胃癌中肿瘤微环境转移的价值

目的研究胃癌中是否存在肿瘤微环境转移(tumor microenvironment of metastasis,TMEM)及其与胃癌血道转移的相关性。方法采用免疫组化双染法同时标记巨噬细胞和内皮细胞,计数26例远处转移及其配对26例无远处转移胃癌组织中TMEM密度。结果 (1)TMEM存在于胃癌组织中;(2)TMEM与分化程度、临床分期明显相关(P<0.001,P=0.006),与肿瘤大小、Lauren分型、淋巴结转移等其他临床病理特点无关(P均>0.05);(3)TMEM与有无远处转移呈正相关(P<0.001)。结论证实胃癌中存在TMEM,TMEM密度可以预测胃癌血道转移,有望成为评估胃癌血道转移危险性的新预测指标。

MiR-146a与胃癌组织TAMs的相关性研究

目的:通过检测胃癌组织内肿瘤相关性巨噬细胞(TAMs)中MiR-146a的表达,探讨MiR-146a对TAMs的影响。方法:采用RT-PCR法分别检测BALB/c小鼠BGC-823移植瘤和腹腔中TAMs、胃癌患者肿瘤组织及外周血单核细胞中MiR-146a的表达量;转染MiR-146amimics的巨噬细胞与BGC-823细胞混合接种于小鼠,观察TAMs中MiR-146a的表达对肿瘤生长的影响。结果:1)小鼠BGC-823移植瘤TAMs中MiR-146a表达量显著降低,MiR-146amimics能明显抑制小鼠BGC-823移植瘤的生长。2)人胃癌组织TAMs中MiR-146a表达水平越低,肿瘤分化程度越差,肿瘤体积越大;与年龄、性别、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及远处转移无关(P>0.05)。结论:MiR-146a作为抑癌基因调节TAMs的功能,抑制胃癌的发生发展。

肿瘤相关巨噬细胞和Sema4D与胃癌浸润转移的关系

目的:研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对人胃癌SGC-7901细胞系生物学功能的影响。方法 :采用佛波酯(PMA)、白细胞介素IL-4和IL-13体外诱导人M2型巨噬细胞,细胞免疫荧光鉴定TAMs。Transwell非接触式共培TAMs和胃癌SGC-7901细胞,侵袭实验、迁移实验检测肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测实验组和空白对照组胃癌SGC-7901细胞上清中分泌型Sema4D的变化。结果:细胞免疫荧光鉴定M2型巨噬细胞诱导成功;在Transwell共培养体系中,TAMs共培养的胃癌SGC-7901细胞形态学发生改变;Transwell侵袭实验、迁移实验表明,细胞侵袭转移力增强(P<0.01)。与TAMs共培养的胃癌SGC-7901细胞的上清液分泌型Sema4D蛋白明显增多,较空白对照组差异有统计学意义(1224.13±29.43比637.15±33.84,P<0.01)。结论 :TAMs可促进胃癌细胞的浸润转移,其原因可能与分泌型Se m a4D蛋白的表达上调有关。

胃腺癌组织中PD-L1和M2型肿瘤相关巨噬细胞的表达及临床意义

目的探讨程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)及M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)在胃腺癌组织中的表达及预后意义。方法收集2011年5~12月苏州大学附属第一医院存档的胃腺癌手术切除标本268例,采用免疫组化EnVision法检测胃腺癌组织中PD-L1及CD163(M2型TAMs特异性标志物)蛋白表达,并分析两者表达与胃腺癌临床病理特征及预后的相关性。结果胃腺癌癌细胞中PD-L1的高表达率为19.4%(52/268);胃腺癌间质细胞中PD-L1的高表达率为62.3%(167/268)。PD-L1表达与CD163表达呈正相关。Kaplan-Meier生存曲线分析表明,胃腺癌间质细胞中PD-L1表达与患者预后相关(P<0.05),CD163表达与患者生存无关,在对患者进行亚组分析时发现PD-L1高表达同时CD163低表达的患者预后最好;PD-L1低表达同时CD163高表达的患者预后最差。结论PD-L1在胃腺癌组织中的表达与CD163表达呈正相关,提示TAMs可作为胃癌联合治疗的新潜在靶点,并提高PD-1/PD-L1免疫卡控点治疗胃癌的有效率。

miR-487a通过靶向调控TIA1对胃癌肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的抑制作用

目的:探讨微小RNA(miR)-487a对胃癌肿瘤相关巨噬细胞(TAMs) M2型极化的抑制作用,并阐明其对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:分离和培养原发性胃癌患者胃癌组织TAMs及癌旁组织来源的正常巨噬细胞(NTMs),体外诱导人单核细胞THP-1分化为TAMs,将分化得到的M0、M1和M2型巨噬细胞经条件培养基(CM)刺激培养24 h,分别获取TAMs、M1-TAMs和M2-TAMs。转染TAMs,分为空白组、 inhibitor-NC组、 miR-487a inhibitor组、 miR-487a inhibitor+si-NC组和miR-487ainhibitor+si-TIA1组,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法验证转染效率。将M2-TAMs与AGS细胞共培养,分为AGS组、AGS+inhibitor-NC组、AGS+miR-487ainhibitor组、AGS+miR-487ainhibitor+si-NC组和AGS+miR-487ainhibitor+si-TIA1组,RT-qPCR法检测胃癌组织TAMs和癌旁组织NTMs及各组TAMs中miR-487a和T淋巴细胞胞浆内抗原-1(TIA1) mRNA表达水平,Western blotting法检测胃癌组织TAMs和癌旁组织NTMs及各组TAMs中TIA1蛋白表达水平,流式细胞术检测各组TAMs中CD206和CD163水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组TAMs培养上清中白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)和精氨酸酶1(Arg-1)水平,CCK-8法检测各组AGS细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组AGS细胞迁移率,Transwell实验检测各组AGS细胞侵袭细胞数。结果:RT-qPCR法,与癌旁组织NTMs比较,胃癌组织TAMs中miR-487a表达水平明显升高(P<0.01),TIA1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与TAMs比较,M1-TAMs中miR-487a表达水平明显降低(P<0.01),TIA1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);M2-TAMs中miR-487a表达水平明显升高(P<0.01),TIA1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);转染后,与空白组和inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中miR-487a表达水平明显降低(P<0.01),提示细胞转染成功。Western blotting法,与癌旁组织NTMs比较,胃癌组织TAMs中TIA1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与TAMs比较,M1-TAMs中TIA1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),M2-TAMs中TIA1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);共转染后,与inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中TIA1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与miR-487a inhibitor+si-NC组比较,miR-487a inhibitor+si-TIA1组细胞中TIA1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。流式细胞术,与空白组和inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中CD206和CD163水平明显降低(P<0.01);共转染后,与inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组细胞中CD206和CD163水平均明显降低(P<0.01);与miR-487a inhibitor+si-NC组比较,miR-487a inhibitor+si-TIA1组细胞中CD206和CD163水平均明显升高(P<0.01)。ELISA法,与空白组和inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组TAMs细胞培养上清中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平均明显降低(P<0.01);共转染后,与inhibitor-NC组比较,miR-487a inhibitor组TAMs细胞培养上清中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平均明显降低(P<0.01);与miR-487a inhibitor+si-NC组比较,miR-487a inhibitor+si-TIA1组TAMs细胞培养上清中IL-10、TGF-β、VEGF-A和Arg-1水平均明显升高(P<0.01)。CCK-8法,与AGS组比较,AGS+inhibitor-NC组细胞增殖活性明显升高(P<0.01);与AGS+inhibitor-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor组细胞增殖活性明显降低(P<0.01);与AGS+miR-487a inhibitor+si-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor+si-TIA1组细胞增殖活性明显升高(P<0.01)。细胞划痕实验,与AGS组比较,AGS+inhibitor-NC组AGS细胞迁移率明显升高(P<0.05);与AGS+inhibitor-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor组AGS细胞迁移率明显降低(P<0.01);与AGS+miR-487a inhibitor+si-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor+si-TIA1组AGS细胞迁移率明显升高(P<0.05)。Transwell实验,与AGS组比较,AGS+inhibitorNC组AGS细胞侵袭细胞数明显升高(P<0.01);与AGS+inhibitor-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor组AGS细胞侵袭细胞数明显降低(P<0.01);与AGS+miR-487a inhibitor+si-NC组比较,AGS+miR-487a inhibitor+si-TIA1组AGS细胞侵袭细胞数明显升高(P<0.01)。结论:沉默miR-487a表达可通过靶向上调TIA1抑制胃癌肿瘤相关巨噬细胞M2型极化,并抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。

肿瘤相关巨噬细胞在胃癌微环境中的作用

肿瘤微环境(TME)是肿瘤细胞及其周围的非肿瘤细胞和基质成分构成的复杂生态系统,包括免疫细胞、成纤维细胞和细胞外基质等多种成分.其中,肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)是TME中的重要成分.TAMs是在TME中浸润并且聚集在恶性肿瘤细胞周围的巨噬细胞,是TME中最为重要的组成细胞之一,在肿瘤发生发展中发挥重要作用.TAMs可通过分泌细胞因子和外泌体等与TME中的其他细胞相互作用,导致免疫抑制型TME,促进肿瘤细胞增殖转移.文章重点讨论TAMs在胃癌TME中的生物学特征、在胃癌侵袭和转移中的作用、免疫耐药机制以及与其他细胞间的相互作用,以期为实现针对TAMs的胃癌靶向治疗提供思路.

胃癌组织中白细胞介素-6及肿瘤相关巨噬细胞和新生淋巴管的表达及意义

目的 探讨胃癌组织中IL-6、肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）和新生淋巴管的表达的相关性及其与胃癌患者临床病理因素和预后的关系.方法 回顾性分析2012年9月至2013年9月第三军医大学西南医院收治的40例胃癌患者的临床资料.收集患者手术切除的胃组织标本进行研究.采用免疫组织化学染色检测胃癌组织及癌旁组织中IL-6、TAMs特异性抗原CD68、淋巴管特异性蛋白D2-40的表达.分析IL-6、CD68及D2-40间表达的相关性,及其与胃癌患者临床病理因素及预后的关系.采用电话方式进行随访,随访时间截至2014年7月.符合正态分布的计量资料以x^-±s表示,采用t检验,相关性分析采用线性相关分析.IL-6、CD68及D2-40表达与患者临床病理因素的关系采用t检验或方差分析.采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存分析采用Log-rank检验.结果 IL-6、CD68和D2-40的表达均位于胃癌组织及癌旁组织细胞的细胞质.胃癌组织中IL-6、CD68、D2-40阳性表达和IL-6与CD68阳性共表达的细胞数分别为（48.0±10.3）个、（26.0±5.5）个、（7.6±3.8）个、（11.4±2.1）个,癌旁组织中其阳性表达的细胞数分别为（11.1±2.3）个、（5.9±1.6）个、（2.5±1.2）个、（2.1±0.7）个,两者上述指标比较,差异均有统计学意义（t=22.021,22.105,8.103,21.893,P＜0.05）.胃癌组织中IL-6阳性表达的细胞数与CD68阳性表达的细胞数、D2-40阳性表达的细胞数及IL-6和CD68阳性共表达的细胞数均呈正相关（r=0.941,0.776,0.781,P＜0.05）.CD68阳性表达的细胞数与D2-40阳性表达的细胞数呈正相关（r=0.840,P＜0.05）.TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的胃癌患者IL-6、CD68、D2-40阳性表达和IL-6与CD68阳性共表达的细胞数分别为（38.6±5.3）个、（21.0±2.2）个、（4.7±1.6）个、（9.7±1.2）个,TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期的胃癌患者分别为（57.3±2.6）个、（31.1±1.9）个、（10.6±2.9）个、（13.1±1.3）个;两者上述指标比较,差异均有统计学意义（t=-14.169,-15.509,-8.149,-8.509,P＜0.05）.肿瘤浸润深度为T1～T2期的胃癌患者IL-6、CD68、D2-40阳性表达和IL-6与CD68阳性共表达的细胞数分别为（41.5±12.2）个、（22.2±5.1）个、（5.5±2.6）个、（9.7±1.8）个,肿瘤浸润深度为T3～T4期的胃癌患者分别为（50.1±8.8）个、（27.3±5.1）个、（8.3±3.9）个、（12.0±1.9）个;两者上述指标比较,差异均有统计学意义（t=-2.435,-2.770,-2.212,-3.236,P＜0.05）.无淋巴结转移的胃癌患者IL-6、CD68、D2-40阳性表达和IL-6与CD68阳性共表达的细胞数分别为（39.2±6.7）个、（21.3±3.0）个、（5.2±3.3）个、（9.8±1.4）个,有淋巴结转移的胃癌患者分别为（55.2±6.4）个、（29.9±3.8）个、（9.6±2.9）个、（12.7±1.6）个;两者上述指标比较,差异均有统计学意义（t=-7.722,-7.838,-4.581,-5.756,P＜0.05）.40例患者均获得术后随访,随访时间为6～22个月,中位随访时间为18个月.20例IL-6高表达胃癌患者和20例IL-6低表达胃癌患者的1年累积生存率分别为70.0％、90.0％,两者生存情况比较,差异有统计学意义（χ^2=4.410,P＜0.05）.20例CD68高表达胃癌患者和20例CD68低表达胃癌患者的1年累积生存率分别为70.0％、90.0％,两者生存情况比较,差异有统计学意义（χ^2=4.075,P＜0.05）.20例D2-40高表达胃癌患者和20例D2-40低表达胃癌患者的1年累积生存率分别为65.0％、95.0％,两者生存情况比较,差异有统计学意义（χ^2=4.705,P＜0.05）.20例IL-6和CD68高共表达胃癌患者和20例IL-6和CD68低共表达胃癌患者的1年累积生存率分别为70.0％、90.0％,两者生存情况比较,差异有统计学意义（χ^2=4.152,P＜0.05）.结论 IL-6、TAMs和新生淋巴管在胃癌组织中高表达,IL-6与TAMs、IL-6与新生淋巴管、TAMs与新生淋巴管表达水平均呈正相关,IL-6、TAMs和新生淋巴管与胃癌进展及患者预后密切相关.

胰腺癌TAK1、p-TAK1的表达及肿瘤相关巨噬细胞的浸润密度

目的 检测胰腺导管腺癌及相应癌旁胰腺组织TGF-β激活激酶1（TAK1）、磷酸化TAK1（p-TAK1）的表达及肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的浸润密度,分析二条途径之间的相关性及其与肿瘤临床病理特征的相关性.方法 应用免疫组化法检测57例胰腺癌及35例相应癌旁正常胰腺组织TAK1、p-TAK1及TAM标志物CD68蛋白的表达,计算TAM浸润密度,采用SPSS18.0软件分析它们之间及其与临床病理特征间的关系,采用多因素Logistic回归分析胰腺癌TNM分期的独立危险因素.结果 胰腺癌组织TAK1、p-TAK1蛋白的阳性表达率分别为42.1％（24/57）和40.4％ （23/57）,显著高于癌旁组织的14.3％（5/35）和11.4％（4/35）;胰腺癌组织CD68阳性的TAM高密度浸润者占38.6％（22/57）,显著高于癌旁组织的8.6％（3/35）,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.TAK1蛋白表达与胰腺肿瘤的最长径、分化程度、淋巴结转移、远处转移、临床分期显著相关;p-TAK1蛋白表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、远处转移、临床分期显著相关;TAM浸润密度与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、远处转移、临床分期显著相关（P值均＜0.05）.胰腺癌组织TAK1、p-TAK1表达水平均与TAM的浸润密度呈正相关（P值均＜0.01）.多因素Logistic回归分析显示胰腺癌组织TAM高密度浸润是高等级TNM分期的独立危险因素（P =0.002,OR=129.5,95％ CI 6.2 -2718.6）.结论 TAK1途径及TAM在胰腺癌的发生和发展过程中具有重要作用,并且两种机制可能存在一定的协同作用。