壁虎醇提物诱导人喉癌细胞Hep2凋亡的实验研究

本文研究了壁虎乙醇提取物(GEE)诱导Hep2细胞凋亡的作用。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测了GEE对Hep2细胞增殖的抑制作用,发现GEE可呈剂量-时间依赖性的抑制Hep2细胞的增殖,GEE作用24、48、72 h后其IC50值分别为336.858、237.949、188.991μg/mL。Hoechst 33258荧光染色后在显微镜下可观察到Hep2细胞发生了典型凋亡的形态学变化;利用Western blot法证实在Hep2细胞中GEE可诱导caspase-3和抑制VEGF蛋白的表达。这些结果表明GEE可能是通过上调Caspase-3和下调VEGF蛋白的表达诱导Hep2细胞的凋亡。

蛤蚧乙醇提取液影响去势大鼠胫骨TGF-β_1表达的研究

目的:研究在灌服蛤蚧乙醇提取液去势大鼠胫骨中TGF-β1的表达,探讨蛤蚧乙醇提取液防治绝经后骨质疏松症的机理。方法:采用12月龄SD雌性大鼠60只,随机分为对照组、去势组和实验组。去势组和实验组均切除双侧卵巢,实验组给予蛤蚧乙醇提取液灌胃处理;对照组给予假手术处理。3组大鼠分别于术后4、12周,随机各取10只,测定骨密度(BMD)后处死,取右侧胫骨,脱钙后包埋切片,HE染色,计数破骨样细胞;常规SABC法进行免疫组化染色,图像分析灰度值。结果:实验组的全身BMD明显高于去势组,但仍然低于对照组;实验组的破骨样细胞计数与对照组相似,与去势组比较差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1在实验组及对照组的成骨细胞中呈阳性染色,部分骨基质中也有阳性表达,去势组呈阴性表达。结论:蛤蚧乙醇提取液可能诱导骨微环境中TGF-β1表达增加,进而抑制破骨样细胞的生成,有效地预防绝经后骨质疏松的发生。

壁虎醇提物抑制C6胶质瘤细胞增殖作用的研究

目的研究壁虎醇提物(GEE)对胶质瘤C6细胞生长的抑制作用并探讨其分子机制。方法设置空白组、对照组(0.01 mg·m L-15-氟尿嘧啶)和实验组(0.1,0.15,0.2,0.3,0.4 mg·m L-1GEE)。噻唑蓝(MTT)法检测GEE对C6细胞增殖的影响;GEE作用于C6细胞24 h后,倒置显微镜观察C6细胞的形态学变化;Hoechst 33258染色法检测C6细胞核凋亡的变化;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达。结果 GEE作用于C6细胞48 h后,MTT结果显示GEE可抑制C6细胞的增殖,5个剂量实验组的抑制率分别为19.9%,28.7%,63.1%,75.4%,76.3%,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。显微镜下可见典型的凋亡形态学变化。GEE可诱导caspase-9、AIF蛋白表达增加。结论 GEE可抑制C6细胞增殖,可能是通过增加caspase-9、AIF蛋白表达而引起凋亡。

壁虎醇提物对H22肝癌血管新生的抑制作用

目的研究壁虎醇提物(GEE)对H22小鼠肿瘤组织血管新生的抑制作用及其机制。方法建立腋下移植H22肝癌模型,按照体重随机分为5组:模型组(0.9%Na Cl)、对照组(2 mg·kg^(-1)阿霉素)和高、中、低3个剂量实验组(GEE:80,40,20 mg·kg^(-1)),连续腹腔注射10 d,计算抑瘤率;用免疫组化法观察血管内皮细胞标记物(CD34)表达水平,计算新生微血管密度(MVD);以免疫印迹法检测血管内皮生长因子A(VEGF-A)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)的表达。结果高、中、低3个剂量实验组的抑瘤率分别为63.18%,50.91%,44.68%,说明GEE对H22小鼠移植瘤的抑瘤作用较明显。模型组小鼠肿瘤组织MVD为平均每个视野(24.7±4.1)个,与模型组比较,对照组、高、中、低3个剂量实验组的MVD分别为平均每个视野(13.6±3.6),(8.0±1.6),(11.0±1.1),(13.9±1.7)个,其中3个剂量实验组差异有统计学意义(均P<0.01)。模型组、对照组、低中高3个剂量实验组的VEGF-A与β-actin灰度比值平均分别为0.17,0.10,0.01,0.03,0.04;这5组的MMP-2与β-actin灰度比值平均分别为1.68,1.27,0.48,1.15,1.50,而P-ERK与ERK灰度比值平均分别为0.10,0.07,0.06,0.07,0.08,与模型组相比,这4组差异均有统计学意义(均P<0.01),说明GEE组和对照组的VEGF-A、MMP-2、P-ERK蛋白水平均明显减弱。结论 GEE可抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,其抗肿瘤作用机制可能与降低肿瘤组织血管生成相关因子VEGF-A、MMP-2、P-ERK的表达及降低微血管密度有关。