lncRNA GHET1表达水平对人胃癌细胞MGC-803增殖迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌高表达转录本1(GHET1)对人胃癌细胞MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法以MGC-803细胞作为实验对象,通过慢病毒转染的方法构建lncRNA GHET1过表达和lncRNA GHET1沉默的MGC-803细胞模型,分别为过表达组和沉默组,并设置其对应的阴性对照组。通过荧光显微镜观察慢病毒转染效率。通过实时荧光定量PCR检测各组lncRNA GHET1、miR-105表达水平。通过CCK-8实验检测各组细胞增殖能力。通过Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果荧光显微镜下观察见各组细胞病毒转染率均高于90%。实时荧光定量PCR结果显示,过表达组lncRNA GHET1的相对表达量显著高于过表达对照组(P<0.05),沉默组lncRNA GHET1相对表达量显著低于沉默对照组(P<0.05),提示成功建立过表达和沉默lncRNA GHET1的MGC-803细胞模型。CCK-8实验结果显示,过表达组细胞增殖速度较过表达对照组快,而沉默组细胞增殖速度较沉默对照组慢。Transwell实验结果显示,过表达组迁移和侵袭细胞数多于过表达对照组,而沉默组迁移和侵袭细胞数少于沉默对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,过表达组miR-105表达水平显著低于过表达对照组(P<0.05),沉默组miR-105表达水平显著高于沉默对照组(P<0.05)。结论lncRNA GHET1可促进人胃癌细胞MGC-803增殖、迁移及侵袭,其机制可能与调控miR-105的表达水平有关。

lncRNA GHET1通过Wnt/β-catenin信号通路对子痫前期滋养层细胞生物学行为的影响

目的:探讨子痫前期(PE)患者胎盘组织中长链非编码RNA胃癌高表达转录本1(lncRNA GHET1)的表达及其对滋养层细胞增殖、细胞周期进展和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法:30名孕产妇分为正常孕产妇组(正常组) 15例和PE孕产妇组(PE组) 15例,HE染色观察2组研究对象胎盘组织病理形态表现。体外培养滋养层HTR-8细胞,转染过表达lncRNA GHET1及对照序列质粒,并将滋养层细胞分为对照组(常规培养)、 GHET1组(转染过表达lncRNA GHET1质粒)和阴性对照组(转染阴性对照序列质粒)。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象胎盘组织和各组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组HTR-8细胞增殖率,流式细胞术检测各组不同细胞周期HTR-8细胞百分率,Transwell小室实验检测各组HTR-8细胞侵袭能力,Western blotting法检测各组HTR-8细胞中细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌基因(c-Myc)、细胞周期素D1 (cyclinD1)、上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平及Wnt/β-catenin信号通路中磷酸化糖原合成酶激酶3β (p-GSK3β)/糖原合成酶激酶3β (GSK3β)比值和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结结果果:与正常组比较,PE组患者胎盘组织绒毛发育不良,数量减少,绒毛内及间质血管分布紊乱,血管壁出现纤维素样坏死,钙化区域及绒毛上合体结节增加。与正常组比较,PE组患者胎盘组织中lncRNA GHET1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,GHET1组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),阴性对照组HTR-8细胞中lncRNA GHET1 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,GHET1组HTR-8细胞增殖率、S期细胞百分率和侵袭细胞数明显升高(P<0.05),阴性对照组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,GHET1组HTR-8细胞中c-Myc、cyclinD1、Vimentin和β-catenin蛋白表达水平及p-GSK3β/GSK3β比值均明显升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),阴性对照组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达lncRNA GHET1可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进滋养层细胞增殖、细胞周期进展和细胞侵袭,发挥改善PE进展的作用。

胃癌高表达转录本1对胃癌细胞株AGS增殖、周期的影响及其机制

目的观察胃癌高表达转录本1(GHET1)对胃癌细胞株AGS增殖、周期的影响,并探讨其机制。方法将干扰序列si-GHET1、阴性对照序列si-NC、空白对照序列转染进AGS细胞中(分别计为干扰组、阴性组、空白组),采用real-time PCR法检测各组细胞GHET1,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白。结果干扰组、阴性组、空白组GHET1相对表达量分别为0.42±0.06、1、1.15±0.19,干扰组与其余两组比较,P均<0.05;48 h细胞OD450值分别为0.57±0.04、0.93±0.05、1.03±0.06,72 h细胞OD450值分别为0.69±0.10、1.54±0.08、1.58±0.14,干扰组与其余两组比较,P均<0.05;G0/G1期细胞比例分别为62.01%±4.56%、47.03%±3.36%、44.65%±3.44%,S期细胞比例分别为20.34%±3.29%、32.25%±1.78%、32.96%±2.58%,干扰组与其余两组比较,P均<0.05;CDK2相对表达量分别为0.60±0.08、0.81±0.07、0.81±0.02,CDK4相对表达量分别为0.57±0.03、0.89±0.08、0.87±0.06,CDK6相对表达量分别为0.62±0.09、0.86±0.07、0.92±0.07,Cyclin D相对表达量分别为0.58±0.03、0.74±0.02、0.70±0.04,Cyclin E相对表达量分别为0.33±0.03、0.39±0.01、0.39±0.01,干扰组与其余两组比较,P均<0.05。结论 GHET1可促进AGS细胞增殖,缩短细胞周期,其机制可能通过上调细胞周期相关蛋白表达来实现。

TFAP4低表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

目的探讨TFAP4低表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及机制。方法用RT-PCR、Westernblot⁃ting法检测细胞中TFAP4表达,选取TFAP4 mRNA和蛋白表达最高的MGC-803细胞作为实验细胞。将MGC-803细胞随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组(NC组)、TFAP沉默组(siTFAP组)、TFAP沉默+空载转染组(siT⁃FAP4+Vector组)、TFAP沉默+HMGB1过表达组(siTFAP4+HMGB1组)并进行转染。用RT-PCR技术检测各组细胞中TFAP4 mRNA表达,确认转染效率。用RT-PCR技术检测细胞中HMGB1 mRNA表达,用Westernblotting法检测细胞中TFAP4、HMGB1蛋白表达及胞质、胞核YAP蛋白表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,用体外血管生成实验检测内皮细胞成管能力,用双荧光素酶报告基因实验验证TFAP4对HMGB1的转录调控作用。结果与NC组比较,siTFAP4组细胞迁移率低,细胞侵袭数目和管腔形成数目少,TFAP4、HMGB1及胞核YAP表达低,胞质YAP表达高(P均<0.05)。与siTFAP4+Vector组比较,siTFAP4+HMGB1组细胞迁移率高,细胞侵袭数目和管腔形成数目多,HMGB1、胞核YAP表达高,胞质YAP表达低(P均<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,与pGL3-Basic+TFAP4+pRL-TKVector转染细胞比较,pGL3-Basic-Promoter+TFAP4+pRL-TKVector转染细胞荧光素酶相对活性高(P<0.05)。结论TFAP4低表达可抑制胃癌细胞侵袭、迁移,促进内皮成管,其机制可能与TFAP转录调控HMGB1激活YAP信号有关。

长链非编码RNA胃癌高表达转录本1、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1在结直肠癌中的表达及预后影响

目的观察长链非编码RNA胃癌高表达转录本1(lncRNA GHET1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)在结直肠癌(CRC)组织中的表达,探讨其与CRC患者预后的相关性。方法选取2014年1月至2015年1月于上海交通大学附属第六人民医院南院行手术治疗、具有完整病理及临床资料的CRC患者组织标本90例,设为研究组,另取该组手术患者癌旁正常组织标本作为对照组。实时荧光定量PCR法(qPCR)及免疫组织化学法检测两组标本中GHET1、IGF2BP1的表达情况;分析CRC组织GHET1、IGF2BP1表达情况与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析GHET1、IGF2BP1在CRC组织中的表达情况与预后情况的关系;Cox回归分析影响CRC预后情况的因素。结果研究组标本中的GHET1 mRNA水平及IGF2BP1蛋白阳性表达率均高于对照组(P<0.05);GHET1、IGF2BP1表达情况与肿瘤组织分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移均有关(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,GHET1 mRNA高表达及IGF2BP1蛋白阳性患者生存率均低于GHET1 mRNA低表达及IGF2BP1蛋白阴性患者(32.80%vs 75.00%,Log-rankχ^(2)=17.775,P<0.05;33.33%vs 80.00%,Log-rankχ^(2)=13.615,P<0.05);多因素Cox分析显示,GHET1 mRNA高表达、IGF2BP1蛋白阳性表达是影响CRC预后情况的危险因素(P<0.05)。结论CRC患者癌组织中存在GHET1 mRNA水平及IGF2BP1蛋白阳性高表达,且与患者的不良预后密切相关。

胃癌高表达转录因子1在肝细胞癌中的表达及其对患者预后的影响

目的探讨长链非编码RNA胃癌高表达转录因子1（GHET1）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与患者预后、肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的关系。方法收集2016年3月至5月中国人民解放军福州总医院手术的20例HCC患者的肝癌和癌旁组织。回顾性收集2012年6月至2013年12月182例HCC患者肝癌组织和临床资料，根据GHET1表达中位值分为GHET1高表达组和低表达组，各91例。Huh7、HepG2细胞分为：空白对照组（Con）用无血清培养基，siRNA．GHET1组转染siRNA—GHET1．阴性对照组（siRNA．NC）转染阴性对照序列。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测GHET1表达，CCK-8、Transwell实验和Western印迹分析GHET1对HCC细胞的影响。结果与癌旁组织比较，肝癌组织中GHET1的mRNA相对表达明显升高；与L02细胞比较，Huh7以及HepG2细胞GHET1的mRNA表达升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。GHET1高表达组肿瘤〉5cm、有血管侵犯、AFP〉400μg／L、EdmonsonI级、肿瘤无包膜比例较低表达组升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。生存分析显示GHET1高表达的HCC患者比低表达的患者预后差。多因素Cox回归分析显示，GHET1高表达、有血管侵犯（HR=2．067，95％CI：1．350～3．162）、无肿瘤包膜是HCC患者复发的独立预测因素。Huh7和HepG2细胞转染后，与Con和siRNA-NC组比较，siRNA-GHET1组增殖明显下降；与siRNA—NC组比较，siRNA-GHET1组迁移与侵袭能力下降，E-钙黏蛋白表达升高，纤连蛋白和波形蛋白表达降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GHET1在肝癌组织和细胞中表达升高，增加肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，为HCC患者预后的独立预测因素，是临床治疗的潜在靶点。