超微天麻(Gastrodia elata Bl.)粉的吸收及改善睡眠功能的研究

研究超微天麻(Gastrodia elata Bl.)粉(D50 23.77μm)的吸收及对小鼠睡眠的改善作用。HPLC法测定超微天麻粉中天麻素的含量,通过灌胃超微天麻粉(4 g/kg)和静脉注射天麻素(25 mg/kg)考察微粉中天麻素的生物利用度,按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中方法每天经口灌胃给予此样品(40、400和1 200 mg/kg·BW),观察其改善睡眠的功能。结果表明,超微天麻粉中天麻素含量为0.24%,天麻素的绝对生物利用度达60.77%;受试天麻超微粉可协同戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用(P<0.05)和缩短巴比妥钠睡眠潜伏期(P<0.01),无直接睡眠作用,表明40 mg/kg BW此超微天麻粉具有改善睡眠的功能。

Identification of Four Gastrodia elata Bl. Variants with DNA Fingerprints

[Objective] This study aimed to investigate the four Gastrodia elata B1. variants at the DNA level. [Method] Primers with good reproducibility, abundant polymorphism and high resolution were selected from the 35 random primers with RAPD marker technology and the amplification results were analyzed. [ Result] By using RAPD technology, DNA fingerprints of four Gastrodia elata B1. variants with abundant polymorphism, good reproducibility and high resolution was successfully constructed; to be specific, each Gastrodia elata B1. variant has its unique fingerprint with primers S29 and S38 ; DNA bands of the Gastrodia elata BI. variants vary significantly, which is contributive to distinguish the four Gastrodia clara B1. variants. [Condusion] This study provided an effective means for the identification and protection of Gastrodia elata germplasms with intraspecific variations.

食药两用物质天麻、灵芝的外源性污染物分析

测定食药两用物质天麻、灵芝的外源性污染物,进行安全性风险评估。采用酸碱滴定法测定二氧化硫残留量,微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定7种重金属铬、铜、砷、镉、铅、汞和钡含量,气相色谱质谱联用法测定44种农药残留量,并利用内梅罗综合污染指数法评价重金属污染情况。15批天麻样品中二氧化硫检出率100%,超标率100%,25批灵芝样品检出率12%,无超标现象。天麻和灵芝中重金属含量按中药材属性判定时,合格率100%,按食品属性参照国家安全食品标准判定时,15批天麻中Cr超标11批,25批灵芝样品中Pb超标1批,As超标2批,Cr超标14批;内梅罗综合污染指数显示,天麻和灵芝中轻度以上污染率为73%和40%。灵芝中共检出毒死蜱、联苯菊酯和百菌清3种农药,均符合相关限量要求,天麻样品未检出农药。天麻和灵芝均存在外源性污染风险,天麻中二氧化硫和重金属超标,灵芝有农药超标的风险,研究可为食药两用类物质开展安全性风险评估及制定限量标准提供参考和依据。

天麻优良品种“林麻1号”选育

在通海县四街镇四寨村委会开展实生乌天麻(Gastrodia elata Blume.)选育,通过初选、复选、决选、区域性试验、生产性试验,最终选育出优良的“林麻1号”天麻品种(良种编号:云R-SV-GE-059-2021)。结果显示,所筛选出来的林麻1号优良品种与母株相比,其适应性、丰产性、稳定性高度一致,通过检测,浸出物达15.2%,天麻素和对羟基苯甲醇总量达0.29%,超过中国药典要求,该良种认定填补云南省天麻良种的空白。

天麻石油醚提取部位对秀丽隐杆线虫Aβ蛋白毒性的抑制作用及其机制

目的探究天麻石油醚提取部位(Petroleum ether extract from Gastrodia elata,GEPEE)对秀丽隐杆线虫体内β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的作用及可能机制。方法以秀丽线虫为模式生物,实验分为空白组(Control组)、GEPEE 0.5 mg·mL^(-1)组、GEPEE 1 mg·mL^(-1)组,研究GEPEE对线虫瘫痪、寿命、运动能力、氧化应激和热应激、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平、Aβ聚集实验的影响,用实时荧光定量PCR检测线虫体内与胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路(Insulin/IGF-1 signaling pathway,IIS)相关基因表达的变化,并结合高效液相色谱技术分析其主要成分。结果与Control组比较,GEPEE干预后,能明显改善线虫瘫痪表型(P<0.01),延长线虫寿命(P<0.01),增强线虫运动能力(P<0.01),并提高抵抗外界氧化胁迫(P<0.01)、高温的应激能力(P<0.01),改善Aβ在体内的沉积量(P<0.01),降低线虫体内ROS含量(P<0.01),降低Aβ、daf-2的表达水平(P<0.01),提高daf-16及其靶基因sod-3、gsh-px,hsf-1及其靶基因hsp-16.2,skn-1及其靶基因gst-4的表达水平(P<0.01),经高效液相色谱分析,其主要成分包括对羟基苯甲醇和对乙氧基苯甲醇。本实验表明GEPEE通过降低CL4176线虫体内的ROS水平,提机体抗氧化水平和调控IIS通路,从而降低CL4176线虫中Aβ诱导的毒性。结论GEPEE能抑制Aβ蛋白毒性,其机制与调控IIS信号通路有关。

天麻多糖分离、结构分析与自由基清除作用研究

目的:研究活性天麻多糖的提取、结构分析与自由基清除作用。方法:以水提醇沉法制备天麻粗多糖,CTAB季铵盐络合法、凝胶过滤柱层析进一步纯化;通过IR、NMR等分析天麻多糖结构;利用Feton体系和邻苯三酚自氧化反应,采用比色法测定天麻多糖对.OH及O-2.的清除作用。结果:通过正交试验获得天麻多糖提取工艺为:料水比1:40,浸提温度80℃,提取次数2次,75%乙醇沉淀;红外光谱和1H-NMR分析天麻多糖为α-吡喃己糖,单糖分析结果显示它为单一葡萄糖残基组成,13C-NMR分析表明天麻多糖为带1→6键接支链的α-(1→4)-D-葡聚糖;在相同的实验体系浓度下,天麻粗多糖及纯化多糖对.OH的IC50分别为1.18、1.62mg/ml;对O-2.的IC50分别为0.81、1.03mg/ml。结论:天麻多糖为1→6键接支链的α-(1→4)-D-葡聚糖,对O-2.具有一定清除能力。

天麻多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠体液免疫功能的影响

目的探讨天麻多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠体液免疫功能的影响。方法环磷酰胺制造免疫功能低下小鼠模型。实验设盐酸左旋咪唑对照组、模型组、天麻多糖高剂量组、天麻多糖中剂量组、天麻多糖低剂量组。造模后给予天麻多糖治疗10 d。实验结束处死小鼠,比较各组小鼠胸腺指数、脾指数、血清Ig A、Ig G和Ig M及溶血素水平。结果与模型组比较,天麻多糖中、高剂量组显著升高血清Ig A、Ig G及血清溶血素水平(P<0.01),多糖高剂量组升高脾指数和胸腺指数,多糖中剂量组明显升高血清Ig M水平(P<0.05)。结论天麻多糖可以缓解环磷酰胺对小鼠体液免疫功能的抑制作用。

天麻液相色谱指纹图谱研究

目的建立天麻的液相色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制天麻质量提供新方法。方法采用HPLC法分析不同产地的18个天麻样品,确定指纹峰并进行对照药材相似度、共有模式相似度的计算,用纯品随行对照结合LC-MS对主要指纹峰进行定性鉴定。结果建立了由27个指纹峰和17个共有峰组成的天麻液相色谱指纹图谱,指纹峰具有特征性,鉴定了其中12个主要的指纹峰。用对照药材相似度,可将天麻样品分为3类安徽河南产天麻、陕西四川产天麻和云南产天麻。两个相关系数分界点为0.80和0.58,夹角余弦分界点为0.88和0.73。结论所选指纹峰有特征性,建立的指纹谱可用来区别3个产地的天麻药材,并为进一步控制天麻质量提供依据。

天麻多糖对H22荷瘤小鼠细胞周期及caspase蛋白活性的影响

目的探讨天麻多糖对H22荷瘤小鼠细胞周期及caspase蛋白活性的影响。方法右侧腋窝接种H22肿瘤细胞制造荷瘤小鼠模型。实验设模型组、高剂量天麻多糖组、中剂量天麻多糖组、低剂量天麻多糖组及环磷酰胺(CTX)组。造模后给予天麻多糖或环磷酰胺治疗。实验结束处死小鼠,比较各组瘤重、抑瘤率、caspase-3,8,9及细胞周期分布状况。结果天麻多糖可明显减轻瘤重,高剂量天麻多糖抑瘤率可达44.7%;与模型组比较,天麻多糖中、高剂量组可显著升高caspase-3,8,9水平及G0/G1期细胞百分数,降低G2/M期细胞百分数。结论天麻多糖对H22荷瘤小鼠具有显著的抑瘤作用,其作用机制可能与影响细胞周期分布,抑制细胞增殖并激活Caspase系统诱导肿瘤细胞凋亡有关。

天麻多糖提取工艺的研究

目的优化从天麻中提取多糖的工艺。方法采用正交试验法,以天麻提取液中多糖含量为考察指标,研究提取温度、提取时间、料水比对天麻多糖提取工艺的影响。结果各因素影响天麻多糖提取工艺的重要程度依次为提取温度、提取时间、料水比。最佳提取工艺参数为提取温度100℃,提取时间4 h,料水比1∶40。结论该提取工艺方法稳定、简便、可行。

天麻的组织培养及快速繁殖

目的 利用组织培养方法快速繁殖成米麻作为种麻 ,为寻找出一条简便可行的快繁天麻种麻的新途径提供理论依据。方法 天麻块茎或茎尖无菌离体培养 ,米麻块茎诱导培养基为 1/2 MS+6 - BA1mg/L+NAA0 .5mg/L +香蕉 5 0 mg/L ;箭麻茎尖诱导培养基为 1/2 MS+6 - BA 2 mg/L +NAA 0 .2 mg/L。结果 小米麻经 5 0 d无菌培养后开始生长出新米麻 ,70 d后原小米麻块茎上生长出多个分枝的新米麻 ;箭麻茎尖超过 140 d组织培养 ,茎尖分化、诱导形成原球茎 ,超过 16 0 d培养原球茎长大并开花。

天麻多糖通过影响小鼠免疫系统抑制肿瘤生长

目的研究天麻多糖对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响及其对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法 MTT法检测不同质量浓度的天麻多糖对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响;健康小鼠和接种H22瘤株造模昆明种小鼠分成7组(n=12):对照组(0.9%NaCl溶液2 ml),模型组(0.9%NaCl溶液2 ml),环磷酰胺(20 mg·kg-1)组,天麻多糖低、中、高剂量(30、60、90 mg·kg-1)组,观察天麻多糖对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果天麻多糖对肝癌H22细胞增殖有显著的抑制作用。且在小鼠体内能明显抑制对H22肿瘤瘤体生长,高剂量(90 mg·kg-1)效果明显(P<0.05);环磷酰胺和天麻多糖合用可使环磷酰胺对白细胞计数、胸腺指数和脾指数的影响降低。结论天麻多糖能抑制肝癌H22细胞的增殖,与环磷酰胺联用可降低环磷酰胺对免疫系统的伤害。

不同坡向与种植层数组合对仿野生栽培红天麻的影响

目的:筛选出最适合仿野生栽培天麻的坡向与种植层数组合。方法:试验采用随机区组设计仿野生栽培红天麻Gastrodia elata Bl.f.elata,探讨不同坡向与种植层数组合下天麻生长动态和产量的变化,以及栽培天麻经济效益的分析,坡向设南坡、北坡两个水平,种植层数设1层、2层、3层三个水平。结果:不同坡向对单个新生麻长宽厚及鲜重生长效应依次为南坡>北坡,3个种植层数对单个新生麻长宽厚及鲜重生长效应依次为3层>2层>1层。坡向和种植层数存在互作效应,6个处理中南坡-3层处理各时期单个新生麻长宽厚及鲜重最高,采收期新生麻数最多,总产量极显著高于其他处理,且经济效益最好。结论:南坡-3层为仿野生栽培红天麻的最佳组合,是既能充分利用适栽区资源又能提高产量的一种行之有效的栽培模式。

不同定植密度和种苗等级对乌天麻地下块茎主要农艺性状和经济指标的影响

研究了不同定植密度与种苗等级对乌天麻地下块茎主要农艺性状和经济指标的影响。采用随机区组设计,通过Excel2003,SPSS 18.0等软件对单个块茎鲜重、块茎长、块茎宽、块茎厚等农艺性状进行均值比较和方差分析,对经济指标进行作图比较。农艺性状均值比较显示,在定植密度8~20个/塘及种苗等级1~3级时,随着定植密度的增加和种苗等级的降低,块茎长、块茎宽、块茎厚、单个块茎鲜重都呈降低趋势。农艺性状方差分析表明,除环距和点状横环纹环数外,不同定植密度、种苗等级对乌天麻块茎长、块茎宽、块茎厚、箭芽长、单个块茎鲜重等农艺性状指标影响有差异,有些影响达到显著或极显著水平。经济指标分析结果表明,定植密度在8~20个/塘时,随着定植密度的增加,每塘乌天麻的市场经济价值呈先降低后升高再降低趋势,定植密度在8个/塘时每塘乌天麻的市场经济价最大;种苗等级在1~3级时,随着种苗等级的降低,每塘乌天麻的市场经济价值随之降低;定植混合种苗,其每塘乌天麻的市场经济价值介于2级种苗与3级种苗。本研究的结果表明,在低定植密度8个/塘和高种苗等级1级的处理下可以获得乌天麻较好的农艺性状指标和经济指标。定植混合种苗其块茎长、块茎宽、块茎厚、单个块茎鲜重等农艺性状指标和经济指标介于2级种苗与3级种苗。

药食两用植物-天麻

天麻是我国名贵的中药材之一,也是一种极其重要的药食两用植物。天麻除了具有对神经细胞损伤的保护、抗惊厥、镇静催眠等作用以外,在民间有很多种做法,用于食疗。通过对天麻药理作用的概述,详述了天麻的食用方法,并对天麻的相关保健品做了介绍,使其关于药食两用方面的报道更加详尽、系统。

不同栽培措施对天麻产量和产量结构的影响研究

[目的]研究遮阳网的遮阴度和高度以及覆盖物的种类和覆盖厚度对天麻产量和产量结构的影响。[方法]在70％与90％遮光率的遮阳网和2．5、2．0m高度下，测定平地栽培天麻的产量及产量构成以及树叶和沙土分别在3、5、10cFn的覆盖厚度下平地栽培天麻的产量及产量构成。[结果]结果表明：在7～9月份高温季节，采用90％遮光率的遮阳网能有效降低天麻生长层温度，对天麻产量的提高效果明显；青冈树叶覆盖5cm的厚度是最佳的覆盖处理。[结论]在平地栽培情况下，遮阳对天麻的产量及产量结构影响很大.

不同分布区天麻的AFLP分析

从贵州、云南、四川、陕西和辽宁收集了27份天麻样品,从64对AFLP选择性引物组合中筛选出16对组合,对不同分布区天麻的遗传多样性进行分析。16对引物共产生548条大小在100～1500 bp的谱带,其中多态性带428条,多态性比率(PP)达78%,说明不同分布区的天麻中存在一定的遗传多样性,且AFLP可以有效地进行天麻遗传多样性的分析。遗传差异分析结果表明,27个样品的遗传距离在0.5930～0.0187,平均为0.2199,表明不同分布区天麻个体间存在一定的遗传差异。5个省份的样品中来自贵州的样品遗传差异相对较大,表明贵州蕴藏着相对丰富的基因资源,可以作为天麻遗传改良的重要种质资源。不同变型的AFLP分析结果显示,3种变型从分子上无明显差异,说明天麻种内的变型仅仅是表型上的变异,尚未在遗传上固定下来,对天麻几个变型的划分是否成立还有待进一步研究。

天麻中天麻素RP-HPLC测定及提取工艺研究

通过考察不同检测波长、流动相和溶剂对天麻素出峰效果的影响,改进了2005年版《中国药典》收载的天麻药材中天麻素含量测定的RP-HPLC方法,并探讨了提取溶剂、提取温度、料液比、提取时间对天麻素提取工艺的影响。结果表明:采用DiamonsilC18柱(150mm×4.6mm,5μm),乙腈-水(3:97,V/V))溶液为流动相,流速1ml/min,柱温为室温,检测波长220nm,并用乙腈-0.05%磷酸溶液(3:97,V/V))作为溶剂,天麻素在10～80μg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系,其回归方程和相关系数分别为:y=4.0264x+0.6311,R2=0.9992,最低检测限为2ng。精密度RSD为0.41%(n=6),重现性实验RSD为0.86%(n=6),回收率为98.4%,RSD为0.84%(n=6);天麻素最佳提取工艺条件为:提取溶剂50%乙醇,提取温度70℃,料液比1:10(g/ml),提取时间6h。

微粉化对天麻(Gastrodia elata Bl.)粉理化性质和吸收的影响

研究了微粉化处理对天麻(Gastrodia elata Bl.)粉的理化性质及在大鼠体内吸收的影响。对天麻普通粉和超微粉进行粒径大小、分布、微观形貌、休止角、滑角、膨胀力、松密度、水溶性和主要成分等理化指标的测定,以及天麻活性成分天麻素的生物利用度研究。结果表明:微粉化处理使天麻粉平均粒径由121.50μm减小到34.09μm,粒径分布范围变窄,粉体更加均匀;天麻微粉膨胀力、松密度和水溶性较之细粉均有不同程度的提高,粉体的流动性降低;红外光谱显示天麻经超微粉碎后其主要成分未发生变化。普通粉和微粉的天麻素绝对生物利用度分别是34.18%和45.49%。研究结果表明微粉化处理对天麻粉物理特性的改善有助于营养成分溶出,显著提高天麻有效成分的吸收率,为指导天麻微粉的应用生产提供理论依据。

天麻多肽的分离纯化研究

目的:研究生物多肽对生物机体的生命活动有益或生理作用。方法:对天麻(Gastrodiae elataB1.)初提液两次超滤(3kDa和1kDa超滤膜),凝胶过滤和快速蛋白液相色谱(FPLC)分离纯化,以及反相高效液相色谱(RP-HPLC)对目标肽进行分析检测。结果:由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析肽液,得到各肽组分的相对分子质量分布范围。FPLC和RP-HPLC分析第二峰结果表明,此多肽组分分别只由一种肽组成。结论:此多肽相对分子质量在2500Da左右,具有很好的亲水性。