蛤蚧蛋白组分对肝癌HepG-2细胞生长抑制作用的研究

目的从蛤蚧组织液中筛选对肝癌HepG-2细胞具有生长抑制作用的蛋白组分,体外研究其抗肿瘤作用及机制。方法提取蛤蚧蛋白,用sephadexG-50凝胶层析分离出不同分子量的蛤蚧蛋白组分,采用MTS法观察蛤蚧蛋白各组分对肝癌HepG-2细胞的生长抑制作用;Hoechst33342/PI双荧光染色法观察其作用前后的细胞凋亡,并用RT-PCR法检测蛤蚧蛋白组分作用后bax、bcl-2、cmyc和p53基因的表达情况。结果 sephadexG-50凝胶层析可分离出3种分子量不同的蛤蚧蛋白组分,3种蛤蚧蛋白组分都具有不同程度地抑制HepG-2细胞生长的作用,其中分子量为3～20KD的蛤蚧蛋白组分抑制作用最强,且具有剂量依赖性。Hoechst33342/PI双荧光染色法检测显示3～20KD蛤蚧蛋白作用后坏死细胞和凋亡细胞均增加,RT-PCR法检测发现3～20KD蛤蚧蛋白组分作用后c-myc基因mRNA表达水平稍降低,p53基因mRNA表达水平升高,但两者差异均无统计学意义,bax基因mRNA表达水平明显增高,差异有统计学意义,bcl-2基因在蛋白作用前后均无表达。结论实验提取的蛤蚧蛋白对肝癌HepG-2细胞具有生长抑制作用,分子量3～2KD的蛤蚧蛋白组分抑制作用最强。其作用机制可能为蛤蚧蛋白通过调高肿瘤bax基因mRNA表达水平诱导肝癌HepG-2细胞凋亡。

正交试验优选天龙粉水溶性蛋白质的提取工艺

目的正交试验法优选天龙粉水溶性蛋白质的超声提取工艺。方法以牛血清蛋白标准液为标准品,紫外分光光度法测定吸光度,以水提液中蛋白质含量为考查指标,通过正交试验法探究料液比、超声提取时间、p H对提取效果的影响,从而优化提取工艺条件。结果在所选因素水平范围内,天龙粉水溶性蛋白质最佳提取工艺参数为:料液比为1∶40、超声提取时间为20 min、p H为9。在此条件下,天龙粉水溶性蛋白质的提取含量为50.789 mg/g。结论采用正交试验优化超声提取工艺,有效提高天龙粉水溶性蛋白质提取含量,具有较好的应用前景。

Biochemical variability between two Egyptian <i>Stenodactylus </i>species (Reptilia: Gekkonidae) inhabiting North Sinai

Polyacrylamide gel electrophoreses for malate dehydrogenase (Mdh) and beta-esterase (β-Est) isoenzymes were conducted for biochemical differentiation between two Stenodactylus gekkonid species inhabiting North Sinai of Egypt. Total lipids and proteins of liver and muscle tissues in both species were also analyzed. A total of three Mdh isoforms were recorded in the analysis, in which the activity of Mdh-2 and Mdh-3 seemed to be higher in S. petrii than in S. sthenodactylus. This high activity could be supported by the significant increase in the total lipids and proteins in liver and muscle tissues of the species. It may thus be reasonable to suppose that S. petrii is more active, energetic and adaptable in the desert habitat than S. sthenodactylus. β-Est showed six fractions in S. petrii and only one fraction in S. sthenodactylus. It is therefore noticeable that β-Est is more highly expressed in S. petrii than in S. sthenodactylus.

不同炮制方法对蛤蚧质量的影响研究

目的探讨不同炮制方法对蛤蚧成分含量的影响。方法制备蛤蚧、酒蛤蚧、油酥蛤蚧、蛤粉炒蛤蚧饮片,参考2015版中国药典检测醇溶性浸出物含量,采用凯式定氮法测定蛋白质含量,氨基酸自动分析仪检测氨基酸的种类和含量,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定10种无机元素的含量。结果除蛤粉制外,油酥制、酒制可以提高蛤蚧中浸出物、蛋白质和总氨基酸含量。酒制、油酥制和蛤粉制蛤蚧对蛤蚧宏量元素Ca、K、Na、Mg的含量影响不大,但可以提高微量元素Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Se的加和量。结论不同炮制方法对蛤蚧的浸出物、蛋白质、氨基酸、宏微量元素的含量有不同程度的影响。

壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞EC9706的作用和体内抗肿瘤活性

目的：观察壁虎醇提物体内外抗肿瘤作用。方法：体外实验采用四噻唑蓝法（MTT）检测壁虎醇提物对人食管鳞癌细胞EC9706的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡的形态改变;采用TUNEL法检测细胞凋亡率;采用SP免疫组化法检测细胞内凋亡蛋白Bax和Bc l-2的表达。体内实验以小鼠S180肉瘤为模型,观察壁虎醇提物对肿瘤生长的抑制作用。结果：6-8 g.L-1壁虎醇提物作用于细胞24,48,72 h后能够明显抑制EC9706食管鳞癌细胞株的生长（P（0.01）,抑制作用呈剂量和时间依赖性;Hoechst33258荧光染色可见凋亡细胞;6,7 g.L-1壁虎醇提物处理组细胞凋亡率高于阴性对照组（P〈0.05,P〈0.01）,凋亡率分别为（12.73±3.84）%,（19.80±2.32）%;免疫组化结果显示细胞内Bc l-2蛋白无明显变化,而Bax蛋白表达升高（P（0.01）,Bax/Bc l-2升高。不同剂量的壁虎醇提物（0.6,1.2,2.4 g.kg-1）均可抑制S180肉瘤在昆明小鼠体内生长,抑瘤率分别为44.88%,63.94%,69.53%。结论：壁虎醇提物体内体外具有抗肿瘤作用,体外诱导EC9706细胞凋亡的作用机制可能与凋亡相关蛋白Bax/Bc l-2升高有关。

壁虎多肽混合物对HepG2细胞增殖及内质网应激途径的影响

目的研究壁虎多肽混合物(GPM)对人肝癌HepG2细胞增殖及内质网应激途径的影响。方法用不同浓度GPM(0,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.40,0.45 mg·mL^(-1))处理HepG2细胞24 h。以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,根据MTT结果,将细胞分为空白组和低、中、高3个质量浓度(GPM:0.1,0.2,0.3 mg·mL^(-1))实验组,对照组(氟尿嘧啶10μg·mL^(-1))。以Western blot法检测内质网应激相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。结果 GPM可抑制HepG2细胞的增殖,并具有质量浓度依赖性,作用24,48,72h后,其IC50值分别为0.27,0.23,0.20 mg·mL^(-1)。正常组、对照组和低、中、高3个质量浓度实验组的双链RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶(PERK)与GAPDH灰度比值分别为(4.31±0.81)×10^(-2),(8.92±0.91)×10^(-2),(20.73±0.97)×10^(-2),(24.04±0.95)×10^(-2),(11.65±1.67)×10^(-2)。这5组的GRP78与GAPDH灰度比值分别为(27.99±2.36)×10^(-2),(35.58±1.02)×10^(-2),(42.55±1.19)×10^(-2),(54.91±1.20)×10^(-2),(7.31±1.01)×10^(-2)。这5组的ATF4与GAPDH灰度比值分别为(20.82±1.42)×10^(-2),(39.60±0.56)×10^(-2),(52.02±1.83)×10^(-2),(73.39±1.83)×10^(-2),(18.13±2.28)×10^(-2);这5组的CHOP与GAPDH灰度比值分别为(8.71±0.76)×10^(-2),(11.27±1.07)×10^(-2),(41.29±1.36)×10^(-2),(48.55±1.37)×10^(-2),(33.01±3.95)×10^(-2)。这5组的多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)与GAPDH灰度比值分别为(13.06±2.88)×10^(-2),(36.79±2.10)×10^(-2),(58.72±1.53)×10^(-2),(67.61±1.68)×10^(-2),(34.88±2.02)×10^(-2)。这5组的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)与GAPDH灰度比值分别为(5.92±0.33)×10^(-2),(14.71±1.11)×10^(-2),(17.58±1.33)×10^(-2),(35.41±2.91)×10^(-2),(5.94±1.61)×10^(-2),与正常组相比,4个给药组的以上各项指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。提示GPM可能通过诱导HepG2细胞内质网应激从而诱导细胞凋亡。结论 GPM可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与诱导HepG2细胞内质网应激有关。