继发性甲状旁腺功能亢进症大鼠Gcm2的表达

目的研究继发性甲状旁腺功能亢进症大鼠在病程中Gcm2的表达变化以及与甲状旁腺细胞增殖变化之间的关系。方法5/6肾切除结合高磷饲养建立大鼠继发性甲状旁腺功能亢进症模型,第1、4、7、14、21、28天取甲状旁腺和血清标本,ELISA检测血清i-PTH浓度变化,Real-time PCR和Western blot检测Gcm2mRNA和蛋白表达的变化,免疫组化观察不同时间点甲状旁腺细胞的增殖变化情况。结果与假手术对照组比较,造模后模型组i-PTH显著升高(P<0.01);模型组Gcm2mRNA的表达随时间进展升高趋势逐渐明显,在第1、4、7天仅缓慢升高,无统计学差异(P>0.05),第14天始升高趋势明显(P<0.01),于第21天升高至最高点,为假手术对照组的9.92倍(P<0.01),第28天表达量稍有下降(P<0.01);模型组Gcm2的蛋白表达呈先下调后升高的趋势,第1天先有所下调,第4天进行性升高,第7天稍有波动,第14天后一直处于显著升高的表达状态,于第21天到达最高点,第28天稍有回落(P<0.01);模型组甲状旁腺细胞增殖在第1天便显著增强(P<0.01),第4天达最高(P<0.01),之后开始回落,至第14天回落到与假手术对照组相近的水平,一直到实验结束。结论在继发性甲状旁腺功能亢进症发病过程中,Gcm2的表达变化和甲状旁腺细胞增殖在时间进程上有相反的趋势,两者的交互作用可能是导致甲状旁腺功能亢进的部分原因。

Gcm2基因敲除诱导成体小鼠甲状旁腺功能减退

目的通过敲除成体小鼠Glial cells missing2（Gcm2）基因，初步探索该基因在成体小鼠甲状旁腺功能减退症发病过程中的作用。方法他莫昔芬诱导Gcm2^E2fl/fl Cre-ER成体小鼠Gcm2基因条件性敲除，PCR鉴定敲除小鼠基因型，蛋白质印迹法检测甲状旁腺Gcm2蛋白的表达．钙磷测定试剂盒和ELISA法分别检测血清钙磷和甲状旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）浓度变化，Ki-67免疫组化检测甲状旁腺细胞的增殖变化情况，Real—timePCR检测甲状旁腺PTH、钙敏感受体（calcium sensing receptor，CaSR）基因mRNA的表达．microCT检测骨量变化。结果PCR检测甲状旁腺组织基因组DNA呈Gcm2基因敲除型；与野生型对照组和Gcm2^E2fl/flCre—ER小鼠溶剂对照组相比，Gcm2敲除组小鼠甲状旁腺Gcm2的蛋白表达明显下调（均P〈0．01），血磷明显升高（均P〈0．01），血钙和PrH浓度明显降低（均P〈0．01），甲状旁腺细胞增殖明显增加（均P〈0．01），甲状旁腺中胛H和CaSR的mRNA表达明显下调（均P〈0．01）。结论Gcm2基因的可诱导性条件性敲除可导致成体小鼠甲状旁腺功能减退。提示Gcm2基因可能为甲状旁腺功能减退症的重要治疗靶点之一。