致瘤能力完全消失。结论 反义hTR基因转染能使 790 1细胞的端粒酶活性明显下调并逆转其恶性表型 ,提示端粒酶是肿瘤治疗的较理想靶点 ,端粒酶抑制剂具有良好的临床应用前景。

幽门螺杆菌CagA^+菌株对BGC-823细胞系Cx43表达及细胞增殖的影响

目的:观察体外实验中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)CagA+菌株对BGC-823细胞系Cx43表达和细胞增殖的影响,以及抗H.pylori药物干预后的变化,探讨H.pyloriCagA+菌株与胃上皮细胞Cx43表达和细胞增殖的关系。方法:将H.pyloriCagA+菌株(国际标准毒力菌株NCTC J99)和CagA-菌株(NCTC12908)分别与BGC-823细胞按细菌/细胞比例20∶1,100∶1,500∶1共培养24,48h,以及细菌/细胞比例100∶1组共培养16h后予抗H.pylori药物;对照组不加H.pylori或不加药物。用细胞免疫化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法及计算机图像分析技术检测细胞Cx43表达变化;溴化-3(4,5-二甲基噻唑基-2)-2,5-二苯基四唑比色法检测细胞增殖情况。结果:(1)未加H.pylori的对照组培养48h Cx43表达高于24h(P<0.05);加CagA+菌株不同比例组48h时的Cx43表达均低于24h,且低于对照组,24及48h500∶1组均低于100∶1组和20∶1组,48h100∶1组低于20∶1组(P<0.05);而加CagA-菌株不同比例组48h与24h的Cx43表达比较差异无统计学意义(P>0.05),24h100∶1组和500∶1组均低于对照组,24及48h500∶1组低于20∶1组(P<0.05);抗H.pylori药物干预后48h Cx43表达增强。(2)加CagA+菌株培养24h,100∶1组细胞增殖增强;培养48h,20∶1组和100∶1组细胞增殖增强,500∶1组细胞增殖受到抑制(P<0.05)。而加CagA-菌株对细胞增殖无明显影响。抗H.pylori药物干预对细胞增殖有抑制作用。结论:H.pyloriCagA+菌株明显下调BGC-823细胞Cx43表达,并与作用时间及H.pylori密度有关,H.pylori密度较低时促进细胞增殖,密度较高时抑制细胞增殖;H.pyloriCagA-菌株对细胞增殖无明显影响。抗H.pylori药物干预可上调Cx43表达,抑制细胞增殖。

44种生物碱类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:伊波加因、哈尔明碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、马兜铃酸I、番茄碱苷、澳洲茄次碱、茄次碱、金鸡宁、罂粟碱和酒石酸麦角胺对人胃癌细胞株BGC细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为黄连碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱和金鸡宁,其次为伊波加因、哈尔明碱、小檗碱、马兜铃酸I、茄次碱、罂粟碱和酒石酸麦角胺。蛇根精、γ-崖椒碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、吐根碱、马兜铃酸I、茄次碱和喜树碱对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、小檗碱、延胡索碱和喜树碱,其次为黄连碱、马兜铃酸I和茄次碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

桂皮醛诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡及相关分子机制的探讨

目的:探讨桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及其相关分子机制。方法:采用MTT法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测桂皮醛诱导的凋亡,Hoechst 33342染色法观察凋亡形态的变化;RT-PCR法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞相关凋亡基因的影响;Western Bolt方法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞相关凋亡蛋白的影响。结果:与对照组相比,桂皮醛有抑制人胃癌BGC-823细胞增殖的作用(P<0.01);桂皮醛能诱导凋亡的产生;桂皮醛能下调凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL、Survivin,上调凋亡相关基因Bax、Bak;桂皮醛能下调凋亡相关蛋白Bcl-2、Procaspase-3,上调凋亡相关蛋白Bax。结论:桂皮醛对人胃癌细胞BGC-823的增殖具有抑制作用并能诱导凋亡,可能与内源性凋亡途径的激活有关。

RNA干扰靶向抑制胃癌细胞株SGC7901 hTERT基因表达

背景与目的：胃癌是全人类常见恶性肿瘤之一。在我国，胃癌居各种癌症死亡之首，其总体五年生存率仅15％～20％。在目前尚无有效一级预防措施的情况下，积极探讨有效防治胃癌的方法成为必然趋势。本研究利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术，抑制人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达，探讨靶向hTERT基因RNAi对胃癌细胞增殖的抑制效应。方法：设计靶向hTERT基因的小干扰RNA，构建重组表达质粒pGenesil—shRNA—hTERT并导入人胃癌细胞系SGC7901细胞株，经G418筛选，建立稳定表达siRNA—hTERT的细胞株。采用real time RT—PCR、MTT和PCR—TRAP法同时检测pGenesil-shRNA—hTERT稳定抑制组和未处理SGC7901细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化。结果：在稳定表达pGenesil—shRNA—hTERT的SGC7901细胞株中，RNAi效力持续、稳定存在，hTERT mRNA表达、端粒酶活性明显降低，瘤细胞增殖被抑制。结论：RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mRNA表达及肿瘤细胞增殖，是潜在的肿瘤基因治疗新方法。

金雀异黄素抑制人胃癌细胞增殖作用的研究—抑制细胞DNA合成与cyclin D_1表达的研究

采用细胞增殖、DNA合成实验观察了金雀异黄素 (Gen)对体外培养的人胃癌SGC 790 1细胞的生长抑制作用 ,并观察了Gen对人胃癌细胞细胞周期素D1 (cyclinD1 )蛋白的表达情况。结果显示 ,Gen对胃癌细胞生长及其DNA合成有抑制作用 ,并降低cyclinD1 蛋白的表达 ,且呈剂量 效应关系。结果证实 ,Gen抑制胃癌细胞增殖作用的机制之一可能是通过抑制DNA合成及抑制cyclinD1 的表达。

不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位

目的通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系。方法上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度。结果B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中,结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致。结论B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达。

姜黄素诱导胃癌BGC细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨姜黄素促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0 mg/L,5 mg/L,10 mg/L,20mg/L。姜黄素处理24 h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20 mg/L姜黄素处理24 h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。

化疗药物对胃癌细胞化学发光的影响

目的 观察胃癌细胞株经丝裂霉素作用后化学发光的变化 ,探讨化疗药物对肿瘤增殖活性的影响。方法 选择人胃癌细胞株BGC82 3,分为两组。加药组细胞与丝裂霉素C(MMC)共同培养 2 4小时 ,对照组不加药。结果 MMC作用 2 4小时后肿瘤细胞化学发光强度显著降低 ,植物血凝素 (PHA)刺激后峰值降低 ,峰时延缓 ,细胞增殖指数显著降低 ,凋亡比例显著增加。结论 肿瘤细胞化学发光与细胞周期动力学密切相关 ,可反映肿瘤细胞氧化代谢特点和增殖活动 ,可用于观察化疗药物对肿瘤细胞代谢、增殖活性的影响 。

环巴胺对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡及Shh、Gli-1基因表达的影响

目的:探讨环巴胺对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡及Shh、Gli-1基因表达的影响。方法:采用MTT法检测环巴胺对BGC-823细胞的生长抑制效应,倒置显微镜及AO/EB荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Shh、Gli-1 mRNA的表达情况。结果:环巴胺可明显抑制BGC-823细胞的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;经32、64、96μmol.L-1的环巴胺作用24 h后的凋亡率依次为12.50%、31.50%、56.10%,明显高于空白对照组的2.10%(均P<0.01);Shh及Gli-1 mRNA均表达,环巴胺可下调Gli-1 mRNA表达,但对Shh mRNA表达无明显影响。结论:环巴胺可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Gli-1基因表达有关。

川芎嗪对人胃癌细胞株SGC-7901/ADR增殖、凋亡和MDR1、GST-π表达的影响

目的：探讨川芎嗪诱导人胃癌细胞株SGC-7901/ADR凋亡及对MDR1、GST-π表达的调控作用。方法：不同剂量（0~120μM）川芎嗪内酯与人胃癌细胞株SGC-7901/ADR同培养不同时间（24、48及72 h）,50μM 5-氟尿嘧啶（5-FU）作为阳性对照组,采用CCK8法测定细胞的增殖,流式细胞术测定细胞凋亡率。用不同剂量的川芎嗪与细胞培养48 h后,采用Western blot测定MDR1、GST-π蛋白的表达情况,用半定量RT-PCR测定MDR1、GST-πmRNA表达。结果：不同浓度川芎嗪处理人胃癌细胞株SGC-7901,川芎嗪抑制SGC-7901细胞增殖呈浓度及作用时间依赖性且120μM川芎嗪的抑制率与阳性对照组相当;而且应用流式细胞仪检测发现川芎嗪作用于人胃癌细胞株SGC-7901 48 h后,细胞出现凋亡。Western blot及半定量RT-PCR检测细胞中MDR1、GST-π及其mRNA的表达,结果显示,川芎嗪可下调MDR1、GST-π表达,下调作用与TMZ相当甚至更具优势。结论：川芎嗪能够抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖,诱导其凋亡,且能抑制细胞中MDR1、GST-π的表达,其表达量与川芎嗪剂量呈现明显的时间-浓度效应关系。

重楼总皂苷对人胃癌MNK-45和MGC80-3细胞增殖的影响

目的观察重楼总皂苷(Rhizoma paridis total saponins,RPTS)对人胃癌MNK-45和MGC80-3细胞增殖的影响。方法设定5个不同浓度(5、10、20、40、80μg/ml)RPTS处理两种细胞24、48、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定MNK-45细胞和MGC80-3细胞增殖抑制率;设定浓度为10μg/ml处理两种细胞24h,采用吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双染观察细胞形态学变化;设定浓度为10、20μg/ml处理两种细胞6h,用流式细胞仪测定细胞周期。结果 5～80μg/mlRPTS对MNK-45和MGC80-3细胞增殖均具有显著的抑制作用(P<0.05,或P<0.01),且药物剂量越大、作用时间越长,其抑制作用越强(P<0.01);在相同药物浓度及相同作用时间下,RPTS对MNN-45细胞增殖的抑制作用较对MGC80-3作用显著增强(P<0.01);RPTS作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;RPTS使MNK-45细胞增殖被阻滞于G0/G1期,使MGC80-3细胞增殖被阻滞于S期。结论 RPTS能抑制人胃癌MNK-45和MGC80-3细胞增殖,诱导两种肿瘤细胞凋亡,影响两种肿瘤细胞周期时相的分布,但对两种肿瘤细胞株的抑制作用和对细胞周期时相的影响存在差异。