RNA干扰技术沉默MDR1基因逆转大肠癌耐药细胞株LoVo/5-Fu的耐药性

目的探讨多药耐药(MDR1)基因沉默对大肠癌耐药细胞系LoVo/5-Fu耐药性的逆转作用。方法构建靶向MDR1的短发夹RNA(EASY-shRNA-MDR1)干扰质粒转染LoVo/5-Fu,实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)在mRNA水平检测抑制效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞对5-Fu的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与未转染组相比,EASY-shRNA-MDR1组细胞MDR1 mRNA表达明显下调(P<0.05);细胞对5-Fu的IC50及RI显著降低(P<0.05),敏感性的相对逆转率为74.7%;凋亡率明显升高(P<0.05)。结论 EASY-shRNA-MDR1可有效抑制大肠癌耐药细胞中MDR1的表达,进而降低了大肠癌耐药株对5-Fu的耐药性。

通过小干扰RNA沉默mdr-1基因逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/TAXOL多药耐药的研究

目的 构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的多药耐药-1（mdr-1）基因的短发夹状RNA重组质粒,探讨RNAi沉默技术逆转卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞多药耐药的可行性.方法运用基因克隆技术构建靶向于mdr-1基因的重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/TAXOL,反转录聚合酶链反应检测到mdr-1基因表达.CCK-8检测对SKOV3/TAXOL细胞增殖的抑制作用.结果构建的重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1能明显抑制mdr-1基因的表达.蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1的SKOV3/TAXOL靶细胞的抑制率显著提高.RT-PCR检测mdr-1基因mRNA转录水平下降;pPGPU6/GFP/Neo-mdr-1明显抑制SKOV3/TAXOL细胞的增殖.结论重组质粒PGPU6/GFP/Neo-mdr-1可有效地抑制SKOV3/TAXOL细胞内源mdr-1基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的多药耐药.为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段.