葛根芩连汤调控SIRT1/PGC1α/Nrf1信号通路改善追赶生长大鼠糖脂代谢紊乱

目的:探讨葛根芩连汤对高脂饮食诱导追赶生长(CUG)大鼠糖脂代谢的影响及机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组(18只)和追赶生长模型组(42只),采用限制饮食后开放高脂饮食的方式建立追赶生长大鼠模型,观察大鼠一般状况、体质量的变化,分别于第4周、第8周末各组抽取6只大鼠检测空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),评估CUG大鼠胰岛素敏感性及体成分的改变。造模成功后,分别给予葛根芩连汤和吡格列酮干预6周,实验分为6组:正常组、模型组、葛根芩连汤低、中、高剂量组(2.5、5、10 g·kg^(-1))、吡格列酮组(3.125 mg·kg^(-1)),正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃。实验过程中,记录大鼠体质量的变化,于实验结束时检测FBG、FINS、TG、TC水平,计算HOMA-IR指数;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠骨骼肌组织病理学改变;严格按照试剂盒所示方法检测骨骼肌活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨骼肌沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂1α(PGC1α)、核因子E_2相关因子1(Nrf1)m RNA的表达;免疫组化法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨骼肌SIRT1、PGC1α、Nrf1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG有所升高,FINS、HOMA-IR显著升高(P<0.01);血清TG、TC水平明显升高(P<0.05,P<0.01);大鼠骨骼肌组织肌纤维直径显著增加,肌细胞间的脂肪细胞明显增加;骨骼肌ROS、MDA水平显著升高(P<0.01);SIRT1、PGC1α、Nrf1 m RNA及蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,葛根芩连汤各剂量组及吡格列酮组大鼠的体质量、FINS、HOMA-IR、TG水平显著降低(P<0.05,P<0.01),以葛根芩连汤中、高剂量组和吡格列酮组变化最明显;骨骼肌肌间脂肪等间质成分明显减少,肌纤维直径变窄;骨骼肌ROS、MDA水平明显降低(P<0.05,P<0.01);SIRT1、PGC1α、Nrf1 m RNA及蛋白表达均有不同程度升高(P<0.05,P<0.01)。结论:葛根芩连汤可以改善CUG大鼠糖脂代谢紊乱,改善IR,其机制可能与调控SIRT1/PGC1α/Nrf1信号通路有关。

葛根芩连汤及其加减方改善2型糖尿病胰岛素抵抗作用研究进展

葛根芩连汤出自《伤寒杂病论》,为表里双解治疗协热下利的代表方剂,全方由葛根、黄芩、黄连、炙甘草配伍而成,四药合用可外疏内清,共达清热止利,表里同解之效。现临床上基于异病同治的原则将葛根芩连汤用于2型糖尿病(T2DM)的治疗,取得了良好的疗效。T2DM是一种以血糖水平升高为主要特征的慢性代谢性疾病,其病因和发病机制十分复杂,主要与遗传、生活方式、环境及饮食等因素相关。临床观察及实验研究显示,葛根芩连汤及其药效成分可有效防治T2DM。临床上常将葛根芩连汤加减应用或联合西药应用,其治疗效果明显优于单独使用西药。临床实践证实葛根芩连汤可以有效缓解T2DM患者临床症状,减轻胃肠道等不良反应,并减少并发症的发生。实验研究表明葛根芩连汤可通过调控胰岛传导通路及炎症信号通路、缓解氧化应激反应、调节肠道菌群等方式来增强患者胰岛功能,改善胰岛素抵抗,从而治疗T2DM。但目前关于葛根芩连汤通过改善胰岛素抵抗治疗T2DM的机制尚待进一步研究,故该文就葛根芩连汤改善T2DM胰岛素抵抗的临床及实验基础研究进展进行系统综述,以期为葛根芩连汤治疗T2DM作用机制的后续深入研究及其临床防治提供理论和数据参考。

基于靶向代谢组学探讨葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻大鼠粪便短链脂肪酸的影响

目的:通过靶向代谢组学探究葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻(AAD)粪便短链脂肪酸(SCFAs)代谢的影响。方法:将240只SD大鼠随机分为空白组、模型组、丽珠肠乐组(0.15 g·kg^(-1))、葛根芩连汤高、中、低剂量组(10.08、5.04、2.52 g·kg^(-1)),每组40只(雌雄各半),除空白组外,其余各组每日均给予克林霉素(250 mg·kg^(-1))灌胃造模,连续7 d。造模成功后,各给药组按相应剂量灌胃药液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续治疗14 d。分别在药物干预后0、3、7、14 d,从各组中随机抽取8只大鼠,气相色谱-飞行时间质谱法(GC-TOF-MS)对大鼠粪便中SCFAs进行靶向代谢组学分析,运用偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)比较不同治疗时间组间代谢轮廓差异,并对大鼠粪便中SCFAs的组间含量变化进行比较。结果:PLS-DA结果显示,空白组与模型组可明显区分,在葛根芩连汤治疗7 d后逐渐趋近于空白组。进一步分析SCFAs组成后发现,与空白组比较,模型组中乙酸的占比增加,丁酸、戊酸、己酸和异戊酸的占比降低;葛根芩连汤治疗后,丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸占比增加,乙酸、丙酸和己酸占比降低。经差异分析显示,葛根芩连汤可明显改善丁酸含量,对戊酸、己酸含量具有一定回调作用。结论:葛根芩连汤中剂量组治疗7 d后可改善AAD粪便短链脂肪酸含量,这可能与改善SCFAs的组成比例及丁酸、戊酸、己酸等含量有关。

葛根芩连汤及其加减方治疗溃疡性结肠炎的研究进展

葛根芩连汤由葛根、黄芩、黄连、甘草组成,其功效为解表清里,协热下利,是众多医家治疗湿热痢疾所推崇的经典方剂。该文以葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎的临床应用和基础研究进展进行系统综述。现代临床研究发现,除葛根芩连汤原方外,其加减方同样应用于治疗溃疡性结肠炎,并可与西药(美沙拉嗪、奥沙拉嗪、柳氮磺吡啶等)、其他方剂(痛泻要方、白头翁汤、芍药汤、香连丸等)、中医针刺等疗法联合应用。临床疗效结果显示葛根芩连汤及其加减方能显著改善患者腹痛、腹泻、黏液脓血便等症状,降低中医证候积分及结肠黏膜炎症(Baron)评分,提升患者生活质量和睡眠质量,减少不良反应发生,并降低1年内复发率。药理学实验证明葛根芩连汤可抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)等促炎因子的分泌,加强IL-10抑炎因子的释放来减轻肠道炎性活动;可通过调控细胞信号通路,干预通路上下游连接表达,抗氧化应激,并防止细胞凋亡;可调节辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡、调控免疫蛋白正常表达恢复免疫功能;可调节肠道内有益菌群的丰富度,刺激肠上皮细胞再生,保护和修复肠黏膜屏障。葛根芩连汤主要药物成分如葛根素、小檗碱、黄芩素、甘草苷等可起到抗菌、消炎、调节代谢等作用。为葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎提供了依据。

加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺组织TGR5/cAMP/GLP-1信号通路的影响

目的:探讨加味葛根芩连汤对肥胖型2型糖尿病(T2DM)模型小鼠血糖血脂及胰腺组织中G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)相关途径的影响。方法:将10只7周龄无特定病原体(SPF)级雄性m/m小鼠及50只7周龄SPF级雄性db/db小鼠在SPF级实验室适应性喂养1周。m/m小鼠作为空白组。成模后随机分为5组,每组10只,分别作为模型组、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1))、加味葛根芩连汤高、中、低剂量组(31.9、19.1、6.4 g·kg^(-1)),灌胃体积均为10 mL·kg^(-1),模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续12周。定期检测小鼠空腹血糖(FBG)。药物干预12周后,检测血清中糖化血清蛋白(GSP)、血清葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠胰腺组织病理改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胰腺组织TGR5、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化(p)-PKA、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高糖素样肽-1(GLP-1)蛋白的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胰腺组织环磷腺苷(cAMP)的含量。结果:与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织出现病理学改变;小鼠FBG、GSP、GLU、TC、TG、LDL-C水平显著增高(P<0.01),HDL-C水平明显降低(P<0.05);胰腺组织中TGR5、p-PKA(Thr197)/PKA、p-CREB(Ser133)/CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);胰腺组织中cAMP的含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,治疗组胰腺组织病变程度减轻;加味葛根芩连汤高剂量组及二甲双胍组均能够明显降低db/db小鼠FBG、GSP、GLU、TC、TG、LDL-C水平(P<0.05,P<0.01),显著增高db/db小鼠HDL-C水平(P<0.01);除加味葛根芩连汤中剂量组GLP-1蛋白外,加味葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组TGR5、p-PKA(Thr197)/PKA、p-CREB(Ser133)/CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达水平均有不同程度的增加(P<0.05,P<0.01);加味葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组胰腺组织中cAMP的含量明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论:加味葛根芩连汤能够改善T2DM模型db/db小鼠的葡萄糖稳态,其机制可能与调控TGR5/cAMP/GLP-1信号通路相关蛋白表达有关。

基于16S rRNA测序与网络药理学探讨葛根芩连汤干预抗生素相关性腹泻的作用机制

目的:通过16S rRNA测序与网络药理学探究葛根芩连汤(GQT)对抗生素相关性腹泻(AAD)肠道菌群的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机平均分为空白组、模型组、丽珠肠乐组(0.15 g·kg^(-1))、葛根芩连汤高、中、低剂量组(10.08、5.04、2.52 g·kg^(-1)),除空白组外,各组每日均给予克林霉素(250 mg·kg^(-1))灌胃造模,连续7 d。造模成功后,各给药组按剂量灌胃对应药物,1次/d,持续14 d,空白组与模型组给予等体积生理盐水灌胃。通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选GQT活性成分及作用靶点,利用人类基因数据库GeneCards、在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库、药物遗传学与药物基因组学知识库(PharmGKB)、药品生物信息学和化学信息学数据库DrugBank、疾病相关的基因与突变位点数据库DisGeNET检索AAD疾病靶点,通过R软件分析获得“药物-疾病”共有靶点。利用STRING数据库分析靶点蛋白质-蛋白质相互作用关系,并进行京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠结肠病理学改变,并结合16S rRNA测序AAD结肠内容物菌群结构验证网络药理学结果。结果:通过网络药理学从GQT中筛选出238个活性成分作用于276个成分靶点,其中槲皮素、葛根素、汉黄芩素、芹黄素为GQT主要核心成分,AAD疾病靶点1097个,药物-疾病交集靶点127个。蛋白质-蛋白质相互作用网络主要包括蛋白激酶B1(Akt1)、白细胞介素-6(IL-6)及IL-1β等核心靶点,主要富集于IL-17信号通路。通过动物实验验证发现,与空白组比较,模型组结肠结构严重异常,肠道上皮柱状细胞损伤、杯状细胞减少、大量炎症细胞浸润;与模型组比较,GQT高剂量组结肠结构有所改善,但仍存在异常;GQT中、低剂量组和丽珠肠乐组结肠结构明显改善,达到正常水平。GQT可改善AAD肠道菌群结构多样性,在门水平增加厚壁菌门Firmicutes丰度,降低拟杆菌门Bacteroidetes丰度,在属水平增加乳酸杆菌属Lactobacillus丰度,降低普雷沃氏菌属Prevotella与拟杆菌属Bacteroides丰度,其中乳酸球菌属Lactococcus可作为GQT治疗AAD的生物标记物,通过菌群功能代谢预测发现GQT可促进肠道中醋酸与乳酸代谢途径。结论:GQT可能通过槲皮素、汉黄芩素等关键成分作用于Akt1及IL-6等靶点,激活IL-17信号通路,同时改善肠道乳酸球菌属丰度及醋酸、乳酸代谢途径,从而发挥修复肠道屏障的作用来治疗AAD。

基于AMPK-FoxO3a自噬轴探讨葛根芩连汤改善2型糖尿病db/db小鼠肝脏脂质异位蓄积的机制

目的:探讨葛根芩连汤调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-叉头框蛋白O3a(FoxO3a)自噬轴改善2型糖尿病db/db小鼠肝脏脂质异位蓄积的机制研究,为阐明葛根芩连汤的降糖机制及推广应用提供科学依据。方法:选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型db/db小鼠75只及正常db/m小鼠15只予维持饲料喂养1周后检测血糖,随机分为6组,每组15只。正常组(生理盐水0.2 g·kg^(-1))、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1))、葛根芩连汤高、中、低剂量组(31.9、19.1、6.9 g·kg^(-1))及模型组(生理盐水0.2 g·kg^(-1)),连续灌胃给药12周,1次/d,检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变,使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织中磷酸化(p)-AMPK、p-FoxO3a及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、p62蛋白的表达;免疫荧光检测肝脏组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织AMPK、FoxO3a、LC3 mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肝脏组织有病理学改变;模型组小鼠FBG、HbA1c、FINS和FFA水平显著升高(P<0.01);肝脏组织中p-AMPK、p62、HIF-1α蛋白表达水平显著升高,p-FoxO3a、LC3Ⅱ的蛋白表达显著降低(P<0.01);模型组小鼠肝脏组织AMPK mRNA表达显著降低,FoxO3a表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组肝脏组织病变程度减轻;各给药组FBG、HbA1c、FINS和FFA水平有所降低(P<0.01);葛根芩连汤中、高剂量组p-AMPK、p62、HIF-1α蛋白表达有所增加,p-FoxO3a的表达呈剂量依赖性降低,二甲双胍组、葛根芩连汤高剂量组LC3Ⅱ的表达有所升高(P<0.01);给药组AMPK mRNA的表达呈剂量依赖性增加,FoxO3a的表达呈剂量依赖性降低(P<0.01)。结论:葛根芩连汤可改善2型糖尿病db/db小鼠肝脏脂质异位蓄积,可能与调控AMPK-FoxO3a自噬轴相关。

加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠FXR/SHP/PPARα信号通路的影响

目的:该研究拟通过观察加味葛根芩连汤对2型糖尿病(T2DM)模型db/db小鼠肝组织核受体法尼醇X受体/小异源二聚体伴侣/过氧化物酶体增殖物激活受体α(FXR/SHP/PPARα)信号通路相关蛋白表达水平的影响,探讨加味葛根芩连汤可能的作用机制。方法:将30只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1))、加味葛根芩连汤高、中、低剂量组(31.9、19.1、6.4 g·kg^(-1)),每组6只,另取6只m/m小鼠作为空白组,分别给予相应药物灌胃12周。检测小鼠体质量、空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,油红O染色观察肝脏脂质蓄积,过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肝糖原沉积,硫酸铁铵染色观察回肠组织胆固醇沉积,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织FXR、胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、SHP、PPARα蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清游离脂肪酸(FFA)水平。结果:治疗结束后,与空白组比较,模型组小鼠体质量、FBG、FFA、TC、TG、LDL-C水平均显著升高(P<0.01),肝组织内有大量脂滴,肝糖原显著减少,回肠组织内有明显胆固醇堆积,肝组织FXR、SHP、PPARα蛋白表达显著降低,CYP7A1蛋白表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组及加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠体质量、FBG、FFA、TC、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平明显增加(P<0.05,P<0.01),肝细胞脂质蓄积减少,肝糖原显著增加,回肠组织胆固醇减少,肝组织FXR、SHP、PPARα蛋白表达显著增高,CYP7A1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:加味葛根芩连汤可能通过调节FXR/SHP/PPARα信号通路抑制FFA水平,改善T2DM小鼠脂质代谢。

基于NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路介导的巨噬细胞焦亡探究葛根芩连汤对动脉粥样硬化易损斑块的干预机制

目的:探究葛根芩连汤(GQL)通过调控核转录因子(NF)-κB/NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶(Caspase)-1通路介导的巨噬细胞焦亡对动脉粥样硬化(AS)易损斑块的作用。方法:12只正常C57BL/6CNC小鼠作为空白组,60只同品系的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为5组,即模型组、葛根芩连汤低、中、高剂量组(GQL-D、Z、G组)、立普妥组,以高脂饲料喂养造模。空白组、模型组予等体积无菌蒸馏水灌胃;GQL-D、Z、G、立普妥组分别予对应浓度的药物灌胃8周。苏木素-伊红(HE)染色观测主动脉区域斑块情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平,ELISA检测巨噬细胞甘露糖受体(MMR/CD206)/凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、CD206/NLRP3蛋白表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠gasdermin D蛋白C端(C-terminal GSDMD)、gasdermin D蛋白N端(N-terminal GSDMD)、NLRP3、含胱天蛋白酶-1前体(pro-Caspase-1)和NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型小鼠AS病变程度严重,血清IL-1β、IL-18、组织ASC、NLRP3、C-terminal GSDMD、N-terminal GSDMD、pro-Caspase-1和NF-κB p65表达水平明显升高(P<0.05),CD206水平明显下降(P<0.05);与模型组比较,给药各组小鼠主动脉壁AS病变程度有所减轻,血清IL-1β、IL-18、组织ASC、NLRP3、C-terminal GSDMD、N-terminal GSDMD、pro-Caspase-1和NF-κB p65表达水平有不同程度下降,CD206水平不同程度上升,部分组结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GQL对AS易损斑块的干预作用可能是通过调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1通路,减轻其介导的巨噬细胞焦亡来实现的。

葛根芩连汤调控巨噬细胞极化趋势干预ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化易损斑块机制

目的:探究葛根芩连汤调控巨噬细胞极化趋势干预ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)易损斑块的机制。方法:12只正常C57BL/6CNC小鼠作为空白组,60只同品系的ApoE^(-/-)小鼠随机分为5组,即模型组、葛根芩连汤低、中、高剂量组(GQL-D、Z、G组,剂量3.12、6.24、12.48 g·kg·d^(-1))、阿托伐他汀组(西药组),以高脂饲料喂养造模。空白组、模型组予等体积无菌蒸馏水灌胃;GQL-D、Z、G组、西药组分别予对应浓度的药物灌胃8周。生化法检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,大体油红O染色、苏木素-伊红(HE)染色观测主动脉区域斑块分布情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中M1型促炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平和M2型抗炎性因子白细胞介素-13(IL-13)、转化生长因子-β(TGF-β)水平,免疫荧光双标检测巨噬细胞甘露糖受体(MMR/CD206)/精氨酸酶-1(Arg-1)、CD206/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉Arg-1和iNOS mRNA表达水平。结果:与模型组相比,GQL-Z组、GQL-G注和西药组的TG、TC、LDL-C水平明显降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);随着葛根芩连汤浓度的增加,斑块富集区域逐渐缩小,颜色随之变浅,以GQL-G组和西药组染色区域分布最散;给药各组的Arg-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),CD206蛋白表达水平明显升高(P<0.05),iNOS蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Arg-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),iNOS mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:葛根芩连汤对AS易损斑块的干预作用可能与其改善脂质代谢,抑制巨噬细胞M1极化,促进巨噬细胞M2极化,进而改善巨噬细胞炎症微环境有关。

梅国强葛根芩连汤拓展运用思路

举梅国强拓展运用葛根芩连汤之要,以窥其活用经方之斑。论述葛根芩连汤在经脉脏腑整体恒动观的指导下,以主证病机为宗旨,拓展运用,灵活加减,如治疗阳明经脉循经之处,且病机相符之齿龈肿痛、三叉神经痛、痤疮、头痛、下颌关节炎、鼻咽癌放化疗后诸症等,其活用之法,甚是巧妙,临证之运用,疗效颇丰。

基于网络药理学联合分子对接探究葛根芩连汤干预动脉粥样硬化的潜在分子机制

目的:基于网络药理学联合分子对接探究葛根芩连汤(GQL)干预动脉粥样硬化(AS)的潜在分子机制。方法:从中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)筛选GQL中各药材的活性成分及靶点,从7个数据库中查找AS相关基因,确定GQL治疗AS的靶基因。利用Cytoscape 3.8.0构建“成分-靶点”网络。利用STRING建立蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并通过CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点。运用R clusterProfiler对目标基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,预测其富集的信号通路并以多种图可视化展示。最后将活性强度前10位的成分作为配体,与筛选得到AS核心靶点进行分子对接分析,并与阿托伐他汀的结合度进行对比。结果:得到GQL活性成分150个,AS疾病靶点20289个,交集靶点213个。经过筛选,获取核心交集靶点48个,GO和KEGG富集分析发现其功能主要与细胞核受体活动、配体的激活、转录因子活动等有关,富集在流体剪切力与AS、晚期糖基化终产物及其受体(AGE/RAGE)、白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子(TNF)、Toll样受体通路等与AS关系密切的信号通路。分子对接结果显示GQL效应成分与AS核心靶点结合较好,甚至优于阿托伐他汀,结合度最好的5组关系分别是葛根素-TNF,黄芩素-诱导型一氧化氮合酶(NOS2),葛根素-NOS2,芒柄花黄素-NOS2,汉黄芩素-NOS2。结论:以上研究为该经典名方日后进一步探索提供了新思路。

基于GPR119/cAMP/GLP-1通路探讨葛根芩连汤的降糖机制

目的:探讨葛根芩连汤(GGQL)对肠道上皮细胞增殖和凋亡的影响,并通过其对细胞环磷酸腺苷(cAMP),G蛋白偶联受体119(GPR119)表达的影响探讨其对胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的影响和潜在降糖机制。方法:对25只Wistar大鼠按生药23 g·kg^(-1),每天2次予以葛根芩连汤灌胃,每只大鼠每天灌胃6 mL,以制备含葛根芩连汤的血清,连续给药7次。用不同浓度葛根芩连汤含药血清(1%,2.5%,5%,7.5%,10%)培养肠道上皮L细胞系NCI-H716细胞;细胞增殖与活性检测(CCK-8)评估细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中GLP-1,cAMP含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测GLP-1,GPR119 mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GLP-1,GPR119蛋白表达水平。结果:与空白组比较,葛根芩连汤明显减少了NCI-H716细胞的增殖(P<0.05),且随着葛根芩连汤浓度的增加,其抑制作用更加明显;每种浓度的葛根芩连汤均明显促进NCI-H716细胞凋亡(P<0.05),并且与空白组比较,葛根芩连汤明显提高cAMP,GLP-1,GPR119的表达(P<0.05)。葛根芩连汤的作用与其浓度呈正相关,其中10%葛根芩连汤表现出最好的作用。结论:葛根芩连汤可有效抑制NCI-H716的增殖并促进其凋亡,其可能通过上调cAMP,GPR119的表达而促进GLP-1的分泌。

基于细胞信号通路探讨葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎的研究进展

葛根芩连汤是中医经典复方,经现代研究已确证其具有抗炎、抗氧化应激、保护肠黏膜屏障、调节肠道菌群及免疫反应等多种药理作用。溃疡性结肠炎(UC)是病变累及结直肠黏膜的一种慢性特发性炎症性疾病,其病因涉及遗传易感性、肠黏膜屏障损伤、异常免疫反应、肠道菌群紊乱、胆汁酸代谢紊乱等。该文通过查阅文献,梳理了近年来葛根芩连汤治疗UC涉及的相关通路,并阐述其可能的作用机制,为进一步开展临床及基础研究提供思路。通过梳理相关文献发现,葛根芩连汤治疗UC的机制涉及白细胞介素-6(IL-6)/Janus酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路,Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路,Notch信号通路,基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路4条信号通路。葛根芩连汤通过调节多通路下的细胞间分子信息传递,发挥保护肠黏膜屏障、调节机体免疫反应、抗氧化应激等作用,对UC起到显著的治疗作用,同时体现了中药复方多靶点、多机制、多途径的优势。

基于调节肠道菌群探讨清热类方治疗糖尿病的研究进展

糖尿病已成为全球增长最快的公共卫生问题之一,其病理机制复杂,受多重因素影响。人体肠道内有数百万亿的微生物,大致分为益生菌、中性菌、致病菌三类,处于动态平衡,构成复杂的肠道微生态系统,肠道微生态系统的平衡和稳态对维持机体内环境稳定、维系人体健康至关重要。随着高通量测序技术的快速发展,肠道菌群分布不平衡已被证实是促进胰岛素抵抗(IR)进展的重要原因,增加糖尿病的发生风险。近年来,对肠道菌群的调控成为防治糖尿病及其并发症的新途径、新靶点。中医药对糖尿病、肥胖症等代谢性疾病的治疗由来已久,独具特色与优势,但其尚不明确的作用机制限制了中药的现代化、产业化。肠道菌群与宿主之间的和谐共生与中医理论"人与自然和谐统一"相一致,中医药对肠道微生物群的影响逐渐成为当今医学研究的热门领域。有研究认为糖尿病起源于"肠道内热",目前已有一些相关的实验研究和临床研究的文献表明部分清热类方对失衡的肠道菌群具有一定调节作用,为此探讨肠道菌群与糖尿病的关联性,分析清热类方(大柴胡汤、葛根芩连汤、黄连解毒汤、乌梅丸)通过调节肠道菌群防治糖尿病热证的作用机制,以期为治疗糖尿病药物的进一步开发提供新的理论依据和研究线索。

葛根芩连汤三氯甲烷提取物缓解伊立替康所致肠毒性的作用机制分析

目的:基于经典名方葛根芩连汤"解表清里、主协热下利"的功效,制备葛根芩连汤三氯甲烷提取物用于缓解伊立替康所致的肠毒性,为经典名方葛根芩连汤的开发与应用提供实验依据。方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、洛哌丁胺组(阳性药盐酸洛哌丁胺胶囊,0.4 mg·kg^(-1))和葛根芩连汤三氯甲烷提取物高、低剂量组(2.3,1.16 g·kg^(-1))。采用盐酸伊立替康(CPT-11,剂量55 mg·kg^(-1))连续4 d腹腔注射制备小鼠迟发性腹泻模型,正常组注射等体积生理盐水;分别在第5天灌胃给予相应药物,正常组和模型组给予相应体积蒸馏水,连续给药5 d。观察各组小鼠的一般情况,计算腹泻指数。运用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织病理变化,按试剂盒说明书检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),环氧合酶-2(COX-2),细胞间黏附分子-1(ICAM-1),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)的含量。同时,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠结肠组织的Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),核转录因子E2相关因子2(Nrf2),紧密连接蛋白-1(ZO-1),血红素氧合酶-1(HO-1),紧密连接蛋白(Occludin)表达情况。结果:与正常组比较,模型组经腹腔注射CPT-11造模后小鼠体质量显著降低(P<0.01),腹泻指数显著升高(P<0.01),结肠组织中TNF-α,IL-1β,COX-2,ICAM-1,MDA,NO含量显著升高(P<0.01),GSH-Px,SOD显著降低(P<0.01);HE染色显示,模型组小鼠结肠可见大量炎性细胞,结肠黏膜可见缺损、肿胀、出血及炎性渗出;结肠组织Keap1,Nrf2,ZO-1,HO-1与Occludin蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,洛哌丁胺组和葛根芩连汤三氯甲烷提取物高、低剂量组可缓解小鼠体质量降低,且腹泻指数明显下降;TNF-α,IL-1β,COX-2,ICAM-1,MDA,NO水平降低,GSH-Px和SOD含量显著上升;HE染色显示,葛根芩连汤三氯甲烷提取物高、低剂量组细胞紧密排列,胞核清晰;结肠组织屏障功能相关蛋白Keap1,Nrf2,HO-1,Occludin,ZO-1表达升高。结论:葛根芩连汤三氯甲烷提取物可能通过调节炎症及氧化应激来增强肠道屏障功能,进而缓解CPT-11所致迟发性腹泻,可为中药缓解化疗药物的毒副作用提供参考,并且为经典名方的开发提供依据。

葛根芩连汤及配伍调控Nrf2/NQO1信号通路抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激损伤

目的:探讨葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎(UC)大鼠的可能机制,同时讨论缺少药味对葛根芩连汤疗效的影响。方法:采用自由饮用5%葡聚糖硫酸钠盐水溶液诱导UC大鼠模型,雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组(柳氮磺吡啶肠溶片,350 mg·kg^(-1))、葛根芩连汤全方组(17 g·kg^(-1))、全方去甘草组(17 g·kg^(-1))、全方去葛根组(17 g·kg^(-1))、葛根甘草组(17 g·kg^(-1))和黄芩黄连组(17 g·kg^(-1))。用1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)、2,2-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和荧光漂白后恢复技术(FRAP)法评估葛根芩连汤及其不同配伍组体外抗氧化活性;通过比较大鼠体质量变化和记录结肠长度、观察结肠剖面和苏木素-伊红(HE)染色病理组织切片评估给药治疗后各组大鼠结肠组织损伤程度;比色法测定大鼠血清中髓过氧化物酶(MPO)、脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测结肠组织中核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA和蛋白表达的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织坏死,炎症浸润,血清中过氧化物MPO、LPO和MDA含量显著上升(P<0.01),抗氧化酶T-SOD、CAT和GSH活性显著下降(P<0.01),Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA表达均呈下降趋势,Nrf2蛋白表达显著下降(P<0.01),NQO1和HO-1蛋白表达呈下降趋势;与模型组比较,葛根芩连汤及配伍组能改善UC大鼠结肠组织病理损伤和形态结构,显著降低大鼠血清中过氧化物MPO、LPO和MDA水平(P<0.05),提高无葛根组抗氧化酶T-SOD,无甘草组、黄芩黄连组CAT和GSH(P<0.01)活性,增加结肠组织中Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA和蛋白的相对表达,全方组差异明显(P<0.05)。结论:葛根芩连汤对UC大鼠病理损伤具有恢复作用,其机制可能与激活Nrf2信号通路、抑制氧化应激反应有关。葛根芩连汤组方中缺少君药葛根或仅有臣药黄芩和黄连对其治疗UC有较大影响。研究结果可为中药复方临床合理应用及复方配伍机制研究做出有益探索。

葛根芩连汤调控MMP-9/p38 MARK途径修复溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜上皮屏障功能

目的:探讨葛根芩连汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜上皮屏障功能的保护作用,并通过基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路探究其治疗UC的作用机制。方法:48只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(0.3 g·kg^(-1))及葛根芩连汤高、中、低剂量组(2.84,1.42,0.71 g·kg^(-1))。采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液构建UC小鼠模型,葛根芩连汤和柳氮磺吡啶于造模后第8天灌胃给药,连续7 d,正常组给予等量生理盐水处理。末次给药后取结肠组织,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化,免疫组化(IHC)观察结肠组织紧密连接(TJ)蛋白,如闭合蛋白(Occludin),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),MMP-9 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中磷酸化(p)-p38 MAPK,p38 MAPK和MMP-9蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量显著下降(P<0.01),疾病活动指数(DAI)评分显著升高(P<0.01),结肠黏膜上皮破损并可见黏膜和黏膜下层炎细胞浸润明显,Occludin,ZO-1蛋白表达显著降低(P<0.01),TNF-α,IL-1β,MMP-9 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,柳氮磺吡啶组、葛根芩连汤各剂量组小鼠体质量和DAI评分均有明显改善(P<0.05,P<0.01),结肠组织损坏明显改善,Occludin,ZO-1蛋白明显增多(P<0.05,P<0.01),TNF-α,IL-1β,MMP-9 mRNA相对表达量显著下降(P<0.01),p-p38MAPK和MMP-9蛋白表达显著下降(P<0.01),其中葛根芩连汤各组中以中剂量组的变化最为明显。结论:葛根芩连汤能够通过抑制MMP-9和炎性细胞因子TNF-α,IL-1β的表达,阻断p38 MAPK信号通路的激活,增加TJ蛋白的表达,从而修复肠道黏膜屏障功能。

基于Nrf2/TXNIP信号通路探讨葛根芩连汤含药血清对非酒精性脂肪性肝炎的影响

目的:探讨葛根芩连汤(GGQLT)含药血清对游离脂肪酸(FFA)诱导人肝癌细胞HepG2非酒精性脂肪性肝炎(NASH)体外模型的影响。方法:建立HepG2细胞NASH体外模型,使用不同体积分数的GGQLT含药血清及白藜芦醇干预细胞。利用油红O染色检测各组细胞内脂质沉积;采用流式细胞术检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;通过试剂盒检测各组细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)含量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组HepG2细胞内核转录因子(NF)E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)的mRNA表达情况。运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Nrf2、TXNIP的蛋白表达情况。结果:FFA诱导引起细胞内脂质大量堆积。与正常组比较,模型组抗氧化酶GSH-Px和SOD的活性显著降低(P<0.01),TG、ROS和MDA含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,GGQLT各剂量组和白藜芦醇组均可不同程度地升高细胞内SOD的活性(P<0.05,P<0.01),明显降低细胞内ROS、MDA水平(P<0.05,P<0.01);GGQLD高、中剂量组和白藜芦醇组可显著升高GSH-Px的活性(P<0.01),GGQLD中、低剂量组和白藜芦醇组明显降低TG的含量(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,GGQLT高、中剂量组和白藜芦醇组可显著上调Nrf2、HO-1、NQO1的mRNA表达水平(P<0.01),GGQLT各剂量组、白藜芦醇组可明显下调TXNIP蛋白表达水平和Keap1、NF-κB的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。Nrf2-小分子干扰核糖核酸(siRNA)转染细胞后发现,与相应剂量药物的阴性对照(NC)-siRNA组比较,其Nrf2-siRNA组细胞内Nrf2表达显著下调(P<0.01);GGQLT和白藜芦醇对TXNIP、IL-1β的抑制作用被减弱。结论:FFA诱导HepG2细胞内产生ROS和炎症因子,GGQLT可提高细胞的抗炎、抗氧化能力,其作用机制可能与调节Nrf2/TXNIP信号通路相关,进而达到改善NASH的目的。

葛根芩连汤对KKAy糖尿病小鼠TLR4/IKKβ/NF-κB信号通路的影响

目的:观察经方葛根芩连汤对KKAy小鼠部分炎性因子及脂多糖介导的炎症通路中关键靶点的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法:选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠65只及对照C57BL/6J小鼠13只予屏障系统、高脂饲料喂养,随机血糖≥13.9 mmoL·L^(-1),为成模小鼠44只。随机分为5组,每组11只。正常组(生理盐水20 mL·kg^(-1))、阿卡波糖组(3.9 mg·kg^(-1))、葛根芩连汤高、低剂量组(1.82、0.45 g·kg^(-1))及模型组(生理盐水20 mL·kg^(-1)),连续灌胃给药8周,1次/d,系统评价血糖及体质量。末次给药12 h后,摘眼球取血,提取血清及肌肉、肝脏组织。采用半定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及葡萄糖转运子4(GluT4)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肌肉组织IκB磷酸化激酶β(IKKβ)蛋白、核转录因子-κB(NF-κB)及肝组织Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组体质量及血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,阿卡波糖组及葛根芩连汤组能够明显降低体质量及血糖水平(P<0.05,P<0.01)。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α、IL-6含量显著升高(P<0.01),GluT4含量明显下降(P<0.05);与模型组比较,各给药组炎性因子TNF-α、IL-6含量均有不同程度下降(P<0.05,P<0.01),阿卡波糖组与葛根芩连汤高剂量组GluT4含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。Western blot分析显示,与正常组比较,模型组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均有升高(P<0.01);与模型组比较,阿卡波糖组与葛根芩连汤组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:葛根芩连汤可能在调节肠道菌群的基础上,通过下调TLR4通路中关键炎性因子的水平,抑制其激活,提高GluT4的转位及活性水平,从而在一定程度上抑制炎性级联效应,改善2型糖尿病。